高效液相色谱法测定兰索拉唑在健康人血中的浓度

蔡 颖 刘 花 符策浩 张 惠

海南医学院附属医院国家药物临床试验机构，海南 海口 571101

头孢克洛为广谱半合成头孢菌素类抗生素，临床适用于敏感菌所引起的呼吸系统、泌尿系统、耳鼻喉科及皮肤、软组织感染等，头孢克洛在人体内含量的方法国内外都有报道[1]-[4]。本文采用的HPLC 外标法测定头孢克洛血浆药物浓度，方法简便，重现性好，可用于头孢克洛人体药代动力学研究。

1 仪器与试剂

Waters 1525液相色谱仪、Waters 2487检测器（美国）、Waters Breeze3.0工作站，WD-12水浴氮吹仪（杭州奥盛仪器有限公司），XW-80A 旋涡混合器（上海医科大学仪器厂），岛津AX200型电子天平（日本），SZ-Ⅲ型自动三重纯水蒸馏器（上海嘉鹏科技有限公司），PHS-3C 精密pH 计（上海精密科学仪器有限公司），TDZ4-WS 低速台式离心机（长沙湘仪离心机仪器有限公司）。

头孢克洛对照品由中国药品生物制品检定所提供（1304 81-200102，含量：94.0%）。乙腈（美国Fisher 公司生产，色谱纯），甲醇（美国Fisher 公司生产，色谱纯），结晶乙酸钠（天津市大茂化学试剂厂，AR），冰醋酸（广东光华化学厂有限公司，AR），纯化水（海南医学院附属医院国家药物临床试验机构自制）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 流动相：乙腈—甲醇—用冰醋酸调至3.7pH的0.08mol/L 乙酸钠溶液（6：8：86），色谱柱：Agi lent Eclipse Plus C18，3.5um，3.0×150mm，柱温为35℃，紫外检测波长254nm，流速为0.4mL/min。

2.2 血浆样品处理 取肝素化血浆500µl 置于2ml 具塞塑料管中，加入10%三氯醋酸200µl，漩涡混匀60s，16000r/min离心5分钟，取上清液进行20µl 定量进样分析。在上述色谱条件下，头孢克洛的出峰时间约为5.4min，血浆中内源性物质无干扰。

2.3 血浆标准曲线制作 用空白血浆配制相当于头孢克洛浓度分别为0.1、0.25、0.5、1.0、5.0、10.0、20ug/mL 的样品，按“血浆样品处理”项下操作，记录对照品峰面积，以头孢克洛峰面积对样品浓度（ug/ml）作直线回归，线性方程：Y=35.197X-4.6736，线性范围为0.1-20.0ug/ml，相关系数R2＝0.9999。

2.4 方法精密度和回收率 配制含头孢克洛0.25、1.0、10.0ug/ml 血浆标准品数份，分别于1d 内每个浓度平行5份按血浆样品处理方法处理并测定，评价本法测定血浆中头孢克洛含量的回收率及日内精密度。连续3天配制并测定上述浓度样品，考察方法日间精密度。三个浓度的萃取回收率在68.6～71.3%之间，方法的回收率均在98～108%之内，日内RSD 小于4%、日间中、高浓度RSD 均小于10%，低浓度小于20%。符合生物等效性研究的方法学要求。

2.5 稳定性考察 按照标准曲线制备方法，制备低、中、高浓度样品数份，分别置室温、冻存、冻融条件下存放不同时间后，按“2.2”项下方法处理并测定，考察样品放置稳定性，并考察了处理完的溶液的室温稳定性，结果表明经酸化处理后的头孢克洛血浆样品在室温条件下至少能稳定8h；冻存条件（-80℃）下至少能稳定30天；在冻融4周期内含量没有下降。

3 讨论

头孢克洛为广谱半合成头孢菌素类抗生素。其作用机制系通过抑制细菌细胞壁的合成，体外实验证明头孢克洛对临床上多种常见致病菌有抗菌作用，临床适用于敏感菌所引起的呼吸系统、泌尿系统、耳鼻喉科及皮肤、软组织感染等。试验过程中发现头孢克洛在正常人血浆中易降解，而在酸化的血浆中较为稳定，可在血浆分离保存的过程中，将分离后的2ml左右血浆中加入100ul冰醋酸混匀后冻存，本文用HPLC外标法测定人血浆中头孢克洛浓度，结果表明它与内源性杂质分离良好，是一个灵敏、简便、可靠的方法，完全可以满足临床药代动力学以及药物代谢的要求。

[1]石焱，罗佳波，隋淼，宋晓楠，袭荣刚，姚文．头孢克洛片在健康受试者体内的药代动力学和生物等效性[J]．解放军药学学报，2008，24（03）：207－210．

[2]赵明，张逸凡，陈笑艳，李荣琴，钟大放．头孢克洛缓释片在健康人体的药代动力学及生物等效性[J]．中国临床药理学杂志，2003，19（06）：426－429．

[3]杨生，张宏文，王蔚青，潘雯澜．头孢克洛血药浓度测定及其药代动力学研究[J]．中国生化药物杂志，2008，29（05）：329－331．