柿叶黄酮对载脂蛋白E缺失小鼠动脉粥样硬化的影响

陈英珠 白卫娜 吴 萌 张小兵 闫静辉 (河北省科学院生物研究所，河北 石家庄 050051)

柿叶黄酮对载脂蛋白E缺失小鼠动脉粥样硬化的影响

陈英珠 白卫娜 吴 萌 张小兵 闫静辉 (河北省科学院生物研究所，河北 石家庄 050051)

目的 观察柿叶黄酮对动脉粥样硬化形成的影响。方法 高脂饲料饲喂的ApoE-/-缺失小鼠，灌胃给予柿叶总黄酮，观察其对胸腹主动脉动脉粥样硬化形成的影响，检测血清血脂和丙二醛含量。结果 柿叶总黄酮连续灌胃16 w，与模型组比较，柿叶黄酮组形成纤维状斑块的小鼠较多，动脉粥样硬化斑块面积与管腔面积比从15%降低至7%，血清中丙二醛减少33.56%，对血脂无显著影响。结论 柿叶总黄酮显著降低动脉粥样硬化的形成，具有抗氧化功能。

柿叶黄酮;动脉粥样硬化;丙二醛

动脉粥样硬化是一种老年常见性疾病，在我国，发病率逐年上升，并且有年轻化趋势。欧阳平〔1〕等发现一定剂量的柿叶黄酮在体外能够分别对低密度脂蛋白(LDL)刺激下和基础状态下的大鼠血管平滑肌细胞增殖产生明显的抑制作用，但是，柿叶黄酮对动脉粥样硬化的影响尚不十分清楚。本文以载脂蛋白E缺失(ApoE-/-)小鼠为材料，研究柿叶黄酮对胸腹主动脉动脉粥样硬化的作用，为柿叶黄酮的进一步开发奠定基础。

1 材料与方法

1.1 材料 ApoE-/-小鼠购自北京大学医学部实验动物中心，高脂饲料由上海斯莱克实验动物有限公司提供(含21%猪油和0.15%胆固醇)。柿叶黄酮由本研究室自制，纯度25%，其他试剂均为国产分析纯。

1.2 方法

1.2.1 实验分组 实验分为三组，对照组、模型组和柿叶黄酮组。对照组8只，选用8 w的雄性C57BL/6小鼠，正常饮食。8 w的雄性ApoE-/-小鼠26只，随机分成模型组和柿叶黄酮组，每组13只，自由饮水，饲喂高脂饲料。柿叶黄酮组灌胃给予30 mg·d－1·kg－1体重柿叶黄酮，对照组和模型组给予灌胃生理盐水。

1.2.2 血脂测定 连续灌胃16 w后，小鼠经麻醉后眼眶采血，分离血清。按常规方法，应用日立-7170全自动生化仪测定甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)和极低密度脂蛋白(VLDL)。

1.2.3 病理学观察 连续灌胃16 w后，小鼠经麻醉后采血、处死，取胸腹主动脉，生理盐水清洗管腔，樱花冷冻包埋剂(OCT)包埋，冰冻切片，连续横切，片厚8μm，HE染色。普通OLYMPUS光学显微镜观察并采集图像。采用HMIAS-2000高清晰度彩色医学图文分析系统对血管腔面积和动脉粥样硬化总面积进行相对定量分析。

1.2.4 血清丙二醛含量测定 采用南京建成丙二醛测定试剂盒，按照说明书操作。

1.3 统计学分析 采用SPSS13.0统计软件，数据用±s表示，两组间比较采用t检验;多组比较采用单因素方差分析。

2 结果

2.1 动物一般情况 饲养过程中，模型组和柿叶黄酮组各有5只小鼠背部有脱毛现象，但两组间没有明显差异，对照组毛色正常。结果显示，饲养至16 w，模型组和柿叶黄酮组体重无显著差异。见表1。

表1 小鼠体重情况(±s，n=13，g)

表1 小鼠体重情况(±s，n=13，g)

组别 8 w体重 16 w 26.06±1.29 30.27±1.70柿叶黄酮组体重模型组26.77±0.87 32.64±1.78

2.2 柿叶黄酮对血脂变化的影响 饲喂高脂饲料16 w，与正常对照组比较，模型组血清中TC、TG和VLDL显著提高(P＜0.05)，说明模型是成功的。但是，与模型组相比，柿叶黄酮组三者无显著差异，表明柿叶黄酮对饲喂高脂饲料16 w的ApoE-/-小鼠血清脂质无显著影响。见表2。

表2 柿叶黄酮对小鼠血脂的影响(±s，n=13，mmol/L)

表2 柿叶黄酮对小鼠血脂的影响(±s，n=13，mmol/L)

与正常对照组比较:1)P＜0.01

组别TC TG VLDL正常对照组3.19±0.06 1.40±0.21 0.27±0.04模型组 40.51±3.471) 3.81±0.421) 1.73±0.191)柿叶黄酮组 35.98±5.291) 3.34±0.631) 1.52±0.281)

