海木三氯甲烷提取物对高血压模型大鼠血压和心率的影响

李家洲， 卢海啸， 陈海娟， 黎建玲

(玉林师范学院，广西玉林 537000)

海木三氯甲烷提取物对高血压模型大鼠血压和心率的影响

李家洲， 卢海啸*， 陈海娟， 黎建玲

(玉林师范学院，广西玉林 537000)

目的 探讨海木三氯甲烷提取物对药物诱导的高血压模型大鼠血压和心率的影响。方法 采用腹腔注射左旋硝基精氨酸制造大鼠高血压模型，观察和记录给大鼠灌胃不同剂量的海木三氯甲烷提取物后第7天和第14天的收缩压、舒张压和心率变化。结果 海木三氯甲烷提取物的各剂量组与模型组及给药前比较，血压和心率均有非常显著性差异(P＜0.01)。结论 海木三氯甲烷提取物对左旋硝基精氨酸引起的高血压模型大鼠具有显著的降压和拮抗心率及体质量下降的作用。

海木;三氯甲烷提取物;左旋硝基精氨酸;高血压

楝科植物海木(Trichilia connaroides)，有清热解毒，祛风湿腰腿痛和心、胃气痛等功效［1］。作者在进行海木药理活性的相关研究工作中发现，其三氯甲烷提取物对昆明小鼠建立的抑郁模型表现出显著的抗抑郁作用［2］;并能增强正常小鼠学习记忆能力，改善记忆障碍小鼠的记忆功能［3］;对SD大鼠建立的血瘀模型表现出显著的活血化瘀作用［4］;对正常大鼠具有显著降血压作用。为进一步观察其对高血压动物模型的降压效果，本实验以一氧化氮合成酶抑制剂左旋硝基精氨酸(NG-Nitro-L-Ariginine，L-NNA)诱导SD大鼠建立高血压模型，检测不同浓度的海木三氯甲烷提取物的降压活性以及对心率和体质量的影响，以期为海木的后续研究和开发利用提供一定的实验依据。

1 材料与仪器

1.1 实验动物 SD大鼠，雄性，体质量(260±50)g，购于广西医科大学实验动物中心，清洁级，许可证号:SCXK桂2003-0003。

1.2 药物及试剂 海木枝叶:采于广西桂林市永福县寿城，经广西植物研究所刘演研究员鉴定为楝科植物海木(Trichilia connaroides)。采后剪碎，60℃烘干备用;乙醇(分析纯)、石油醚(分析纯)、三氯甲烷(分析纯)均购于天津福晨化学试剂厂;正丁醇(分析纯)，购于上海申博华工有限公司;0.9%氯化钠注射液(广西南宁百会药业集团有限公司，生产批号:0902003);左旋硝基精氨酸(L-NNA)广州奇云生物技术有限公司;卡托普利(山西津华晖星制药有限公司，生产批号:080102)。

1.3 主要仪器 BP-6无创血压测量仪(成都泰盟科技有限公司);RE-2000旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂);SHZ-D(Ⅲ)循环水式真空泵(巩仪市予华仪器有限责任公司);电子分析天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司)等。

2 方法

2.1 海木提取物的制备 称取海木干枝叶适量，加入适量的无水乙醇，加热回流2h，用四层纱布过滤，得到的上清液提取液，重复提取3次，合并提取液，减压回收溶剂，得膏状物，将此膏状物用乙醇-水=1∶3的比例除去叶绿素，回收溶剂至干，即得粗提部分。将所得粗提物分成两份，一份备用，另一份依次用石油醚、三氯甲烷、正丁醇、水进行固-液萃取，即得到石油醚部分、三氯甲烷部分、正丁醇部分、水提部分。将各部分分别减压回收溶剂至干，最后得到的膏状物即是石油醚萃取物、三氯甲烷萃取物、正丁醇萃取物和水提物。试验时用生理盐水配置成相应浓度的悬浮液。

2.2 海木不同极性部位对正常大鼠血压的影响 将70只SD大鼠进行适应性测压后，计算每只大鼠的基础血压，剔除差异较大的，选取48只按血压分层，再按随机数字表分为6组:空白对照组、粗提组、石油醚组、三氯甲烷组、正丁醇组和水提组。其中空白对照组给予2 mL生理盐水灌胃，每日1次，连续3周;其余各组按200 mg/(kg·d)分别灌胃海木相应提取物，连续3周。参照文献［5］用BP-6无创血压仪测量大鼠收缩压(SAP)和舒张压(DAP):测给药前血压;给药后7、14、21 d血压。每个时点连续测3次，取均值。

