甘草提取物、石见穿提取物、紫参汤对四氯化碳致小鼠急性肝损伤的保护作用的比较

郭雷，李慧，王振华，郑秋生

（石河子大学药学院／新疆特种植物药资源教育部重点实验室，石河子832003）

甘草提取物、石见穿提取物、紫参汤对四氯化碳致小鼠急性肝损伤的保护作用的比较

郭雷，李慧，王振华，郑秋生

（石河子大学药学院／新疆特种植物药资源教育部重点实验室，石河子832003）

甘草提取物，石见穿提取物和紫参汤对四氯化碳致小鼠急性肝损伤的保护作用的比较。采用腹腔注射0．2%四氯化碳玉米油溶液10mL／kg造成小鼠急性肝损伤模型，采用赖氏法测小鼠血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）和天门冬氨酸氨基转移酶（AST）活性，可见光法测定过氧化氢酶（CAT）活力，以TBA比色法测定血清和肝组织匀浆中超氧化物歧化酶（SOD）活性，以及丙二醛（MDA）含量。结果显示紫参汤可显著降低四氯化碳致肝损伤小鼠血清ALT和AST水平升高，明显降低肝脏MDA含量，提高肝匀浆和血清SOD活性。由此可知，紫参汤对四氯化碳致小鼠急性肝损伤有一定的保护作用，且药效优于单用甘草或石见穿。其机制可能与抑制脂质过氧化有关。

甘草；石见穿；紫参汤；急性肝损伤

甘草（Glycyrrhiza）是豆科甘草属多年生草本植物甘草的根及根茎［1］，甘草性平，味甘，有补脾益气、清热解毒、止咳祛痰、缓急定痛、调和诸药等功效［2］，其有效成分具有保肝作用。石见穿［3］（Salviachinensis Benth）为唇形科（Labiatae）鼠尾草属植物，亦名小丹参、华鼠尾草、紫参等，石见穿的主要化学成分有三萜、酚酸、甾醇等［4，5］。临床报道用于治疗急慢性肝炎效果显著。紫参汤处方组成为：石见穿（三钱）（10g）、甘草 （八钱）（24g），先煮石见穿，后入甘草，温服。功能主治：补脾益气，清热解毒，散结消肿。用于急慢性肝炎及其所致脘腹胀痛等的治疗。全方药虽两味，然配伍精当，药简力专。紫参汤现用于治疗急慢性肝炎及肝硬化，有较好疗效。本研究拟采用四氯化碳（CCl4）致小鼠急性肝损伤模型实验法［6］，研究甘草提取物、石见穿提取物、紫参汤对小鼠急性肝损伤的保护作用，比较其药效大小，以评价药物对肝脏的保护作用，为其临床应用提供试验药理学基础。

1 材料与方法

1．1 实验材料与仪器

甘草、石见穿（购于新疆参茸中药饮片有限公司）；四氯化碳（分析纯）；玉米油（金龙鱼，西安嘉里油脂工业有限公司）；谷丙转氨酶（GPT／ALT）比色法试剂盒、谷草转氨酶（GOT／AST）比色法试剂盒、超氧化物歧化酶（SOD）试剂盒、丙二醛（MDA）试剂盒、蛋白定量试剂盒、过氧化氢酶（CAT）试剂盒（均购自南京建成生物工程研究所，20080430）、联苯双酯滴丸（浙江医药股份有限公司新昌制药厂，061201）。全自动酶标仪（Thermo 3001VARIOSKAN FLASH）；AR－2140型万分之一电子天平（梅特勒－托利多仪器有限公司制造）。

1．2 动物

昆明种小白鼠，体重25g左右，由石河子大学实验动物中心提供。

1．3 实验方法

1．3．1 剂量设置，药物提取，分组及给药

人用剂量为总生药量34g／人／天，合0．56667 g／kg（60公斤体重），计小鼠用量为5g／kg（低剂量）和15g／kg（高剂量）。给药体积分别为0．2mL／10 g体重和0．6mL／10g体重，给药浓度分别为0．25 g／mL和0．75g／mL。紫参汤提取：取甘草240g、石见穿100g生药，粉碎，加入3倍体积纯水，回流提取30min，布氏漏斗过滤，收集滤液。如上方法，残渣加2倍量水回流提取2次，合并滤液，减压蒸馏，浓缩为0．75g／mL原液备用。甘草提取：同上述方法，称取甘草生药提取，再浓缩。石见穿提取：同上述方法，称取石见穿生药提取，再浓缩。健康小鼠90只，雌雄各半，随机分成九组，分别给予药物或纯水0．2mL／10g体重（低剂量）和0．6mL／10g体重（高剂量）：（1）空白对照组，10只，每日灌胃，给予纯水；（2）模型组，10只，每日灌胃，给予纯水；（3）甘草提取物低剂量组（合生药量5g／kg），10只，每日灌胃，给予稀释3倍的甘草提取物；（4）甘草提取物高剂量组（合生药量15g／kg），10只，每日灌胃，给予甘草提取物原物；（5）石见穿提取物低剂量组（合生药量5g／kg），10只，每日灌胃，给予稀释3倍的石见穿提取物；（6）石见穿提取物高剂量组（合生药量15g／kg），10只，每日灌胃，给予石见穿提取原物；（7）紫参汤低剂量组（合生药量5g／kg），10只，每日灌胃，给予稀释3倍的紫参汤提取物；（8）紫参汤高剂量组（合生药量15g／kg），10只，每日灌胃，给予紫参汤原液；（9）联苯双酯阳性对照组，10只，每日灌胃，给予联苯双酯（剂量：150mg／kg）0．2 mL／10g体重。按上述方式灌胃给药，连续5d，末次给药后，除空白对照组外，各组腹腔注射0．2%CCl4玉米油溶液10mL／kg，注射后禁食20h，摘除眼球采血，4000g离心10min，取上层血清待测。采血后立即剖腹，分离肝脏，滤纸吸净血污，取约200mg肝组织，加入10倍量的生理盐水后，匀浆。10000g离心10min，取出上清液冻存备用。

