新疆一枝蒿的质量标准研究*

热依木古丽·阿布都拉，仲婕，佐艾热·艾孜江，阿吉艾克拜尔·艾萨

(中国科学院新疆理化技术研究所植物资源化学重点实验室，乌鲁木齐 830011)

新疆一枝蒿(Artemisia rupestris L.)系菊科蒿属植物，主产于新疆维吾尔自治区，维吾尔语称“一孜乎艾曼尼”，是维吾尔医常用药材，民间用药历史悠久［1］，具有抗炎、解毒、抗癌、抗变态反应、健胃消食、活血化淤等作用;临床上常用于感冒、荨麻疹、咽炎、扁桃体炎、肝炎等疾病的治疗，对感冒和肝炎的疗效尤为显著［2-3］。近年来，一枝蒿一直是新药开发研究的热点。随着对一枝蒿药材需求的不断增大，导致市场上野生一枝蒿供不应求，随之开始大面积栽培一枝蒿。目前，对新疆一枝蒿药材的化学成分、药理作用等方面研究较多。而药材质量标准方面，除了在《维吾尔药志》有性状和显微描述外，尚无比较全面的报道。因此，笔者对新疆一枝蒿药材进行了水分、总灰分及含量测定，规定其限度，并建立了新疆一枝蒿药材的薄层色谱鉴别方法，同时以新疆一枝蒿活性成分酮酸为对照品，采用高效液相色谱法(HPLC)对16批不同产地的药材进行含量测定，建立了一种稳定、可靠的药材质量标准。

1 仪器和试药

1.1 仪器 Dionex Ultimate 3000型高效液相色谱仪(美国);TCC-3000自动进样器;UVD-3100紫外检测器;Chromeleon色谱工作站，四元溶剂系统、在线脱气机、柱温箱;Phenomenex Synergi Fusion-RP(4.6mm×250mm，4 μm)色谱柱;岛津 UV-2550型紫外可见分光光度仪(日本);Buchi R-210型旋转蒸发仪(瑞士);ESJ180-4型万分之一电子天平(沈阳龙腾电子有限公司);SZ-93自动双重纯水蒸馏器(上海亚荣生化仪器厂);SK2200LH型超声波清洗机;HSGF254型薄层层析硅胶板(青岛海洋化工厂)。

1.2 试剂 甲醇、乙腈(色谱纯，Fisher公司);其他试剂均为分析纯;水为二次重蒸水;酮酸标准样品为本实验室从新疆一枝蒿中制备的标准样品(批号:20081022)，HPLC法检测纯度为99.66%;新疆一枝蒿药材16批次，收集于不同产地，由新疆西域药业有限公司提供，经中国科学院新疆生态地理研究所克里木教授鉴定为Artemisia rupestris L.，符合卫生部药品标准中药材第1册(1991年)有关各项规定。

2 方法与结果

2.1 水分测定 分别取3批供试品适量，按2005年版《中华人民共和国药典》附录Ⅸ H第一法规定测定［4］，水分含量结果为 5.87% ～7.11%，平均值为6.59%(n=3)。暂定水分应不得超过8.0%。结果见表1。

2.2 总灰分测定 分别取3批供试品适量，按《中华人民共和国药典》附录Ⅸ K规定测定总灰分含量［4］，结果为7.65% ～13.33%，平均值为 10.50%(n=3)。因药材总灰分各地差异比较大，暂定总灰分不得超过16%。结果见表1。

表1 新疆一枝蒿水分、总灰分测定结果Tab.1 Determination of moisture and total ash in Artemisia rupestris L.%，n=3

2.3 定性鉴别 取本品粉末2.5 g，加甲醇100mL，超声处理10min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2mL溶解，作为供试品溶液。另取酮酸对照品，加甲醇制成每毫升含2 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中华人民共和国药典》附录Ⅵ B)实验，吸取上述两种溶液5 μL，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以石油醚-乙酸乙酯-冰醋酸(20∶10∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254 nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显示相同颜色的荧光斑点。结果见图1。

2.4 含量测定

2.4.1 对照品溶液的制备 精密称取酮酸对照品0.005 6 g，置于10mL量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，再精密量取此溶液1mL，置于10mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得(每毫升含酮酸56 μg)。

2.4.2 供试品溶液的制备 取新疆一枝蒿药材粉末(过孔径0.85mm药筛)约1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇 100mL，超声处理(功率250 W，频率为 40 kHz)10min，放冷，过滤，置于100mL量瓶中，甲醇定容，摇匀，即得。

