桑葚中多糖的提取及含量测定

刘玉玲 纪国力

山东省泰安市食品药品检验中心，山东泰安 271000

桑葚（Fructus Mori）为桑科落叶灌木桑（Morus albaL.）的成熟果穗，首载于《新修本草》，又名桑枣、桑果，主产于江苏、浙江、湖南、四川等地。4～6月果实变红时采收，晒干，或略蒸后晒干用。其味甘而性寒，归肝、肾经，具有滋阴补血、生津、润肠等功效，主要用于治疗头晕耳鸣、目暗昏花、失眠、须发早白、遗精等阴血亏虚之证，以及津伤口渴、内热消渴及肠燥便秘等[1]。施青红[2]报道，桑葚中含有芦丁、白黎芦醇、鞣酸、原花色素、维生素、挥发油及多糖等多种成分，但有关上述各成分的的含量测定方面的报道较少。因多糖类成分是桑葚滋阴补血等补益功用的重要物质基础，本研究特采用桑葚为实验材料，以苯酚-硫酸法对其所含多糖的含量进行了测定，以期为进一步开发利用传统中药桑葚的药用价值奠定基础。

1 仪器及药品

752型紫外可见分光光度计（上海元析仪器有限公司），SLQ-1 000F型超声分散仪（广州声联超声波电子科技有限公司）；AL104型电子分析天平（梅特勒-托利多仪器上海有限公司）；桑葚生药材购自安国市义全中药材有限公司，苯酚、浓硫酸、葡萄糖等试剂均为分析纯。

2 方法

2.1 桑葚精制多糖的制备[3]

精密称取桑葚50 g，用90%乙醇浸泡洗涤2次，每次6 h，脱脂，过滤，于通风橱中将药渣中乙醇挥发干净后加水500 mL，60℃条件下超声提取30 min，过滤，滤渣再加水，同法共超声提取3次，合并滤液，浓缩至50 mL（1 mL相当于1 g生药材），加入等体积Sevage试剂（氯仿 : 正丁醇=4 : 1）除蛋白，离心，留取上清液，加95%乙醇使乙醇含量达到80%，于4℃冰箱中静置12 h，过滤，滤渣依次以无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤3次，挥散溶剂，40℃条件真空干燥至恒重，即得桑葚精制多糖。

2.2 5%的苯酚溶液的配制

精密称取苯酚100 g，加0.05 g NaHCO3和0.1 g铝片，蒸馏，收集182℃馏分，精密称取5 g馏分，加少量水溶解，后继续加水稀释至100 mL，即配制成5%的苯酚溶液，置棕色瓶内置于4℃冰箱备用。

2.3 葡萄糖标准溶液的配制

精密称取105℃干燥至恒重的葡萄糖25 mg，加少量蒸馏水溶解，转移至250 mL容量瓶中，加蒸馏水定容，摇匀，即配成浓度为0.1 mg/mL的葡萄糖标准溶液。

2.4 桑葚多糖溶液的配制

精密称取桑葚多糖20 mg，加少量蒸馏水溶解，转移至100 mL容量瓶，加蒸馏水定容，摇匀，即配成浓度为0.2 mg/mL的桑葚多糖溶液。

2.5 样品溶液的配制

精密称取桑葚生药材0.2 g，以90%乙醇浸泡洗涤2次，每次6 h，脱脂，过滤，于通风橱中将药渣中乙醇挥干后加水20 mL，60℃条件下超声提取30 min，过滤，滤渣再加水，同法共超声提取3次，合并滤液，定容于250 mL容量瓶中，即配成样品溶液。

2.6 检测波长的选择

分别精密吸取葡萄糖标准溶液和桑葚多糖溶液各2.0 mL置试管中，另取2.0 mL蒸馏水作为空白对照，分别加入5%苯酚溶液1.0 mL，摇匀，再加入浓硫酸5.0 mL，摇匀后静置5 min，再置于40℃恒温水浴中30 min，在400～600 nm波长范围内进行扫描，得到标准溶液和样品溶液的最大吸收波长均为490 nm，故选择490 nm为检测波长[4]。

