凝胶色谱净化—高效液相色谱法测定辣椒中的辛硫磷残留量

周宏霞，韩喜东，于军强，颜显辉，于佳玉

（荣成出入境检验检疫局，山东荣成264300）

凝胶色谱净化—高效液相色谱法测定辣椒中的辛硫磷残留量

周宏霞，韩喜东，于军强，颜显辉，于佳玉

（荣成出入境检验检疫局，山东荣成264300）

研究了辣椒中辛硫磷的液相色谱分析方法。样品经乙腈提取，凝胶色谱净化后，用高效液相色谱-二极管阵列检测器在280nm波长下进行测定。实验结果表明：辛硫磷在0.1～10.0mg/kg范围内回归方程为Y=22.2638209X-0.8016，相关系数为0.99996，方法检出限为0.02mg/kg，平均回收率为80.8%～96.6%，变异系数为0.80%～4.45%。方法的灵敏度、精密度和检测限都符合农药残留分析的要求。

高效液相色谱法，凝胶色谱，辛硫磷，辣椒

辛硫磷（Phoixm），又名肠硫磷、倍睛松，化学名称O，O-二乙基-O-a-氰基亚苄氨基氧硫逐磷酸酯，为高效、广谱、低毒的杀虫剂，被认为是甲胺磷、乐果等高毒农药的替代产品。辛硫磷能与多种农药进行混配，在果树生产上应用广泛，我国以及美国、澳大利亚、欧盟等许多国家和国际组织都制定了该农药的最大残留限量标准0.05mg/kg［1］。国内外有关辛硫磷的残留分析方法主要是气相色谱法，但是由于辛硫磷是一种热不稳定性农药，高温下易分解，给气相色谱分析带来一定困难［2］。近年来国内使用高效液相色谱法分析辛硫磷农药制剂及其残留已有报道［2-6］，但是有关辣椒中辛硫磷的液相测定未见报道。本研究采用乙腈提取，经凝胶色谱净化，建立了辣椒中辛硫磷的液相检测方法。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

乙睛、乙酸乙酯、环己烷、甲醇 均为色谱纯；水超纯水；氯化钠 分析纯；辛硫磷标准品 100!g/mL，中国环境检测技术中心提供，准确移取1mL辛硫磷标准品于5mL棕色容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，配制成20!g/mL标准储备液，置于冰箱保存，使用时再稀释成适当浓度的标准工作液。

HP1100高效液相色谱仪 配备有G1311A型四元泵、G1322A型脱气机、G1313A型自动进样器、G1316A型柱温箱、二极管阵列检测器及Agilent化学工作站；均质器 瑞士 BUCHI旋转蒸发仪；J2 Scientific GPC凝胶色谱仪，氮吹仪，旋涡混合器。

1.2 实验方法

1.2.1 提取 称取25g均匀样品（精确至0.01g）于100mL烧杯，加入50mL乙腈后转移至高速匀浆机中，高速均浆1min后，过滤至100mL具塞刻度量筒中（量筒内已放置5～7g NaCl）。盖上塞子，剧烈振荡1min，静置，准确吸取20mL上层清液于蒸馏瓶中，40℃旋转蒸发至近干，后氮气吹干。

1.2.2 净化 用10mL乙酸乙酯∶环己烷（1∶1）溶解提取物，并转移至GPC自动进样系统配套试管中。样品通过5mL样品环注入GPC柱，泵流速5.0mL/min，弃去0～9.5min流分，收集9.5～14min流分，15～20min冲洗GPC柱。洗脱液为乙酸乙酯-环己烷（1∶1，V/V）混合溶液。将收集的流分旋转蒸发浓缩至约1mL，用氮气吹至近干，以甲醇∶水（70∶30）溶解并定容至1mL，过0.45!m的滤膜，待HPLC分析。

1.2.3 色谱条件 Agilent Extend-C18色谱柱（150mm ×4.6mm，i.d.，5!m）；流动相：V（甲醇）∶V（水）= 70∶30；流速为 1.0mL/min；柱温：30℃；检测波长：280nm；进样量：10!L。在上述条件下辛硫磷的保留时间约为10.554min（见图1）。

图1 辛硫磷标样色谱图

2 结果与分析

2.1 样品提取试剂的选择

实验中提取辛硫磷常用的溶剂有乙酸乙酯、乙腈，经过实验对比发现，乙腈的萃取效果优于乙酸乙酯，且基质干扰小，因此选用乙腈提取。

2.2 凝胶色谱收集时间的选择

取高浓度辛硫磷标准品于GPC自动进样系统配套试管中，用氮气吹至近干，用10mL乙酸乙酯∶环己烷（1∶1）溶解，通过5mL样品环注入GPC柱，泵流速5.0mL/min，得到辛硫磷的色谱图（见图2）。根据色谱图的出峰时间选定从上样9.5min开始收集，直到14min。