2.3 海木三氯甲烷提取物对高血压模型大鼠血压的影响按2.2项方法选取60只血压差异较小的SD大鼠，随机选取8只作为正常对照组，给1 mL生理盐水腹腔注射，每日1次，连续4周，于第5周起，给2 mL生理盐水灌胃，每日1次，连续2周。其余的52只SD大鼠按15 mg/(kg·d)剂量，腹腔注射一氧化氮合成酶抑制剂L-NNA，连续4周。以此方法建立大鼠高血压模型［6］。然后测定血压，剔除差异较大的，选取32只按血压分层，再随机分为4组:模型对照组，于第5周起，给2 mL生理盐水灌胃，每日1次，连续2周;海木高剂量组，于第5周起，以250 mg/(kg·d)灌胃海木三氯甲烷提取物，每日1次，连续2周;海木低剂量组，于第5周起，以150 mg/(kg·d)灌胃海木三氯甲烷提取物，每日1次，连续2周;阳性对照组(卡托普利组)，于第5周起，以15 mg/(kg·d)连续灌胃卡托普利，每日1次，连续2周。测建模前、建模14、28 d以及建模后给药7、14 d血压。每个时点连续测3次，取均值。同时记录大鼠心律和体质量。

3 结果与分析

3.1 海木不同极性部位对正常大鼠血压的影响 表1结果表明，给药2周后，与空白对照组及给药前比较，海木枝叶的5种不同极性部位都能不同程度地降低正常大鼠的收缩压和舒张压，而且基本稳定在一定水平。其中粗提组和正丁醇组有显著性差异(P＜0.05)，三氯甲烷组有非常显著性差异(P＜0.01)，石油醚组和水提组无统计学意义(P＞0.05)。此外，给药2周后，各给药组的降压效果与三氯甲烷组相比，除粗提组的舒张压外，其余各给药组的收缩压和舒张压均有显著性差异(P＜0.05，P＜0.01)。表明三氯甲烷部位为最高活性部位。

3.2 海木三氯甲烷提取物对高血压模型大鼠血压的影响由表2可见，造模2周后，各处理组与正常组比较已有非常显著性差异(P＜0.01)，并且维持稳定持续性的高血压。各处理组的舒张压和收缩压的平均绝对值升高均大于30 mm-Hg，符合临床对高血压的定义。给药1周后，与模型组及给药前比较，高剂量组的收缩压和舒张压均显著降低(P＜0.01)，并已基本恢复到建模前的水平，而且与卡托普利组比药效有非常显著性差异(P＜0.01)，给药2周后有显著性差异(P＜0.05);低剂量组给药1周后，收缩压和舒张压也均显著降低(P＜0.05，P＜0.01)，给药2周后也基本恢复到建模前的水平，药效与卡托普利组比无显著差异(P＞0.05)。提示海木低剂量组的药效强度与卡托普利组相近，高剂量组的药效强于卡托普利组，且起效时间快。

表1 海木不同极性部位对正常大鼠血压的影响(±s，n=8)(1 mmHg=0.133 322 kPa)

表1 海木不同极性部位对正常大鼠血压的影响(±s，n=8)(1 mmHg=0.133 322 kPa)

注:与空白对照组比较，*P ＜0.05，＊＊P ＜0. 01;与给药前相比，#P ＜0. 05;与三氯甲烷组相比，◇P ＜0.05，◇◇P＜0.01。

/mmHg空白对照组 收缩压 95.72±7.80 96.11±6.91 94.93±6.18 95.14±6.61组别 项目 药前/mmHg 药后1周/mmHg 药后2周/mmHg 药后3周舒张压 79.90 ±6.85 79.83 ±4.92 80.54 ±4.26 81.03 ±5.32粗提组 收缩压 96.88 ±6.72 85.41±5.83*# 83.80±7.81*#◇ 83.08±7.84*#◇舒张压 77.02 ±4.33 72.81 ±3.42* 71.52 ±3.39* 72.03 ±3.42*石油醚组 收缩压 98.55±8.32 93.81±7.61◇ 90.22±8.83◇◇ 90.75±8.62◇◇舒张压 79.77 ±6.41 75.91±6.63◇ 73.72±6.91◇ 72.34±6.61◇三氯甲烷组 收缩压 97.56±5.78 85.31±5.42*# 81.45±6.42＊＊## 80.78±7.13＊＊##舒张压 79.33 ±6.14 72.21 ±5.45*# 70.24 ±4.52＊＊# 70.41 ±5.22＊＊#正丁醇组 收缩压 94.22±4.56 86.63±8.02 83.56±8.01＊◇# 82.71±7.22*#◇舒张压 78.75 ±4.72 73.11±5.13 72.12±5.11＊◇ 72.32±6.89＊◇水提组 收缩压 96.33±7.56 86.67±5.10 85.21±5.91◇ 84.72±8.34◇舒张压 78.49 ±5.72 75.61±5.56◇ 73.32±5.61◇ 74.13±6.81◇