2.3 柿叶黄酮对动脉粥样硬化斑块形成的影响 光学显微镜下观察，HE染色结果显示，高脂饲料饲喂16 w时，模型组13只小鼠，9只形成纤维斑块，3只有脂质条纹形成，1只内膜增厚。柿叶黄酮组13只小鼠，5只有纤维斑块产生，3只有脂质条纹形成，1只内膜增厚，4只正常。动脉粥样硬化斑块面积与管腔面积比模型组显著高于柿叶黄酮组(P＜0.05)。以上结果显示，柿叶黄酮明显抑制动脉粥样硬化形成。见表3。

表3 柿叶黄酮对小鼠动脉粥样硬化斑块的影响(±s，n=13)

表3 柿叶黄酮对小鼠动脉粥样硬化斑块的影响(±s，n=13)

与模型组比较:1)P＜0.05

组别 管腔面积(μm2)斑块面积(μm2)斑块面积/0.03柿叶黄酮组 123 927.60±7 170.60 8 449.62±2 761.74 0.07±0.021)管腔面积模型组 137 714.10±15 622.07 23 007.54±7 815.64 0.15±

2.4 柿叶黄酮对血清丙二醛含量的影响 饲喂高脂饲料后，与对照组丙二醛含量〔(22.27±2.19)nmol/m l〕比较，模型组小鼠明显提高〔(35.18±3.89)nmol/ml，P ＜0.05〕，是对照组的1.85倍，柿叶黄酮组血清丙二醛含量略有增加，是对照组的1.24倍〔(24.15±3.18)nmol/ml，P ＜0.05〕。与模型组相比，降低33.56%(P＜0.05)。

3 讨论

有研究表明，口服天然黄酮咖啡酸苯乙酯可以降低ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化斑块的形成〔2〕。柿叶总黄酮包括槲皮素、山奈酚两种苷元和金丝桃苷、异槲皮苷和黄芪苷等三种糖苷〔3〕。本实验结果显示，连续灌胃柿叶总黄酮16 w，与模型组比较，形成纤维状斑块小鼠的数量明显减少，动脉粥样硬化斑块面积与管腔面积比由0.15降至0.07，证实口服柿叶总黄酮也可以抑制高脂饲料饲喂的ApoE-/-小鼠胸腹主动脉动脉粥样硬化斑块的形成。肥胖和高血脂都是动脉粥样硬化形成的危险因素，本实验模型组和柿叶黄酮组体重和血脂无显著差异，表明柿叶黄酮对体重和血脂无影响。

脂质的过氧化在动脉粥样硬化发展中占据重要的位置。含有抗氧化物质的红酒、绿茶等可能有抗冠心病的功能〔4〕。过氧化脂质发生过程中伴随有毒物质丙二醛的产生。而丙二醛通常作为氧化应激的一个指标〔5〕。丙二醛修饰的LDL能够被组织中的巨噬细胞吸收，导致泡沫细胞形成进而发展成动脉粥样硬化斑块〔6〕。杨建雄〔7〕等对柿叶黄酮的体外抗氧化作用进行了研究，发现其可以清除·OH，从而抑制·OH所导致的丙二醛的产生。本实验证实柿叶黄酮可以降低ApoE-/-小鼠血清中丙二醛含量，在体内也有显著的抗氧化作用。这可能是它抗动脉粥样硬化的因素之一。

1 欧阳平，贝伟剑，赖文岩，等.柿叶黄酮抑制LDL刺激的大鼠血管平滑肌细胞增殖〔J〕.中药材，2004;27(8):600-2.

2 Hishikawa K，Nakaki T，Fujita T.Oral flavonoid supplementation attenuates atherosclerosis development in apolipoprotein E-deficientmice〔J〕.Arterioscler Thromb Vasc Biol，2005;25(2):442-6.

3 马 彦.柿叶的化学成分研究进展〔J〕.中山大学研究生学刊:自然科学与医学版，2004;25(1):10-6.

4 Vinson JA，Dabbagh YA.Effect of green and black tea supplementation on lipids，lipid oxidation and fibrinogen in the hamster:mechanisms for the epidemiological benefits of tea drinking〔J〕.FEBSLett，1998;433(1-2):44-6.

5 Esterbauer H，Schaur RJ，Zollner H.Chemistry and biochemistry of 4-hydroxynonenal，malonaldehyde and related aldehydes〔J〕.Free Radic Biol Med，1991;11(1):81-128.

6 Holvoet P，Vanhaecke J，Janssens S，et al.Oxidized LDL and malondialdehyde-modified LDL in patientswith acute coronary syndromes and stable coronary artery disease〔J〕.Circulation，1998;98(15):1487-94.

7 杨建雄，原江锋，李发荣，等.柿叶黄酮的体外抗氧化作用研究〔J〕.营养学报，2003;25(2):215-7.

R2

A

1005-9202(2011)12-2233-02

陈英珠(1962-)，女，博士，副研究员，主要从事中药药理研究。

〔2010-10-19收稿 2011-01-06修回〕

(编辑 袁左鸣/曹梦园)