表1 加样回收率试验（n=6）

3 结果

3.1 标准曲线的绘制

精密吸取“2.3项”配置的葡萄糖标准溶液0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6 mL置于干燥试管中，分别精密加蒸馏水使至2.0 mL，再5%苯酚溶液1.0 mL，摇匀，再加入浓硫酸5.0 mL，摇匀后静置5 min，再置于40℃恒温水浴中30 min，分别于490 nm处测定吸光度。以葡萄糖标准溶液浓度（C）为横坐标，吸光度（A）为纵坐标，进行标准曲线的绘制。葡萄糖在0.01～0.06 mg/mL的范围内，C与A呈良好线性关系，得回归方程为A=7.234 6C-0.008 1，r=0.999 7。

3.2 换算因子的测定

精密吸取“2.4项”配置的桑葚多糖溶液2.0 mL，按“2.7项”方法测吸光度，根据回归方程计算出多糖中葡萄糖浓度，按下式计算换算因子（f）：f=W/CD[W为多糖质量（mg），C为多糖中葡萄糖浓度（mg/mL），D为多糖的稀释因子]，测得f=1.51。

3.3 精密度试验

精密吸取“2.5项”制备的样品溶液2.0 mL，按“2.7项”方法测吸光度，重复测定5次，RSD=0.97%（n=5），精密度良好。

3.4 重复性试验

精密称取桑葚0.2 mg，6份，按“2.5项”方法制备样品溶液，按“2.7项”方法测吸光度，RSD=1.19%（n=6），重现性良好[5]。

3.5 加样回收率试验

精密称取已知多糖含量的桑葚生药材0.2 g，6份，分别精确加入葡萄糖0.01 g，按“2.5项”方法制备样品溶液，按“2.7项”方法测吸光度，计算平均回收率为98.92%，RSD=3.50%（n=6）。加样回收率实验数据见表1。

3.6 桑葚多糖含量测定

精密吸取“2.5项”制备的样品溶液2.0 mL，按“2.7项”方法测吸光度根据回归方程计算出样品溶液中葡萄糖浓度C，按下式计算多糖含量：多糖含量%=（CDf×100）/W。式中：W为样品质量（mg）；D为样品溶液的稀释因子，f为换算因子。结果表明，桑葚中多糖的平均含量为9.42%。

4 讨论

本研究采用超声提取技术从桑葚生药材中提出多糖成分，并采用苯酚-硫酸法对多糖含量进行测定。研究结果表明，桑葚中多糖含量约9.42%。该方法操作简单、测定结果准确可靠、重现性较好，可作为测定桑葚中桑葚多糖含量的基本方法。可用于桑葚药材的质量控制，并可为对其进行相关研究提供基础实验数据。

桑葚是药食两用的中药，所含营养及药用成分繁多，对其有效成分进行深入研究是十分必要的，对于开发利用其药用价值、具有深远的意义。本研究对其所含多糖成分的含量进行了初步测定，有关桑葚多糖化学结构分析及药理作用尚有待于深入的研究。

[1] 南京中医药大学.中药大辞典[M].第2版.上海：上海科学技术出版社，2006：2790.

[2] 施青红，王向阳.桑葚的功能成分及药理作用[J].食品与机械，2007，23（4）：153.

[3] 胡彦武，王丽丽.长白山区野生菟丝子中多糖的提取及含量测定[J].安徽农业科学，2010，38（9）：4939-4940.

[4] 范超君，毕和平，陈湛娟.白千层叶多糖提取及含量测定[J].时珍国医国药，2010，23（3）：581-582.

[5] 杨红丽，刘辉，俞群娣.扁玉螺多糖的提取及含量测定[J].安徽农业科学，2012，40（13）：7706-7707，7709.