表2 海木三氯甲烷提取物对高血压模型大鼠血压的影响(±s，n=8)(1 mmHg=0.133 322 kPa)

表2 海木三氯甲烷提取物对高血压模型大鼠血压的影响(±s，n=8)(1 mmHg=0.133 322 kPa)

注:与正常对照组比较，＊＊P ＜0. 01;与模型组相比，☆P ＜0.05，☆☆P ＜0. 01;与给药前相比，#P ＜0.05，##P ＜0. 01;与卡托普利组相比，◇P＜0.05，◇◇P ＜0.01。

组别 项目 建模前/(mmHg)/mmHg 2周 4周建模/mmHg 1周 2周给药正常对照组 收缩压 93.92 ±7.78 90.21 ±5.13 92.62 ±8.31 91.57 ±3.8893.31 ±4.22舒张压 75.41 ±6.37 83.52 ±4.31 80.51 ±7.78 76.53 ±3.45 75.12 ±6.32模型对照组 收缩压 94.87±6.72 125.46±2.01＊＊ 136.52±8.51＊＊ 131.88±2.41 130.32±3.63舒张压 77.02 ±4.31 112.01 ±3.42＊＊ 118.51 ±4.33＊＊ 112.42 ±2.85 114.62 ±3.43高剂量组 收缩压 95.56±2.31 126.14 ±4.09＊＊ 137.52±6.45＊＊ 94.83 ±3.61☆☆##◇◇ 92.22±5.51☆☆##◇舒张压 79.00 ±2.42 107.77 ±6.22＊＊ 115.01 ±5.43＊＊ 79.32 ±4.88☆☆##◇◇ 78.61 ±3.46☆☆##◇低剂量组 收缩压 94.59±5.23 126.82±4.7＊＊ 135.41±4.87＊＊ 106.52±4.81☆## 93.71±8.62☆☆##舒张压 77.78 ±6.11 111.62 ±5.63＊＊ 120.31 ±4.62＊＊ 91.02 ±6.33☆## 82.22 ±6.41☆☆##卡托普利组 收缩压 93.17±2.63 127.52±4.02＊＊ 135.67±6.81＊＊ 102.61±9.91☆## 93.42±6.58☆☆##舒张压 76.83 ±3.7 112.14 ±4.43＊＊ 125.42 ±5.23＊＊ 88.53 ±3.64☆## 79.92 ±4.51☆☆##

3.3 海木三氯甲烷提取物对高血压模型大鼠心率的影响由表3可见，造模前各组之间无显著性差异，说明各组间心率在同一水平，分组合理。造模后各处理组与正常组比较有非常显著性差异(P＜0.01)，各处理组心率水平均低于正常组。给药1周、2周时，与模型组比较，高、低剂量组的心率均显著提高(P＜0.01)，并基本恢复到正常水平，说明海木三氯甲烷提取物能拮抗左旋硝基精氨酸引起的心率下降。给药组与卡托普利组相比无统计学意义(P＞0.05)。

表3 海木三氯甲烷提取物对大鼠心率的影响(±s，n=8)

表3 海木三氯甲烷提取物对大鼠心率的影响(±s，n=8)

注:与正常对照组比较，＊＊P ＜0. 01;与模型组比较，☆☆P ＜0. 01;与给药前相比，##P ＜0.01。

组别 造模前/(次/min)造模/(次/min)给药/(次/min)2周 4周1周 2周正常对照组 332.77 ±6.23 330.51 ±6.42 331.33 ±7.21 333.89±6.13 335.61 ±4.82模型组 331.12 ±8.41 284.08 ±5.11＊＊ 282.61±5.12＊＊ 283.63 ±3.80＊＊ 285.83±3.78高剂量组 332.10 ±4.92 284.81 ±4.89＊＊ 281.72 ±4.51＊＊ 331.88 ±5.20☆☆## 333.03 ±5.44☆☆##低剂量组 332.81 ±4.22 285.79 ±5.91＊＊ 282.41 ±6.52＊＊ 328.60 ±4.33☆☆## 331.89 ±6.51☆☆##卡托普利组 332.30 ±6.31 286.56 ±5.12＊＊ 283.21±7.32＊＊ 330.30 ±4.31☆☆## 332.78±5.56☆☆##

3.4 海木三氯甲烷提取物对高血压模型大鼠体质量的影响由表4可以看出，实验前各组体质量无显著差异(P＞0.05)，实验后模型组体质量减少，与正常组和实验前比较，有非常显著性差异(P＜0.01)，说明L-NNA造成了大鼠体质量明显下降。给药组体质量未受到明显影响，与正常组和实验前相比，无显著性差异(P＞0.05)，给药组与卡托普利组相比高剂量组实验末体质量与卡托普利组有显著性差异(P＜0.05)，低剂量组没有统计学意义(P＞0.05)。说明海木能够明显缓解L-NNA造成的体质量下降，高剂量组的药效强于卡托普利组。

