流感病毒检验方法对比观察

汪伟生

目前流感病毒实验室检验方法主要有胶体金免疫层析技术(GICA)和RT－PCR检测技术，可用于早期流感检验且检测时间短[1]。我们于2009年11月对某小学内暴发的流感疫情中的病例分别采用GICA和RT－PCR检验方法进行检验，观察这两种方法检验结果的一致性，探讨其在突发性公共卫生事件以有临床诊断中的应用价值。

1 资料与方法

1.1 样本来源 2009年11月，我市某小学发生流感局部显性，共有38例出现急性呼吸道感染，其中男20例，女18例，年龄6～10岁。患儿表现为发热(体温超过38℃)、不同程度的咳嗽和咽痛。

1.2 实验材料 流感胶体金快速诊断试剂条(由美国基代尔公司生产)，RNA提取试剂Rneasy Mini Kit、RNA扩增试剂One Step RT－PCR Kit、(均由 QIAGEN 公司生产)，PCR 扩增仪MJ Research PTC-200(由美国MJ RESEARCH公司生产)。

1.3 样本选取方法 用压舌板抵信患者舌根部，用2根咽拭子同时并列探入咽部，取扁桃体隐窝处的上皮细胞组织。一根咽拭子浸入pH值为7.4～7.6的Hank’s液中，另一根咽拭子浸入胶体金快速检测裂解液中。

1.4 实验检验方法

1.4.1 GICA法 充分搅拌盛有样本的细胞裂解液，以吸管取3～4滴裂解液滴入检测卡加样孔中，于15 min后观察检验结果。如检测区与对照区分别一条红色带，表明结果为阳性;如对照区有一条红色带而检测区无红色带，表明结果为阴性。

1.4.2 RT-PCR法 取100 μl混合均匀的采样液，注入微量离心管内用于提取样本核酸。在PCR扩增仪中放入PCR反应管，用凝胶成像系统分析观察检测结果及其电泳表现。

1.5 统计学方法 采用SPSS 13.0软件进行统计学分析，实验数据以χ2检验，P＜0.05时有统计学意义。

2 结果

采用GICA法进行现场快速检验，38份样本中28份检验结果为阳性，阳性率73.68%。采用RT-PCR法结果，38份样本中30份检验结果为阳性，阳性率78.95%。经比较，GICA法与RT-PCR法样本检验结果一致的样本数为25份，检验结果差异无统计学意义(P＞0.05)。

3 讨论

流感症状与普通感冒极为相似，很容易被误诊并在人群密集场所形成暴发式的疫情，引起滥用抗生素等一系列问题[2]。流感病毒检验的传统方法是进行病毒培养，可用于病毒分型和抗原变异分析。但是这种方法检测历时长，操作步骤复杂，易受检验人员素质因素的影响。RT-PCR检验方法对实验室条件有一定的要求，需要借助大型检验仪器，检验成本高[3]。GICA检验技术是一种新型的以胶体金为示踪标记物用于检验抗原抗体反应技术。这一技术具有操作简便、检验用时短、成本低，不易受人为因素影响等突出优点。在本组资料中，GICA法的阳性率略低于RT-PCR法，但检验结果差异无统计学意义。总之，GICA检验方法是流感病毒疫情与临床检验的有价值的筛查手段。

[1]中国疾病预防控制中心.全国流感/人禽流感监测实施方案(2005～2010年度).15.

[2]朱玉芝，杨明，苏杨.流感病毒快速检测分离鉴定新技术的应用.中国公共卫生管理，2006，22(3):233-2341

[3]尤凤兴，居丽雯，张敬平，等.流感病毒快速检测特异性和敏感性研究.检验医学，2009，24(8):598-601.