猫冠状病毒的特性及诊断方法

(上海市外高桥出入境检验检疫局，上海市郊 200137)

猫冠状病毒在世界各地广泛存在。感染猫冠状病毒后的猫有可能患上一种名为猫传染性腹膜炎的严重疾病。

由于目前尚无有效的疫苗及药物治疗该病，因此对该病的诊断显得尤为重要。本文简要介绍了猫冠状病毒的特性及常见诊断方法，供参考。

1 病毒特性

猫冠状病毒(FCoVs)是一种有囊膜的RNA病毒，基因组由29190个核苷酸组成。FCoVs属冠状病毒科，该科其他病毒还有猪传染性胃肠炎病毒(TGEV),犬冠状病毒(CCV),貉冠状病毒(RDCoV)及中国鼬獾冠状病毒(CFBCoV)等。

病毒基因编码病毒聚合酶(Pol)及四个结构蛋白(纤突，囊膜，膜，核衣壳蛋白)，顺序为5′-Pol-S-E-M-N-3′，额外基因还包括(3a,3b,3c,7a,和7b)。

FCoVs有两种已知的生物型，即猫传染性腹膜炎病毒(FIPV)和猫肠道冠状病毒(FECV)。据报导，FIPV和FECV都可引起病毒血症，但只有FIPV能在巨噬细胞中复制并引起疾病。病毒，抗病毒的抗体，以及引起弥散性血管炎的补体之间的复杂免疫反应是FIP的重要特征。

FCoV感染在猫群中非常普遍。大约20%～60%宠物猫可以检测到FCoV抗体。对于部分喂养多只宠物猫的家庭，有时抗体阳性率可达100%。FCoV具有高度传染性，主要通过粪便及消化道途径传播。

2 病毒诊断

FECV感染通常只引起轻微的疾病症状。多数病例不表现临床症状，部分幼猫会有连续数d轻微腹泻症状，少数病例则可出现呕吐症状。

通过电镜观察或RT-PCR方法可从粪便中检测到病毒(FCoVs)。由于正常的健康小猫或成年猫都能从粪便中排毒，因此从粪便中检测FECV的实际意义不大。

FIPV能引起致死的腹膜炎。细胞介导免疫反应较弱的猫可以发生这种疾病的“湿性”形式，这是一种免疫复合物性的血管炎，可以导致富含蛋白质的体液从血管流入腹腔。具有部分细胞介导免疫反应猫可发生这种疾病的“干性”形式，可引起多种组织发生肉芽肿性病变。当免疫系统崩溃时，“干性”FIP在疾病的最后阶段也会变得具有一定的“湿性”。

由于缺乏具体的临床症状，缺乏疾病特有的生化异常现象，实践中常用的检测方法灵敏度和特异性较低，确诊FIP比较困难。对于FIP的诊断一般基于疾病病史调查，血液学实验及其他诊断方法，如血清学诊断、组织切片观察、PCR等。

如果患猫出现发热症状，使用抗生素治疗没有明显效果，此时可以考虑其是否是患传染性腹膜炎病(FIP)。大部分患FIP猫的年龄多为6至8周龄之间。此时，母源抗体已经消退，不足以保护再受致病微生物影响。

FIP是具有多种临床表现的一种疾病。在“湿性”形式中，最典型的症状是有大量腔内积液。“湿性”FIP典型的病变是腹部器官的浆膜表面出现纤维素性病变及肉芽肿。呼吸困难，轻度发热，心跳声沉闷是常见症状。眼睛出现葡萄膜炎，角膜后沉淀以及虹膜着色变化。“干性”FIP病变通常发生在眼睛和中枢神经系统，肉芽肿则可能出现在腹腔，临床症状多种多样。

X光片显示胸膜，心包，腹腔积液，肝肿大，肠系膜淋巴结肿大，可能导致部分患猫腹部出现肿块。超声波检查可用于确认腹腔液的存在，判定胰腺，肝脏，淋巴结和肾脏等脏器是否正常。磁共振成像(MRI)可以显示猫的脑室周围对比度增强，心室扩张和脑积水。

3 血清学检测

检测血清抗体是检测FCoV感染最常用的诊断方法。但因多数健康猫也会有针对FCoV的抗体，因此抗体检测很难区分真正患病猫与健康猫。目前，已有商用抗体检测试剂盒，其特异性及敏感性分别为95%和83%。

抗体检测结果对确诊有一定的局限性。有些患有“湿性”FIP猫的抗体滴度很低甚至为0。原因可能是猫体内病毒已经与抗体相结合，导致抗体不能同试剂盒内的抗原相结合。

由于FIP是一种免疫介导的疾病，抗原-抗体复合物能在血清和胸腔积液中循环存在。因此，通过竞争ELISA方法可用于检测抗原-抗体复合物。

4 RT-PCR检测

RT-PCR方法能较为敏感地检测粪便样品中的FCoV。粪便样品需要仔细保存处理，以防环境中到处存在的RNA降解酶。样品制备好后最好立即采用RT-PCR进行检测。粪便样品中RT-PCR的信号强度同肠道中存在的病毒数量有关。

病毒可以经各种组织及腹水中进行检测，肝和脾是最容易检测到病毒的组织器官。且新鲜组织中病毒的数量明显高于经福尔马林或乙醇处理后的组织。

用于检测病猫FIP的引物也能用于扩增感染FCoV后仍为健康猫所携带的病毒。因此，RT-PCR检测的结果要与临床症状等结合诊断。

RT-PCR产生假阴性结果有很多原因，例如RNA降解、反转录失败、FCoV基因组序列变异等。混合感染CCV或TGEV有可能引起假阴性，因为这两种病毒同FCoV有一段相同的保守序列。

5 组织学与免疫化学法检测

采用H&E染色法对组织切片进行染色镜检是诊断FIP较好的一种方法。H&E染色可较好地定位巨噬细胞，中性粒细胞，淋巴细胞和浆细胞的局部炎症。

血管病变周围会有大量炎性细胞增殖，这是“湿性”FIP的典型特征。炎性细胞堆积及坏死增生性病变是“干性”FIP肉芽肿性病变的典型特征。

免疫组化方法也可检测出组织内的FCoV 抗原，但不能区分FECV 和 FIPV。“干性”FIP时，病变组织中病毒抗原浓度要比“湿性”FIP低。