16BT试剂盒在DNA检验鉴定中的应用

张 璐辛 阳赵 阳李 军

（1 中国刑警学院 辽宁 沈阳 110035；2 沈阳市公安局皇姑分局 辽宁 沈阳 110036）

16BT试剂盒在DNA检验鉴定中的应用

张 璐1辛 阳1赵 阳2李 军1

（1 中国刑警学院 辽宁 沈阳 110035；2 沈阳市公安局皇姑分局 辽宁 沈阳 110036）

采用16BT试剂盒多个荧光标记STR位点及ABO基因位点复合扩增检测技术进行检验鉴定，取得满意效果。说明该试剂盒灵敏度较高，可靠性好，符合目前实际办案的需要。

荧光标记 STR 复合扩增 ABO基因

ABO血型系统是人类发现最早的遗传标记系统，1900年Landerstainer发现ABO血型系统后，立即被迅速地应用于输血医学等临床医学研究和实践中。随着对ABO血型系统研究的深入，新的研究成果很快被推广至人类学、亲缘关系分析及法医学个体识别等多种领域，并占有举足轻重的地位，很长时间以来血型系统一直是法医物证鉴定中所应用的最主要的遗传标记。

传统的法医物证ABO血型检测的目标是红细胞膜表面ABH抗原物质，即糖脂或糖蛋白，检验方法主要是采用诸如吸收实验、解离实验、混合凝集实验、酶联免疫实验等血清学方法。血清学方法只能判定ABO血型的表现型，而且血清学的结果判定可能因为外界条件对抗原活性的破坏、细菌污染、个体分泌状态、个体发育状态甚至可能受到机体所患疾病的影响，而导致判型失败或判型错误的结果发生。

1990年后，Yamamoto等通过对ABO基因的分析发现了各等位基因的核苷酸序列差异，为人们从分子水平进行ABO基因分型打下基础。尤其是随着PCR技术的广泛应用，世界各地的学者开展了大量的ABO血型基因分型的研究工作，并报道了一系列的检验方法。这些方法包括PCR-RFLP、PCR直接测序和序列特异性引物扩增（PCR-SSP）等方法，其中由于PCR-SSP方法操作相对简单、检测速度较快并且判型准确，是研究最多和应用最广泛的一种。16BT试剂盒即是采用PCR－SSP的原理对多个荧光标记STR位点及ABO基因位点复合扩增进行检验鉴定。

1 材料与方法

142份精斑检材均取自本检验室受理的全国各地强奸及强奸杀人案例样本。

1.1 DNA提取

所有检材均按GA/T 383-2002 Chelex法提取DNA。

1.2 PCR扩增

联合应用AB公司的Identifiler试剂盒和基点公司的16BT试剂盒进行PCR扩增，检测17个STR基因座：D3S1358、vWA、FGA、D21S11、D18S51、D5S818、D13S317、D7S820、D16S539、D8S1179、CSF1PO、D2S1338、D19S433、TH01、TPOX、PentaE、PentaD。PCR反应在PE-9700扩增仪上进行，PCR扩增体系和循环条件按操作手册完成。

1.3 扩增产物检测

扩增产物经AB-3130型DNA遗传分析仪电泳分离和激光扫描分析，用Run 3130 Data Collection v3.0软件收集电泳信息，Genemapper ID v3.2软件分析扩增片段大小，得到STR分型结果(如图1，图2)。

2 结果

142份精斑检材中，AO基因型38例，占26.76%；AA基因型6例，占4.23%；BO基因型30例，占21.13%；BB基因型8例，占5.63%；AB基因型26例，占18.31%；OO基因型34例，占23.94%。

所有检材两个试剂盒共同的13个基础位点检测结果完全相同。

图1 20号检材Identifiler试剂盒检测结果

图2 20号检材16BT试剂盒检测结果

3 讨论

基因扩增方法检测血型与传统方法检测血型比较,检测的目标是DNA，检测结果更准确。传统血清学检验的细胞膜上的蛋白质抗原，其决定因素也是DNA，因此对DNA检测更准确，而且基因分型更多。另外，DNA与蛋白质相比，对于各种外界条件的影响和破坏具有更好的耐受性，因此针对微量、陈旧的生物检材检验的成功率和灵敏度也更高。采用血清学方法对于弱分泌型个体除血液外其他体液成分进行ABO血型检验时，常常由于其中抗原成分过少而无法检验，甚至得到错误判型。而采用ABO血型基因分型方法时，直接检验其血型决定基因，因此不受个体分泌状态的影响，可以直接获得准确结论。

性犯罪中的精液与阴道液混合斑是法医物证鉴定中常见的生物检材，采用血清学方法只能获得混合的ABO血型，再采用加减法进行排除分析；采用基因分型的方法由于首先去除了混合斑中的女性成分，可以直接确定精子的血型。基因扩增方法检测血型适合于检测微量样本。血清学检测抗原抗体反应，信号放大倍数通常是几倍或十几倍，灵敏度较低，而PCR方法先将基因扩增至少105－106倍后检测，灵敏度大大提高。

本组实验中所有检材两个试剂盒共同的13个基础位点检测结果完全相同，说明16BT试剂盒灵敏度较高，可靠性好，符合目前实际办案的需要。

4 典型案例

2012年4月30日，我DNA检验室受理某市公安局刑警大队送检案件。据送检人介绍：2012年4月28日19时40分许，该市某镇居民发现自己7岁大的孙女失踪，并于当晚22时06分报案。民警与其亲属50余人在附近寻找一夜未果。4月29日11时10分，在其家属区东侧60米处的防水沟内发现了失踪女童的尸体。经技术人员现场勘查，初步确定为强奸杀人案。

DNA检验室受理此案后，首先确定了检验方案。为了给办案机关节约办案成本，我们利用16BT试剂盒成功检验出送检生物物证中犯罪嫌疑人的常染色体STR多态性分型结果的同时，还检验出犯罪嫌疑人为BO的杂合体。所以我们建议办案机关首先送检B型血的犯罪嫌疑人血样。这无疑既帮助送检机关减少了工作量，又为快速破案争取了时间。终于，在第三批送检的B型嫌疑人血样里，我们找到了真正的凶犯，犯罪嫌疑人被成功批捕。

1.侯一平，王保捷.法医物证学[M].第二版.北京：人民卫生出版社，2004

2.裴黎.现代DNA分析技术理论与方法[M].北京：人民公安大学出版社，2002

3.郑秀芬.法医DNA分析［M］.北京：中国人民公安大学出版社，2010

4.胡兰.法医遗传学进展与应用[M].北京：群众出版社，2008

5.Wang Hong-xu，Wei Zheng，Yong Bingxiang，etal.ABO bloodtypeisassociatedwithendometrial cancer risk in Chinese women[J].Chinese journal of cancer，2011，(11)