高效液相色谱-紫外检测法测定肾康超微粉胶囊中黄芪甲苷的含量

杨素芹 刘文惠 张继敏 曹德英

近年来对黄芪的研究越来越深入，更多地集中在其对补气、利尿作用方面，其被用来治疗糖尿病、肾病、糖尿病肾病、黄斑病变和动脉硬化症等。肾康超微粉胶囊包含了黄芪等十一味草药的复方中药制剂。《中国药典》规定黄芪药材的定量指标成分为黄芪甲苷［1］。本研究应用高效液相色谱-紫外检测法对黄芪提取物中的黄芪甲苷进行检测，以求建立一种高效、灵敏、简便、经济的黄芪甲苷的检测方法。对黄芪提取物中黄芪甲苷的含量进行测定，为开发黄芪甲苷新制剂提供试验基础。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂 Waters高效液相色谱仪 (美国 Waters公司)。黄芪甲苷对照品(上海融禾医药科技有限公司，批号:061230);肾康超微粉胶囊提取物(含黄芪甲苷0.5%)，(自制);甲醇、乙腈为色谱纯(美国TEDIA公司);水为超纯水。

1.2 对照品溶液制备 精密称取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇溶解并配成浓度101.2 μg/ml的贮备液。

1.3 样品溶液制备 精密称取3.024 g肾康超微粉胶囊内容物，置索氏提取器中以甲醇提取6 h，提取液蒸干，残渣用饱和氯化钠溶液20ml溶解，用以水饱和的正丁醇溶液提取6次，合并提取液，减压浓缩至20ml，用1%氢氧化钠溶液洗涤2次，再用正丁醇饱和水洗至中性。残渣用甲醇溶解并稀释至5ml，作为供试液［2］。

1.4 色谱条件 色谱柱:色谱柱规格:KiomasilC18柱(4.6 mm×150 mm，5 μm);流动相:乙腈:水(32:68);流速:1.0ml/min;检测波长 203 nm;柱温:30℃;进样量:20 μl。

1.5 色谱行为 按上述仪器和实验条件，将供试品溶液、阴性对照溶液、黄芪甲苷对照品溶液分别注入液相色谱仪测定。结果供试品色谱图中有与对照品相同保留时间的色谱峰(图1、2)，且基线平稳、分离度好，而阴性对照在此保留时间无色谱峰(图3)。保留时间约14min。

2 结果

2.1 线性关系考察 分别精密吸取上述对照品溶液0.2、0.5、0.8、1.0、2.0、5.0、8.0ml至 10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，分别进样20 μl。以峰面积为纵坐标，以黄芪甲苷进样量为横坐标进行线性回归，得回归方程为:Y=4437 .5X+1407.7，相关系数 r=0.9999(n=7)。黄芪甲苷在 0.2024～101.2 μg/ml浓度范围内与峰面积线性关系良好。

2.2 精密度试验 精密吸取样品溶液各20 μl进样，连续重复6次。测得各次峰面积，计算RSD分别为0.02%。精密度符合规定。

2.3 重现性试验 精密量取同一批肾康超微粉胶囊，按照样品溶液制备项下方法平行制备6份供试品溶液，分别进样。结果测得黄芪甲苷的平均含量为30.25 μg/ml，RSD为 2.37%。

2.4 稳定性试验 在室温下取样品溶液 20 μl进样，于 0、3、6、9、12、24、48 h各测定1次。黄芪甲苷色谱峰面积无明显改善，RSD为2.46%。表明黄芪甲苷溶液至少在48 h内稳定。

2.5 回收率的试验 精密量取上述已知含量的肾康超微粉胶囊提取物溶液6份，每份约含黄芪甲苷0.453mg，然后再分别精确加入 20.24 μg/ml的黄芪甲苷对照品溶液 1.0ml，按照样品溶液制备项下方法制备并测定，平均回收率为97.42%，RSD为 2.11%。

2.6 样品含量的测定 取3批肾康超微粉胶囊按样品溶液制备项下方法制备测定。见表1。

图1 标准对照

图2 阴性对照

图3 样品溶液

表1 黄芪甲苷的含量的测定结果

3 讨论

近年来较多研究者使用高效液相色谱-蒸发光散射法测定中药中黄芪甲苷含量［3，4］，本文使用此法进行肾康胶囊中黄芪甲苷的含量测定，结果符合定量分析的要求。

本研究所建立的高效液相-紫外检测法，对肾康超微粉胶囊提取物中黄芪甲苷的含量进行测定，方法快速简便，精密度和准确度都符合定量分析的要求，且具有经济适用性，适合肾康超微粉胶囊提取物中黄芪甲苷的含量测定。

1 中华人民共和国药典编委会.中华人民共和国药典.一部.北京:化学工业出版社，2005.213.

2 金毅群，隋军，贾兰秀.HPLC蒸发光散射检测器测得芪丹健脑颗粒的黄芪甲苷的含量.中医药学报，2006，2:22-23.

3 张锦文，寥梅，张勇慧，等.高效液相色谱-蒸发光散射法测定参芪扶正注射液中黄芪甲苷含量.中国医院药学杂志，2008，3:104-106.

4 董红红，张丽增，郭小青，等.HPLC-蒸发光散射检测法测定贞芪扶正颗粒中黄芪甲苷的含量.中国药房，2008，6:444-446.