图2 辛硫磷凝胶色谱图

2.3 色谱条件的选择

2.3.1 色谱柱的选择 根据辛硫磷的性质选择了反相C18柱，对比几种不同型号的色谱柱进行比较发现，Agilent Extend-C18色谱柱（150mm×4.6mm）效果令人满意。

2.3.2 流动相的选择 选用Agilent Extend-C18色谱柱，对比乙腈-水体系与甲醇-水体系作流动相，发现甲醇-水体系有利于样品中各个峰的分离。并且对甲醇-水的比例进行了实验，结果表明，当流动相为V（甲醇）∶V（水）=7∶3时，既能满足分离要求，又能满足样品检出限要求。

2.3.3 检测波长 在200～400nm范围内对辛硫磷进行波长扫描，并绘制波长曲线，辛硫磷在280nm处有最大吸收，因此本实验选用280nm为检测波长。

2.4 线性相关

将辛硫磷标准贮备液用流动相稀释成0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、5.0、10.0!g/mL标准工作液，经0.45!m滤膜过滤，取10!L进样测定，外标法定量。以辛硫磷质量浓度p（!g/mL）为横坐标，以相应的峰面积y为纵坐标，绘制工作曲线（见图 3）。辛硫磷在0.1～10.0!g/mL之间有很好的线性关系，曲线的回归方程为：Y=22.2638209X-0.8016，R2=0.99996，其中Y为纵坐标峰面积，X为横坐标辛硫磷的质量浓度（!g/mL）。

图3 标准曲线

2.5 方法的准确度与精密度

在辣椒空白样品中分别加入高、中、低3个水平的标准溶液，放置1h，使标准溶液被样品充分吸收。按样品处理步骤操作，高效液相色谱测定，结果见表1。

表1 辣椒中添加辛硫磷标准溶液的平均回收率及变异系数

3 结论

本方法流动相选择甲醇+水=7+3（V/V），色谱柱选用 Agilent Extend-C18色谱柱（150mm× 4.6mm，i.d.，5!m），1.0mL/min流速时，基线平稳，峰形对称，与其他杂质能够分离完全。将辣椒进行不同水平的添加回收率实验，添加浓度为0.02、0.1、1.0mg/kg，其回收率为80.8%～96.6%，变异系数为0.8%～4.45%，符合农药残留分析的要求。在上述选定的色谱条件下，辛硫磷的仪器最小检出量为0.05ng。在实验条件下，对辛硫磷在辣椒中的最低检出浓度进行了研究，结果发现本实验条件下，辛硫磷的最低检出浓度为0.02mg/kg.而辛硫磷的最大残留限量标准为0.05mg/kg，本方法能满足分析的要求。

［1］李静，徐国锋，聂继云，等.分散固相萃取一气相色谱法测定水果中辛硫磷农药残留量［J］.中国果树，2008（1）：64-66.

［2］贺敏，戴荣彩，余平中，等.小麦和土壤中辛硫磷残留量的液相色谱分析方法研究［J］.华北农学报，2008，23（2）：210-213.

［3］邓丛蕊，刘思全，杨秀利.液相色谱法同时测定辛硫磷和氯氰菊酯［J］.光谱实验室，2003，20（1）：59-61.

［4］张兴国.20%三唑·辛乳油的液相色谱分析［J］.农药，2004，43（5）：236-237.

［5］郭丽，梁沛，刘艳，等.反相高效液相色谱法同时测定水样中辛硫磷和氯氰菊酯［J］.分析实验室，2005，24（5）：12-14.

［6］王勇，周宏深，同秋成，等.高效液相色谱法测定浓缩胡萝卜汁中辛硫磷残留量［J］.分析实验室，2006，25（6）：81-83.

Analysis of residue of phoxim in hot pepper by GPC and HPLC

ZHOU Hong-xia，HAN Xi-dong，YU Jun-qiang，YAN Xian-hui，YU Jia-yu
（Rongcheng Entry-Exit Inspection and Quarantine Burea，Rongcheng 264300，China）

A method for the determination of phoxim in hot pepper was established by HPLC.Residue of phoxim was extracted from samples with acetonitrile，cleaning-up was performed by GPC.The target compound in samples was determined by HPLC with PDA detector at wavelength 280nm.The results showed that the linear range of phoxim was 0.1～10.0mg/kg and regression equation was Y=22.2638209×-0.8016（R2=0.99996）.The limit of quantification was 0.02mg/kg in hot pepper.The average recoveries of phoxim from hot pepper were 80.8%～96.6%，The coefficients of variation were 0.80%～4.45%.The method proved sensitive，accurate and precise for pesticide residue analysis.

HPLC；GPC；phoxim；hot pepper

TS207.3

A

1002-0306（2010）07-0355-03

2009-06-15

周宏霞（1981-），女，硕士研究生，研究方向：食品检测分析。