1．3．2 指标测定

血清ALT、AST活性、血清CAT、SOD活性，肝组织匀浆中SOD活性以及MDA含量、蛋白含量均按试剂盒说明书测定。

1．4 统计分析

用SPSS10．0软件进行统计分析处理，所有实验数据以¯χ±S表示，多组间比较用方差分析，两均数比较用t检验。

2 结果与分析

2．1 甘草提取物、石见穿提取物、紫参汤对血清中ALT和AST活性的影响

小鼠腹腔注射0．2%CCl410mL／kg 20h后，ALT、AST的活性明显升高，表明小鼠急性肝损伤造模比较成功。比较各给药组与模型组ALT活力变化情况，阳性对照药联苯双酯最大程度的降低了由于注射CCl4引起的血清ALT活力上升。紫参汤、单用甘草提取物或石见穿提取物都表现出一定的抑制四氯化碳引起的肝损伤作用，但紫参汤效果好于甘草提取物或石见穿提取物单独给药。比较各给药组与模型组AST活力变化情况，紫参汤高剂量组明显降低了由于注射CCl4引起的血清AST活力上升，紫参汤低剂量组效果稍差，甘草提取物低剂量组药效亦明显。各给药组的药效为：紫参汤组＞甘草组＞石见穿组。结果见表1。

表1 甘草提取物、石见穿提取物、紫参汤对CCl4致急性肝损伤小鼠血清中ALT、AST的变化¯χ±STab．1Effects of Glycyrrhiza、Salvia chinensis benth、Zishentang on serum ALT and AST activity in Acute HepaticInjury induced by Carbon Tetrachloride in Mice

2．2 甘草提取物、石见穿提取物、紫参汤对血清中CAT和SOD活性的影响

小鼠腹腔注射0．2%CCl410mL／kg 20h后，给药组与模型组相比，CAT活力降低，给药各组间CAT活性差别不显著。给药组与模型组相比SOD活力升高，给药各组间差别不显著。结果见表2。

表2 甘草提取物、石见穿提取物、紫参汤对CCl4致急性肝损伤小鼠血清中CAT和SOD的影响¯χ±STab．2Effects of Glycyrrhiza、Salvia chinensis benth、Zishentang on serum CAT and SOD activity in Acute Hepatic Injury induced by Carbon Tetrachloride in Mice

2．3 甘草提取物、石见穿提取物、紫参汤对肝脏组织匀浆中MDA，SOD的影响

小鼠腹腔注射0．2%CCl410mL／kg 20h后，模型组与空白组比较，肝组织中MDA的含量明显上升，SOD活力显著下降。各给药组均能抑制MDA含量升高和SOD活力下降。比较各给药组与模型组MDA含量变化看出，紫参汤高剂量组显著降低了由CCl4引起的MDA含量上升。与对照组相比，石见穿提取物高剂量组的SOD活性明显升高，其中，紫参汤低剂量组和石见穿提取物组效果最明显，甘草提取物低、高剂量间无差别，石见穿提取物低、高剂量间差别不显著。结果见表3。

表3 甘草提取物、石见穿提取物、紫参汤对CCl4致急性肝损伤小鼠肝脏匀浆中MDA、SOD的影响¯χ±STab．3Effects of Glycyrrhiza、Salvia chinensis benth、Zishentang on liver homogenate MDA and SOD activity in Acute Hepatic Injury induced by Carbon Tetrachloride in Mice

3 讨论

肝脏在各类物质的代谢中起重要作用，亦是容易生成自由基及过氧化脂质的场所。研究显示：肝损伤是多因素参与的一个复杂病理过程，肝组织细胞的损伤与自由基毒性反应关系极为密切［7］。在肝损伤的病变过程中，多种酶，自由基以及脂质过氧化反应均发生着较大的变化［8］。本实验采用CCl4成功建立了急性肝损伤模型。CCl4是一种选择性的肝毒性物质，是目前诱导肝细胞损伤的常用化学药物［9］。CCl4进入机体内，通过细胞色素P450的作用分解为三氯甲烷自由基（CCl3·），CCl3·既能选择性的损伤小叶中央区的肝细胞，又能迅速与O2结合转化为过氧化三氯甲烷自由基（CCl3O2），引起脂质过氧化反应，破坏细胞膜结构，使肝细胞变性，坏死，细胞内转氨酶，自由基渗入血液而使活性升高。