表4 海木三氯甲烷提取物对大鼠体质量的影响(±s，n=8)

表4 海木三氯甲烷提取物对大鼠体质量的影响(±s，n=8)

注:与正常对照组比较，＊＊P ＜0. 01;与实验前相比，##P ＜0. 01;与卡托普利组相比，◇P ＜0.05。

组别 实验前/g 实验末(6周)/g正常对照组300.23 ±17.72 299.89 ±8.42模型组 285.30 ±29.89 243.31 ±11.92＊＊##高剂量组 299.91 ±35.13 295.23 ±8.01◇低剂量组 288.52 ±28.13 276.4 ±7.9卡托普利组305.89 ±26.42 279.80 ±7.81

4 讨论

研究表明，血管内皮细胞舒张因子(endothelium derived relaxing factor EDRF，nitric oxide NO)是调节血管张力，维持血压稳定的重要物质［7］。内皮细胞损伤，EDRF NO缺乏，可能是高血压发病的一个重要原因［8］。Toda等给狗一次静脉注射EDRF合成酶(NOS)竟争性抑制剂L-NNA，可产生严重高血压［9］。本研究给大鼠腹腔注射L-NNA 1周后，开始出现反应迟钝、顺从、反抗能力减低等表现，2周后，各处理组与正常对照组比较有显著差异性，并形成稳定持续性的高血压，与文献［5］报道一致，表明造模成功。各处理组的舒张压和收缩压的平均绝对值升高均大于30 mmHg，符合临床对高血压的定义。在灌服海木三氯甲烷提取物1周后，高剂量组的收缩压和舒张压均显著降低，并已基本恢复到建模前的水平，而且与卡托普利组比药效有非常显著性差异，给药2周后有显著性差异;低剂量组给药1周后，收缩压和舒张压也均显著降低，给药2周后也基本恢复到建模前的水平，药效与卡托普利组比无显著差异。提示海木低剂量组的药效强度与卡托普利组相近，高剂量组的药效强于卡托普利组，且起效时间快。

造模后各处理组与正常组比较心率显著降低，灌服给药1周后，与模型组比较，海木各剂量组的心率均显著提高，并基本恢复到正常水平，说明海木三氯甲烷提取物能拮抗左旋硝基精氨酸引起的心率下降，药效强度与卡托普利组相当。

在对实验动物的毒性考察中发现，实验后模型组体质量显著减少，说明L-NNA造成了大鼠体质量明显下降。给药组体质量未受到明显影响，与正常组和实验前相比，无显著性差异。高剂量组与卡托普利组相比实验末体质量有显著性差异。说明海木能够明显缓解L-NNA造成的体质量下降，高剂量组的药效强于卡托普利组。

卡托普利为化学合成的血管紧张素转化酶(ACE)抑制剂［10］，对多种类型高血压均有明显降压作用，并能改善充血性心力衰竭患者的心脏功能。其降压机制为抑制血管紧张素转化酶活性，使血管紧张素Ⅰ(AngⅠ)转变为AngⅡ减少，降低AngⅡ水平，舒张小动脉，降低外周血管阻力，同时减少醛固酮分泌，以利于排钠，增加肾血流量。然而，化学合成的ACE抑制剂在临床应用过程中往往会产生副作用，如咳嗽、味觉功能紊乱及皮疹等［11］。因此，寻找安全的天然植物来源的ACE抑制剂来预防和治疗高血压，引起了广大科学工作者的极大关注。本研究结果表明，海木三氯甲烷提取物的降压护心作用与卡托普利类似，甚至药效优于卡托普利。在本课题组的另外研究中发现，海木三氯甲烷提取物能改善由肾上腺素引起的局部微循环障碍，使局部收缩的微血管口径开放，血流状态改善［4］。这提示海木的降压途径可能与卡托普利相似，也是通过舒张小血管，降低外周血管阻力而实现的。至于海木是否能改变高血压大鼠血清中ACE、血管紧张素和肾素的活性，或改变内皮型一氧化氮合成酶(eNOS)、醛固酮(ALD)等血压相关物质的含量，有待进一步研究。

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R285.5

B

1001-1528(2011)08-1413-04

2011-03-20

广西教育厅科研项目(200910MS126)

李家洲(1958—)，男，副教授，主要从事药理学和生理学的教学和研究工作。Tel:13907750778，E-mail:ljz5810@163.com

*通信作者:卢海啸(1974—)，男，讲师，博士生，主要从事中药化学及药效的研究工作。Tel:13544339648，E-mail:luhaixiao76@163.com