沉香化滞丸质量标准研究

2010-09-11 08:06郭巧技肖丽和深圳市药品检验所深圳市518029
中国药房 2010年7期
关键词:香附橙皮木香

郭巧技,肖丽和,熊 英(深圳市药品检验所,深圳市 518029)

沉香化滞丸为沉香、牵牛子、枳实等15味药材组成的成方制剂[1],具有理气化滞的功效,用于由饮食停滞引起的胸膈胀满、消化不良、吞酸嘈杂、腹中胀满。原标准收载于《中华人民共和国卫生部药品标准-中药成方制剂》(第九册)[1],但仅收载了丸剂的通则检查。为了提高中成药的检测标准,本研究增加木香、香附、山楂、大黄、厚朴、牵牛子的薄层色谱(TLC)鉴别及橙皮苷的高效液相色谱(HPLC)含量测定。

1 材料

1.1 仪器

P680A型HPLC仪、PDA-100型检测器(美国戴安公司);CP224S型电子天平(德国Sartorias公司);XS205型电子天平(瑞士梅特勒-托利多公司);AS20500A型超声波清洗仪(天津奥特恩斯仪器有限公司,功率500 W,频率40 kHz)。

1.2 试药

去氢木香内酯(批号:1525-200001)、木香烃内酯(批号:1524-200101)、α-香附酮(批号:748-200406)、熊果酸(批号:110742-200314)、大黄酚(批号:0796-200311)、大黄酸(批号:0757-9703)、大黄素(批号:10756-200110)、厚朴酚(批号:0709-200006)、咖啡酸(批号 :0885-200102)、橙 皮苷(721-200211)对照品及木香(批号:120921-200405)、香附(批号:1059-9801)、山楂(批号:121138-200403)、大黄(批号:120902-200408)对照药材均由中国药品生物制品检定所提供;沉香化滞丸(批号:060801、060802、060803,规格:每袋6 g)由甘肃省河西制药有限公司提供,处方中的15味中药由河北安国药业集团有限公司提供;水为超纯水,甲醇为色谱纯,其它试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 TLC鉴别

2.1.1 木香、香附、山楂的鉴别 (1)供试品溶液的制备:取本品6 g,研细,加乙醚30 mL,超声处理20 min,滤过,滤渣备用,滤液挥干,残渣加无水乙醇1 mL使溶解,作为供试品溶液。(2)对照品溶液的制备:取去氢木香内酯、木香烃内酯、α-香附酮、熊果酸对照品,分别加无水乙醇制成每1 mL含1 mg的溶液,作为对照品溶液。(3)对照药材溶液的制备:取木香对照药材0.2 g,香附、山楂对照药材各0.5 g,同法制成对照药材溶液。(4)阴性对照溶液的制备:按处方及制法,分别制成缺木香、香附、山楂的阴性样品,取相当于样品的量,按供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。(5)木香的TLC测定:吸取上述相应溶液各5 μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以甲苯-乙酸乙酯-冰醋酸(10∶1∶0.1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以5%香草醛硫酸溶液,于105℃加热至斑点显色清晰,日光下检视(见图1)。(6)香附的TLC测定:吸取上述相应溶液各10 μL,分别点于同一硅胶G薄层板上使成条状,以甲苯-乙酸乙酯-冰醋酸(10∶1∶0.1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以二硝基苯肼试液,放置片刻,日光下检视(见图2)。(7)山楂的TLC测定:吸取上述相应溶液各5 μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(20∶4∶0.5)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,于105℃加热至斑点显色清晰,置紫外光灯(365 nm)下检视(见图3)。

2.1.2 大黄、厚朴、牵牛子的鉴别 (1)供试品溶液的制备:取“2.1.1(1)”项下的备用药渣,挥干,加甲醇30 mL,超声处理20 min,滤过,滤液蒸干,残渣加无水乙醇1 mL使溶解,作为供试品溶液。(2)对照品溶液的制备:取大黄酚、大黄酸、大黄素、厚朴酚、咖啡酸对照品,分别加无水乙醇制成每1 mL含1 mg的溶液,作为对照品溶液。(3)对照药材溶液的制备:取大黄对照药材1 g,同法制成对照药材溶液。(4)阴性对照溶液的制备:按处方及制法,分别制成缺大黄、厚朴、牵牛子的阴性样品,取相当于样品的量,按供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。(5)大黄、厚朴的TLC测定:吸取上述相应溶液各5 μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以石油醚(30~60℃)-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)的上层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365 nm)下检视(鉴别大黄,见图4A)。再喷以5%香草醛硫酸溶液,于105℃加热至斑点显色清晰,日光下检视(鉴别厚朴,见图4B)。(6)牵牛子的TLC测定:吸取上述4种溶液各6 μL,分别点于同一硅胶G薄层板上使成条状,以二氯甲烷-甲醇-甲酸(100∶9∶4)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%磷钼酸无水乙醇溶液,于105℃加热至斑点显色清晰,日光下检视(见图5)。