SOD能催化自由基进行歧化反应，使自由基不能与膜脂质和膜蛋白进行二次反应，阻止其破坏肝细胞。MDA是脂质过氧化的主要降解产物，反应肝脏脂质过氧化水平，并能严重损伤肝细胞膜结构，导致肝细胞进一步损伤。因此，MDA含量可间接反应肝细胞损伤程度，其升高在一定程度上说明了肝脏受损的程度。ALT、AST为氨基酸代谢中的重要酶，存在于肝细胞内，肝细胞受损伤时，细胞膜结构破坏，通透性改变，可从细胞内逸出细胞外而进入血循环中，此时血清ALT、AST较正常增高，血清ALT、AST升高是肝实质严重损害的必然结果，故血清ALT、AST的升高在一定程度上反应了肝细胞损伤的程度［10］，且CCl4造模引起的动物ALT、AST的升高与肝细胞损伤程度呈平行关系［11］。

实验结果显示，甘草提取物，石见穿提取物，紫参汤可不同程度的降低肝损伤所致血清ALT、AST的升高，降低损伤肝组织MDA的含量。甘草，石见穿，紫参汤对四氯化碳引起的急性肝损伤均有保护作用，但由甘草和石见穿以合适比例配伍出的紫参汤效果最明显，且效果优于单用甘草或单用石见穿。其机制可能与清除自由基，抑制脂质过氧化有关。

综述所述，紫参汤对四氯化碳引起的急性肝损伤具有保护作用，且效果优于单用甘草或石见穿。

［1］国家药典委员会．中国药典［S］．北京：化学工业出版社，2005：59．

［2］乔五忠，王艳辉，李美粉，等．利用大空吸附树脂精制甘草酸的研究［J］．中成药，2006，28（6）：794－796．

［3］Jiangsu New Mecidal College．Dictionary of Chinese Materia Medica（中 药大辞典）［M］．Shanghai：Shanghai Science and Technology Publishers，1995：597－598．

［4］黎莲娘．鼠尾草植物中新的缩酚酸［J］．有机化学，1993，13（3）：303－304．

［5］TOPCU G．Bioacfive triterpenoids from Salvia species［J］．J Nat Prod，2006，69（3）：482－487．

［6］李艳辉，肖恩华．实验性肝损伤模型的建立和评价［J］．放射学实践，2006，21（10）：1075－1077．

［7］杨牧祥，王志波，于文涛，等．中药酒速愈对急性酒精中毒小鼠肝脏氧化酶的影响［J］．中国中西医结合急救杂志，2006，13（3）：162－164．

［8］陈梁，朱锦善，任建平．柴胡疏肝散对四氯化碳所致大鼠急性肝损伤的防治作用［J］．中西医结合肝病杂志，2004，14（1）：42－43．

［9］王佩，吴锡铭．异甘草镁对大鼠四氯化碳慢性肝损伤的治疗作用［J］．中国新药与临床杂志，2006，23（12）：833－836．

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［11］王颖，赵艳景，叶波平，等．鳖肝刺激物类似物对致小鼠急性肝损伤的保护作用［J］．中国药科大学学报，2005，36（4）：368－372．

Comparison of Hepatoprotective Effect of Glycyrrhiza，Salvia Chinensis Benth，Zishentang on Acute Hepatic Injury Induced by Carbon Tetrachloride in Mice

GUO Lei，LI Hui，WANG Zhenhua，ZHENG Qiusheng
（School Pharmacy of Shihezi University／Key Laboratory of Xinjiang Endemic Phytomedicine Resources，Ministry of Education，Shihezi 832003，China）

To determine and compare the protective effects of Glycyrrhiza，Salvia chinensis benth，and Zishentang on the liver damage induced by carbon tetrachloride．Intraperitoneal injection of 0．2%carbon tetrachloride（soluted in corn oil）10mL／kg was used to cause the acute liver damage in mice．In order to estimate the liver damage degree，the serum alanine aminotransferase （ALT），aspartate aminotransferase（AST），the tisse malondialdehyde（MDA），superoxide dismutase（SOD）levels were measured by test kits．The results displayed that Zishentang，Radix Glycyrrhizae and Herba Salviae Chinensis all reduced the elevation of ALT and AST significantly in serum induced by carbon tetrachloride．Zishentang was more effective than Radix Glycyrrhizae or Herba Salviae Chinensis alone．Therefore，Zishentang possesses protective effects on acute liver injury induced by carbon tetrachloride，and more effective than treated by Glycyrrhiza or Salvia chinensis alone．and its mechanism may be associated with inhibiting lipid peroxidation．

Glycyrrhiza；Salvia chinensis benth；Zishentang；acute liver injury

R963

A

2010－03－10

国家科技支撑计划项目（2006BAI06A18－22）

郭雷（1983－），男，硕士生，专业方向为研究肿瘤与细胞药理。

郑秋生（1967－），男，教授，博士生导师，从事肿瘤与细胞药理研究。