蜡含量法鉴别初榨橄榄油的方法研究

张 蕊 薛雅琳 赵会义

(国家粮食局科学研究院，北京 100037)

蜡含量法鉴别初榨橄榄油的方法研究

张 蕊 薛雅琳 赵会义

(国家粮食局科学研究院，北京 100037)

研究了蜡含量法鉴别(特级和中级)初榨橄榄油的方法。采用色谱分离技术，通过柱色谱，洗脱出橄榄油中的蜡组分，再进行气相色谱分析，用内标法测得C40酯至C46酯总的蜡含量。结果表明:该方法C40 酯检出限为0．106 μg/mL，线性范围为 0．001 06 ～0．106 mg/mL，加标回收率为 98．8% ～107．1%，试验过程中相对标准偏差(RSD)分别为3．7%和0．8%。该方法具有重复性好，回收率高等特点。通过测定橄榄油中蜡的含量，可用于鉴别(特级和中级)初榨橄榄油。

橄榄油 蜡含量 鉴别

橄榄油在西方被誉为“液体黄金”，在地中海沿岸国家有着几千年的历史［1－2］。近几年，橄榄油也越来越受到我国消费者的关注。进口量逐年增加，已由2005年的4 500吨增加到近万吨。

从橄榄油进口数量上看，2006年初榨橄榄油约占进口总量的35%，精炼油约占46%，果渣油约占20%。而油橄榄果渣油进口的比例有逐年增长的趋势。2009年1～2月我国共进口橄榄油1 225吨，其中油橄榄果渣油达到了515．9吨，约占总量42%。在国际标准［3］和国家标准［4］中规定“油橄榄果渣油任何时候都不得标称橄榄油”。但值得注意的是，食用油市场上几乎看不到油橄榄果渣油的商品，油橄榄果渣油的去向成为了橄榄油市场最大的疑问［5］。脂肪酸组成分析是鉴别植物油品种较好的方法，然而橄榄油、油橄榄果渣油具有完全相同的脂肪酸和甘三酯组成，因此需要寻求更科学的特征指标进行鉴别。研究利用气相色谱技术，结合柱色谱技术，分析橄榄油中蜡的含量，根据蜡的含量对橄榄油等级进行鉴别，解决橄榄油质量分级及鉴别检测遇到的技术问题。

1 材料与方法

1．1 材料与仪器

特级初榨橄榄油;市售;乙醚(分析纯):北京化工试剂;正己烷(色谱纯):Fisher Science;正庚烷(色谱纯):天津市光得精细化工研究所;花生酸月桂醇酯，0．1%己烷溶液，内标物:sigma公司;苏丹Ⅰ:sigma公司;硅胶，粒径(60～200)μm:青岛海洋化工分厂;C40酯、C44酯标准品:sigma公司。

气相色谱仪，型号GC2010，配冷柱头进样口:岛津公司;马福炉，型号SX－4－10:天津市泰斯特仪器有限公司;旋转蒸发器，型号R－215:步琪实验室技术有限公司。

1．2 蜡的提取

硅胶柱的制备。将硅胶放入500℃的马福炉中，灼烧至少4 h。冷却，加入相当硅胶量2%的水，摇动混匀。使用前于暗处放置至少12 h。向正己烷中加入15 g硅胶制成悬浮液，然后转移至柱中。借助电动振荡器使其沉降，使色谱柱更加均匀。再用30 mL正己烷淋洗除去杂质，备用。

蜡的洗脱。称量500 mg试样于锥形瓶中，加入适量的内标物。用2次2 mL正己烷将制备好的试样转移至硅胶柱中。

用70 mL正己烷冲洗硅胶柱，去除杂质。再用180 mL正己烷/乙醚混合液(99∶1)开始进行色谱洗脱，流速大约为每10秒钟15滴，收集馏出液。样品洗脱时环境温度应保持在(22±4)℃。

用旋转蒸发器浓缩上述分离得到的馏出液，直至溶剂几乎除去。在弱的氮气流中除去最后剩余的2 mL溶剂，再加入2～4 mL正庚烷，用于气相分析。

1．3 测定条件

DB－5毛细管色谱柱(15 m ×0．25 mm ×0．25 μm)，冷柱头，初始温度83℃，以5℃/min程序升温至260℃，保持37 min;检测器温度350℃;柱温，初始炉温80℃，以5℃/min程序升温至340℃，保持20 min;载气为氦气，线速度45 cm/s;FID检测器，进样量 0．5 μL。

2 结果与讨论

2．1 线性关系的测定

橄榄油中存在一些天然蜡质，以C40至C46偶碳数的脂肪族酯为主。橄榄油中蜡含量表示为C40酯至C46酯各蜡含量的总和。试验中以花生酸月桂醇酯为内标物，测定二十二碳酸十八碳醇酯(C40酯)与内标物的线性相关性。将C40酯的标准品配制成不同浓度的正己烷溶液，分别为0．106、0．042 4、0．021 2、0．010 6、0．001 06 mg/mL，按体积比 1∶1 与0．108 mg/mL花生酸月桂醇酯正己烷溶液混合，进样0．5 μL，在最佳色谱条件下进行气相色谱分析。以C40酯与花生酸月桂醇酯峰面积比为横坐标，C40酯与花生酸月桂醇酯质量比为纵坐标作图，绘制曲线，见图1。