图1 木香的TLCFig 1 TLC ofA.lappa

图2 香附的TLCFig 2 TLC of C.rotun

2.2 含量测定

2.2.1 色谱条件 色谱柱:Shim-Pack CLC-ODS(250 mm×4.6 mm,5 μm);流动相:乙腈-水(21∶79);检测波长:283 nm。理论塔板数按橙皮苷峰计算应不低于2 000。

2.2.2 对照品溶液的制备 取橙皮苷对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1 mL含0.1 mg的溶液,摇匀,即得。

2.2.3 供试品溶液的制备[2]取本品适量,研细,取约0.25 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇50 mL,称重,置水浴上加热回流1 h,取出,放冷,再称重,用甲醇补足失重,摇匀,滤过,取续滤液,即得。

2.2.4 线性关系考察 精密吸取不同浓度的橙皮苷对照品溶液各10µL,注入液相色谱仪,记录峰面积。以对照品浓度(X)为横坐标,峰面积积分值(Y)为纵坐标,制备标准曲线,得回归方程为Y=344.37X-1.553 4(r=0.999 4)。结果表明,橙皮苷对照品浓度在0.024 2~0.483 2 mg·mL-1范围内与峰面积积分值呈良好线性关系。

2.2.5 专属性考察 精密吸取橙皮苷对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液各10µL,分别注入液相色谱仪,按含量测定方法测定。结果,阴性对照溶液对试验无干扰。色谱见图6。

图3 山楂的TLCFig 3 TLC of C.pinnati fida

图4 大黄、厚朴的TLCFig 4 TLC of R.palmatum and M.officinalis

2.2.6 重复性试验 取同一批样品6份,按含量测定方法测定。结果,橙皮苷平均含量为15.4 mg·g-1,RSD=0.8%,表明方法重复性良好。

2.2.7 加样回收率试验 取同一批已知含量的样品6份,分别精密加入一定量的橙皮苷对照品,按含量测定方法测定,结果见表1。

2.2.8 稳定性试验 取同一份供试品溶液,自制备后按含量测定方法分别于 0、2、5、9、11 h 进样测定。结果,橙皮苷峰面积的RSD=0.7%,表明供试品溶液自制备后11 h内基本稳定。

2.2.9 样品含量测定 取本品3批,按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液,按上述色谱条件进样测定,结果见表2。

图5 牵牛子的TLCFig 5 TLC of P.nil

3 讨论

笔者采用TLC法对木香、香附、山楂、大黄、厚朴和牵牛子进行定性鉴别,结果表明阴性对照无干扰、专属性强,色谱清晰,特征斑点分离良好,斑点无拖尾现象,可以作为制剂定性鉴别的指标。笔者还考察了不同色谱条件下莪术、三菱的TLC,结果均存在阴性干扰,因此未收载莪术、三菱的TLC鉴别。

图6 高效液相色谱图Fig 6 HPLC chromatogram

表1 橙皮苷的加样回收率试验结果Tab 1 Results of recovery test of hesperidin

表2 样品含量测定结果(n=4)Tab 2Results of content determination(n=4)

香附的TLC鉴别试验过程中,考虑到α-香附酮具有挥发性,因此供试品溶液的制备过程中经乙醚超声处理的时间不宜过长,20 min即可,且滤过后滤液应室温挥干。试验过程中还发现,若点状点样,供试品溶液中α-香附酮的斑点较为扩散,不易于观察;尤其是喷以二硝基苯肼试液,放置片刻,需要观察斑点是否渐变为橙红色时,则更加难以准确判断。因此,确定加大点样量,且必须条状点样。

笔者曾分别考察超声和加热回流2种提取方式,提取时间考察了30、45、60、90 min。结果显示,加热回流60 min的提取效率最高。

在流动相方面,笔者考察了甲醇-醋酸-水(35∶4∶61)[3],分离效果不好;改用乙腈-水(21∶79),供试品色谱中橙皮苷峰与其它色谱峰能达到基线分离,保留时间适中,理论塔板数为6 727。

综上,所建标准可用于沉香化滞丸的质量控制。

[1]中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准-中药成方制剂(第九册)[S].1995:87.

[2]钱 妍,赵春景.反相高效液相色谱法测定胃舒颗粒中橙皮苷的含量[J].中国药房,2005,16(2):140.

[3]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].2005年版.北京:化学工业出版社,2005:132.

猜你喜欢
香附橙皮木香
China’s Approaches to World Development and Peace
西北大学木香文学社
橙皮糖
阅读木香
“营养高手”橙皮酱
治胃寒痛
橙皮苷对小鼠耐缺氧能力的影响
陈皮四物片中橙皮苷的含量测定
对 《中国药典》2010年版一部含香附制剂质量控制的探讨
近红外光谱法快速测定木香中木香烃内酯与去氢木香内酯的含量