石斛治疗实验性大鼠萎缩性胃炎的医学研究

潘小炎　李天资　周喜汉　尹毅霞　潘兴寿

【摘要】目的探讨石斛治疗慢性萎缩性胃炎(CAG)的疗效及其机制。方法用氨水、乙醇和去氧胆酸钠灌胃法，制成大鼠CAG模型。造模后治疗组以石斛治疗5周，观察血胃泌素（GAS）、生长抑素（SS）和胃黏膜前列腺素E2（PGE₂）的变化情况，并与模型组和对照组比较。结果石斛治疗组治疗前SS 、GAS和PGE2分别为7.95±2.14 ng/L，216.13±77.21 ng/L，1435.10±200.53 pg/mp，均较对照组低（P＜0.01），治疗后分别为9.58±1.01 ng/L，328.53±84.74 ng/L，1715.66±125.49 pg/mp；治疗后除SS外，各观察指标水平均较治疗前高（P＜0.01），与对照组比较差异不大(P＞0.05)。结论石斛可使GAS和 PGE₂增多，对CAG有良好的治疗作用。

【关键词】萎缩性胃炎;石斛;大鼠

文章编号：1003-1383(2009)01-0001-03中图分类号：R 573.32；R285.6文献标识码：A

材料与方法

1.动物及分组采用2 m±2 d龄，体重200±10 g，一级质量标准的雌性远交系Wistar大鼠，由广西医科大学实验动物研究所提供。购回后采用架式笼养，室温为20±2℃，湿度50%～60%，光照明暗各12 h交替，单独空调。先在动物室饲养4 d后随机分为对照组、模型组、石斛治疗组3组，分笼喂养，每组一笼，每笼25只。

2.实验用药物及试制氨水：中国瓶窑医药化工试制厂，批号20060431，现用现配成浓度0.1%氨水；乙醇：纯度＞99.5%，宜兴市钮家化工助剂厂，批号20060113，现用现配成60%乙醇溶液；去氧胆酸钠：Serva公司生产，上海化学试制采购供应站进口分装经销，批号2005618，现用现配成20 mmol/L溶液；石斛煎剂：石斛300 g加水2000 ml于陶瓷皿慢火煎60分钟，过滤备用。

3.实验方法①对照组：不造模，灌服生理盐水；②模型组和石斛治疗组：用0.1%氨水作为饮用水自由饮用；20 mmol的去氧胆酸钠溶液每日灌胃一次，每次2 ml；60%的乙醇每周空腹灌胃2次，每次2 ml。上述三因素共处理16周建立鼠CAG模型；对照组用生理盐水灌胃， 每只5 ml，每日1次， 连续5周。实验进行至16周(治疗前)每组取11只大鼠处死；取标本备检，对照组鼠胃病检无明确病态表现，模型组和石斛治疗组鼠胃病检均符合慢性萎缩性胃炎表现，表示造模成功。③模型组停止造模，灌服生理盐水，石斛治疗组也停止造模，每日每只大鼠灌服石斛水煎剂5 ml，连续5周。

4.标本及化验试制胃泌素（GAS）酶联免疫试剂盒，美国Lifkey公司生产；生长抑素（SS）、胃黏膜前列腺素E2（PGE2）放免试剂盒，第二军医大学神经生物学教研室提供。

5.检测方法①血清GAS含量检测:采用ELISA法，将受实验的大鼠断头处死，取颈动脉血5 ml(分为2管，各2.5 ml，另一管加1 g/l肝素25 μl抗凝和抑肽酶1250 U用作血浆SS检测)，将1管1500 r/min离心5 rain取10 μl血清，分别加入包被好抗原的96孔酶标板的孔板中，每孔中加入GAS抗体50 μl和POD(缓冲液)50 μl，轻轻混匀30 s，封住盖板，室温孵育45 min，弃除混合物，PBS洗涤5次，甩尽板内液体，用吸水纸拍干，加入100 μl的TMB(酶底物)，轻轻混匀10 s，室温孵育20 min，加入100 μl终止液，混匀30 s后，在酶标仪450 nm波长下，测A值，计算血清中GAS含量。

②血浆SS含量检测：采用RIA法，将加入肝素和抑肽酶的全血离心，取血浆。在试管上分别标上管号，标准品管中各加入100 μl不同浓度的标准品，实验管中各加入300 μl待测血浆；所有管中分别加入SS抗血清100 μl和缓冲液200 μl，4℃孵育24 h后，分别加入125I AVP 100 μl混匀，再次4℃孵育24 h，加分离剂500 μl，混匀，室温放置45 min后，4000 r/min离心，20 min，弃上清液，上放免计数仪测定cpm值，由放免数据处理系统绘制标准曲线并计算SS含量。