图1 C40酯标准曲线

图2 C40酯与花生酸月桂醇酯(0．010 6 mg/0．108 mg)谱图

进行线性回归，得标准曲线方程:Y=0．988 4X－0．002 7，R2=0．999 9。由方程可知，曲线线性良好。通过曲线的斜率可看出，C40酯与花生酸月桂醇酯的响应值比近似为1。因此在计算蜡的含量时，假定C40酯至C46酯的校准因子均为1，这与COI/T．20/Doc．no．18/Rev．2 要求是一致的［6］。以基线噪音的3倍所对应浓度作为方法的检出限，C40酯检出限为0．106 μg/mL，气相色谱图见图 2。

2．2 色谱峰的定性

色谱峰的定性是通过标准品以及与文献谱图对照进行定性分析。图3、图4分别为本试验条件下测得的纯正橄榄油中蜡组分的气相色谱图及IOOC标准中所提供的橄榄油中蜡组分气相色谱图。由图3和图4可知，试验条件下蜡组分与文献谱图中蜡组分有较好的一致性，C40酯至C46酯可被鉴别出来。

2．3 方法的精密度试验

精密度试验是对同一样品进行多次重复测量，以相对标准偏差作为评价指标。在相应的色谱条件下，分别对2个不同橄榄油样品(特级初榨橄榄油1#、纯正橄榄油1#)中蜡含量进行重复性测定。每种样品分别取6份，分别通过柱色谱洗脱，收集洗脱馏分进行气相色谱分析。求得6次结果的相对标准偏差RSD及置信度为95%时的置信区间，结果见表1，采用本方法测定蜡含量具有很好的重复性。

表1 精密度测定结果(n=6)

2．4 方法的准确度试验

选用纯正橄榄油1#进行回收率试验和重复性试验，结果见表2。外标加入量0．5～2倍范围内，回收率为 98．8%～107．1%。

表2 回收率测定结果

2．5 实际样品的测定

对市场上采集的5个橄榄油样品，进行蜡含量的测定。5个橄榄油样品的蜡含量见表3。

表3 不同橄榄油的蜡含量

从表3可以看出，特级初榨橄榄油1#、2#、3#与纯正橄榄油1#、2#中蜡含量有着很大的区别，蜡含量基本小于100 mg/kg。这是由于初榨橄榄油与橄榄果渣油生产工艺不同造成的。《橄榄油和油橄榄果渣油贸易标准》规定，特级初榨橄榄油和中级初榨橄榄油蜡含量≤250 mg/kg，精炼橄榄油、混合橄榄油蜡含量≤350 mg/kg，而油橄榄果渣油 ＞350 mg/kg［3－4］。因此，测定蜡含量是一个很好鉴别(特级和中级)初榨橄榄油的方法［7］。

3 结论

利用气相色谱技术，结合柱色谱技术对橄榄油中蜡含量分析方法的精确度、准确性进行了研究，试验证明该方法重复性好，回收率高，可操作性强。根据分析试验结果进行橄榄油等级的鉴别，解决了橄榄油质量分级及鉴别检测中遇到的技术问题。

［1］邢立民．橄榄油的加工技术与开发利用研究［J］．内蒙古科技与经济，2008(2):82－83

［2］王传现，褚庆华，倪昕路，等．近红外光谱法用于橄榄油的快速无损鉴别［J］．食品科学，2010(24):402－404

［3］IOOC，COI/T．15/NC No 3/Rev．5，Trade Standard Applying to Olive Oils and Olive － pomace Oils［S］

［4］薛益民，薛雅琳，张蕊，等．GB/T 23347—2009，橄榄油、油橄榄果渣油［S］

［5］彭争光，翟艳伟，杨桦，等．进口橄榄油存在的主要问题及对策研究［J］．粮食与食品工业，2010(6):56－58

［6］IOOC，COI/T．20/Doc．no．18/Rev．2，Determination of Wax Content by Capillary Column Gas Chromatography［S］

［7］Kiritsakis，A．K，et．Olive Oil from the Tree to the TableM］，2nded．，Trumbull，CT:Food and Nutrition Press Inc．，1998:86－113．

A Study on Distinguishing Method of Virgin Olive Oil by Determining Wax Content

Zhang Rui Xue Yalin Zhao Huiyi

(Science Academy of State Grain Administration，Beijing 100037)

A method to distinguish virgin olive oil(extra virgin olive oil and medium－grade virgin olive oil)from other grade olive oil and olive － pomace oil was developed in this paper．Using the column chromatograph technology，the wax component(C40 to C46 ester)was eluted．And then it was determined by gas chromatogram through the internal standard method．The results showed:this method has good reproductivity and high recovery rate．Using this method，the detection limit of C40 ester was 0．106 μg/mL and liner range was 0．001 06 ～0．106 mg/mL．The recovery rate of this method was between 98．8%and 107．1%．In the process of testing，the relative standard deviationa(RSD)were respectively 3．7%and 0．8%．The method had such advantages as good repeatability，high recoverage rate and so on．The determination of wax content in the olive oil could be used to distinguish The virgin olive oil(super and medium)．

olive oil，the content of wax，distinguish

TQ646

A

1003－0174(2011)08－0119－04

2010－09－30

张蕊，女，1975年出生，副研究员，油脂化学及粮油安全