2.4.3 测定波长的选择 经紫外扫描，化合物一枝蒿酮酸在245 nm处有最大吸收，所以选定245 nm作为检测波长。

图1 不同采集地的新疆一枝蒿薄层色谱图1.昌吉;2.新湖农场;3.南山板房沟;4.对照品Fig.1 TLC chromatogram of Artemisia rupestris L.from different habitats1.Changji;2.Xinhu farm;3.Nanshan Banfanggou;4.reference

2.4.4 色谱条件 Phenomenex Synergi C18(4.6mm×250mm，4 μm)色谱柱;流动相为甲醇-0.2%甲酸水溶液(67∶33);柱温35℃;流速为1mL·min-1;检测波长245 nm;进样量10 μL;检测时间20min。理论板数按酮酸峰计算应不低于2 000。在此条件下，分别吸取对照品、供试品溶液各10 μL，注入色谱仪，结果色谱图保留时间适中，分离度较好，见图2。

2.4.5 线性关系考察 精密吸取“2.4.1”配制的酮酸对照品溶液 1.0，2.0，4.0，6.0，8.0，10.0mL，分别置于10mL量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，分别取稀释液10 μL，进样，按上述色谱条件测定，以峰面积对酮酸进样量做线性回归，回归方程为:Y=8.522 3X－6.150 7，r=0.997 2。结果表明酮酸在5.60～56.00 μg范围内与峰面积有良好的线性关系。

2.4.6 精密度实验 精密吸取按“2.4.2”项配制的供试品溶液，重复进样6次，每次10 μL，按上述色谱条件，测峰面积，以峰面积计算RSD为1.02%(n=6)，结果表明方法精密度良好。

图2 新疆一枝蒿对照品与药材的HPLC色谱图A.对照品;B.一枝蒿药材;1.酮酸Fig.2 HPLC chromatograms of reference and Artemisia rupestris L.A reference;B.Artemisia rupestris L.;1.rupestonic acid

2.4.7 稳定性实验 取供试品溶液，放置室温，分别在0，2，4，6，8，10，12 h 进样测定酮酸峰面积，以峰面积计算，RSD为0.72%(n=7)，结果表明供试品溶液在12 h内稳定性良好。

2.4.8 重复性实验 取一枝蒿药材粉末6份，每份约1g，按“2.4.2”项配制，测定酮酸含量，结果酮酸平均含量为5.234 mg·g-1，RSD 为0.57%，结果表明方法重复性良好。

2.4.9 加样回收率实验 精密称取药材粉末9份，每份0.5 g，置于25mL量瓶中，分3组，每组分别加入1.4，1.7，2.0mL 酮酸对照品溶液(每毫升含酮酸560 μg)，照“2.4.2”项制备供试品溶液，测定含量并计算回收率，酮酸的加样回收率 99.8%，RSD为0.25%，结果见表 2。

表2 酮酸加样回收率测定结果Tab.2 Determination results of recovery of rupestonic acid

2.4.10 含量测定 取16批药材，按“2.4.2”项制备供试品溶液，按上述色谱条件测定，以外标法计算含量，取其平均值，结果酮酸平均含量3.41 mg·g－1。见表3。

表3 样品来源与含量测定结果Tab.3 Sources and content determination of samples

根据16批不同采购地的新疆一枝蒿药材测定结果，新疆一枝蒿药材中酮酸的含量为 0.079% ～0.624%。通过实验发现，药材采收地不同，酮酸含量差别也比较大，因此暂定药材含酮酸应不得少于0.06%。

3 讨论

药材中所含水分和总灰分的高低，直接影响药材在储存过程中的质量，故笔者对新疆一枝蒿的水分作了限度检查。为了控制药材的纯度，因而对其进行了总灰分限度的检查。

酮酸是新疆一枝蒿中活性最强的一种倍半萜类成分，因此，建立了新疆一枝蒿中酮酸的HPLC法含量测定方法和薄层色谱鉴别方法。并对16种不同采购地的新疆一枝蒿进行了检测，结果含量差异比较大。该方法专属性强、操作简便，结果可靠，重复性好，可有效控制新疆一枝蒿药材及其成药的质量。

［1］刘勇民，刘伟新，沙吾提·伊克木，等.维吾尔药志［M］.乌鲁木齐:新疆科技卫生出版社，1999:9.

［2］刘勇民.中草药丛书一枝蒿［M］.乌鲁木齐:新疆人民出版社，1986:100－101.

［3］斯拉甫，阿不都热依木，古力娜，等.新疆一枝蒿提取物保肝作用的实验研究［J］.中国中西医结合杂志，2002，22(2):126－128.

［4］国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)［M］.北京:化学工业出版社，2005:12.