③胃黏膜前列腺素E2（Prostaglandin E2，PGE2）的测定方法：取出鼠胃，迅速刮取胃黏膜，于液氮中速冻，称重后，放入匀浆器中，加无水乙醇 0.4 ml，轻研磨后，再加入生理盐水 1.6 ml，研磨制成匀浆，离心10 min(3500 r/rain)，取上清液，放-30℃冰箱保存备检。

6.统计学处理计量资料用均数±标准差（-±s）表示，运用SPSS12.0统计软件包进行检验，三组资料比较用F检验，两两比较用LSD检验，P＜0.05为差异有显著性意义。

结果

各组大鼠治疗前后各观察指标变化情况，石斛组治疗前后GAS和PGE2均有下降（P＜0.01），SS治疗后较治疗前有上升，但无统计学意义（P＞0.05），模型组治疗前后GAS和PGE2均有下降但无统计学意义（P＞0.05），对照组治疗前后SS、GAS和PGE2变化不大（P＞0.05），GAS和PGE2石斛组治疗后与模型组治疗后和对照组治疗后比较均有显著性差异（P＜0.01），见表1。SS石斛组治疗后与对照组治疗后比较差异无显著性（P＞0.05）。

讨论

胃黏膜是前列腺素的主要合成场所之一，其中PGE2是其重要的一种，后者有很强的抑制胃酸参傅鞍酌冈分泌、刺激黏液和碳酸氢盐分泌、增加黏膜血流和促使上皮再生等作用，又有增强黏膜抵抗力的作用(细胞保护作用)。PGE2的细胞保护作用与改善胃黏膜血流有关。 PGE2可保持胃黏膜微血管的完整性，减少血管充血，使完好的胃小凹细胞快速移行，修复破坏了的上皮。PGE2对胃黏膜损伤有较好的保护作用，而提高胃黏膜保护能力又具有一定的防治胃癌前病变和胃癌的作用，大量的研究表明，对胃黏膜的保护作用是通过提高内源性PGE2的含量来实现的。GAS是胃酸分泌的主要调节激素，其分子量2100，是含有17个氨基酸的多肽，GAS分泌受胃内pH、进食、胃内压变化、SS和其他胃肠激素及交感神经兴奋等诸多因素的影响，同时GAS分泌又可引起近端胃舒张、胃窦收缩的作用。而SS是一种对外分泌、内分泌、旁分泌及自分泌均起作用的调节肽，对消化系统的生物学作用主要是抑制胃泌素等各种胃肠激素的分泌，亦可抑制胃肠运动和黏膜细胞的增生，减少胃肠道壁血流量，抑制胃酸、胃蛋白酶、胰液分泌。GAS可直接刺激SS分泌，而SS又可抑制GAS的分泌，二者间具有独特的区域性调节作用。近年来对GAS、SS和PGE2在模型动物或患者外周血中含量水平高低有不同的认识，不但其研究结果报道不一致，而且对其在外周血中的含量变化与CAG的关系也有不同的认识。我们的研究结果表明，CAG大鼠SS、GAS和PGE2水平均有下降(P＜0.01)；而且从模型组实验结果来看，由于不给予治疗药物，结果大鼠仍维持CAG的病理状态。

CAG是消化系统常见病，其胃黏膜上皮遭到反复损害后导致固有腺体的减少或消失。CAG属中医的“胃痛”、“痞满”范畴，由于其发病日久，多种致病因素长期损害，病变渐呈复杂化；或因饮食、情志、劳倦、外邪等因素影响反复发作，故常兼见脾阳虚或胃阴亏之证，或有兼热夹湿；而气滞血瘀、热郁湿阻又可蕴结成毒。这些总的形成了CAG的本虚标实、虚实夹杂的病机，因此，对CAG的治疗要针对病因，且标本同治。本实验用单味中药石斛制成水煎剂对CAG大鼠进行实验性治疗。其具有益气健脾、理气活血，兼以补脾阳益胃阴、清胃热祛瘀毒等功效，从而标本兼治，虚实共调，恰中CAG的病机。从现代药理学分析，本方诸药有调节免疫功能、改善胃黏膜血液循环、清除自由基及抑制组织细胞癌变的作用。本实验可以证实，石斛具有使CAG大鼠前列腺素和胃泌素明显增高之功效。由此可以推测石斛对慢性萎缩性胃炎有修复和促进其康复之功效。

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(收稿日期：2008-12-05修回日期：2009-01-23)

(编辑：潘明志英文审校：钟京梓)