MT1、MT 2和3-MMP在60例喉癌中的检测及临床意义

张旭

浸润与转移被认为是恶性肿瘤的重要标志性特征之一，其对预后具有十分重要的影响。细胞外基质同基底膜的降解是恶性肿瘤开始浸润与转移迈出的第一步。基质金属蛋白酶(MMPs)包括几个具有重要功能的亚家族成员，其中膜型基质金属蛋白酶(MT-MMP)具有能够降解细胞外基质同基底膜的多种成分的功能，因此MT-MMP在多种肿瘤形成与发展过程中发挥着重要作用［1］。本组采用免疫组化的SABC法，检测了MTl、2和3-MMP在喉癌相关组织中的表达，目的是分析其在喉癌浸润与转移过程中发挥的作用及其临床意义。

1 材料与方法

1.1研究对象 选择于2002年12月至2009年12月期间60例喉癌手术切除标本，均为原发性喉癌患者，所有患者术前均未做过放化疗。其中男性33例，女性27例，年龄在35～82之间，平均58.2±8.5岁。根据淋巴结转移情况进行划分，其中32例为颈淋巴结转移，28例无颈淋巴结转移。根据组织学划分，其中高分化鳞癌10例，中分化鳞癌35例，低分化鳞癌15例。按照原发部位划分，其中20例为声门上型，31例为声门型，9例为声门下型。

1.2免疫组化染色 免疫组化检测的60例喉癌手术切除标本均通过福尔马林固定，取材均在24 h内完成，通过石蜡包埋后连续切片。采用SABC方法进行染色，检测用SABC免疫组织化学所需的各种试剂盒与兔抗人MTl、2和3-MMP的多克隆抗体均购自福建迈新生物工程有限公司，根据试剂盒说明书进行，阳性对照使用我院的乳腺癌阳性切片，阴性对照为PBS，在试验中用于替代第一抗体。MT1、2和3-MMP分子的免疫组化阳性染色表现为细胞浆中出现明显的棕黄色颗粒沉着。

1.3统计学处理 率的比较采用卡方检验方法，P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

癌旁非癌组织与肿瘤组织的MTl、2和3-MMP阳性率见表1，3个分子在肿瘤组织的表达阳性率显著高于癌旁非癌组织(P＜0.01)。

表1 MTl、2和3-MMP在癌组织与癌旁非癌组织的阳性表达结果(例，%)

3 讨论

浸润与转移是一个多环节、多因素决定的过程，是恶性肿瘤的重要标志性特征之一。这个过程涉及到细胞外基质与基底膜降解、细胞黏附能力变化、肿瘤细胞的迁移运动以及新生血管形成等影响因素。细胞外基质与基底膜的主要是由胶原蛋白、纤维连接蛋白、层连蛋白、氨基聚糖和蛋白聚糖等生物大分子、巨分子构成。目前观点认为细胞外基质与基底膜的降解为肿瘤细胞进入血循环提供入口，从而有助于转移发生。基质金属蛋白酶是一类锌离子依赖性的蛋白酶，具有有效降解细胞外基质与基底膜各种成分的功能，其中MMP-2是能够降基底膜的主要成分胶原IV，进而参与多种肿瘤浸润与转移过程。膜型基质金属蛋白酶是基质金属蛋白酶众多亚家族成员之一，它们都具有激活MMP-2酶原的功能，使其变为有活性的MMP-2。MT1、MT2和MT3-MMP分子结构类似，在羧基末端均为一个跨膜结构域，研究表明这种跨膜结构域对于激活细胞膜表面MMP-2酶原是必不可少的结构。最近研究证实MTl、MT2和MT3-MMP除了能够对MMP-2酶原发挥激活作用外，还可以有效地降解细胞外基质成分，例如，MT1-MMP除具有降解明胶的功能外，还具有消化多种类型的胶原的功能［1］。MT2-MMP可以降解细胞外基质的各种大分子，例如纤维连接蛋白与层连蛋白等，MT3-MMP对III型胶原降解具有重要作用。尽管MTl、MT2和MT3-MMP之间的氨基酸序列具有50%以上的同源性，但三者在不同类型的肿瘤组织中具有不同的表达模式，例如，在乳腺癌组织中MT1-MMP的表达量非常高，而MT2-MMP的表达稍弱些，MT3-MMP则未检测到表达;在肾癌组织中，这三种MT-MMP都具有较高的表达量［2］。本组结果显示:MTl、MT2和 MT3-MMP蛋白在癌旁正常组织中的表达显著低于喉癌组织，其中MT1-MMP的表达阳性率最高，为85.0%，MT2与MT3-MMP的阳性率分别为56.6%与51.7%，但癌旁正常组织无基底膜重建过程发生，因此其表达量较低或检测不到表达。不同肿瘤的原发部位与不同分化程度的癌细胞，其分泌膜型基质金属蛋白酶MTl、MT2和MT3-MMP的量差别不大。通常认为喉癌组织或细胞中MT1、2和3-MMP基因转录与翻译水平增强，可能是造成喉癌侵袭与转移的主要原因。总之，膜型基质金属蛋白酶MT1、2和3-MMP在喉癌发生与转移过程中发挥重要作用，MTl-MMP是判断喉癌淋巴结转移与否的重要指标。早期阻断MT1、2和3-MMP的表达，能够抑制喉癌的浸润与转移，MT1、2和3-MMP有望成为新抗癌药物与基因治疗的重要靶点。

［1］ 王迎春，李玉兰．基质金属蛋白酶-2及其组织型抑制因子在肝细胞癌浸润转移中的作用．中国医师杂志，2006，(9):1274-1275．

［2］ Nakamura H，Ueno H，Yamashlta K，eta1．Enhanced Production and Activation of Pmgelatinase A Mediated by Membrane-Type 1 Marx Metalloproteinasc in Human Papillary Thyroid Carcinomas．Cancer Research，1999，59:467-473．