复方丹参注射液对重症急性胰腺炎大鼠的作用机制

陈卫红，王 欣，李 瀚，袁卫东，程风华，刘大基

(1.黄石中医医院，湖北 黄石 435000；2.武汉同济医学院同济医院 胆胰外科，湖北 武汉 430030)

近年来我国重症急性胰腺炎(Severest Acute Pancreatitis，SAP)发病率呈上升趋势，临床起病急、病死率高达20%～30%[1-3]。对其发病机制至今未完全阐明，临床亦缺乏有效的特异性药物。而借助SAP动物模型是研究的重要手段[4]。本文通过对30只大鼠诱导SAP模型进行复方丹参治疗对照研究，通过检测C反应蛋白(CRP)、血清淀粉酶(Amy)、乳酸脱氢酶(LDH)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)等免疫因子变化，探讨复方丹参注射液对SAP治疗的作用机制。

1 材料与方法

1.1 动物 二级清洁健康大鼠40只，体质量220～250 g，均由湖北医学动物中心提供。

1.2 试剂 Amy、CRP和LDH试剂盒均购于上海科华生物试剂公司；IL-1和IL-6检测试剂盒购于美国R-D公司；苏木素、伊红(HE)染色试剂盒购于珠海贝索生物技术有限公司。

1.3 模型制备 大鼠适应性喂养1周，于术前12 h禁食不禁水。30只大鼠间隔1 h，连续7次腹腔内注射雨蛙素50 mg/kg，并在首次注射雨蛙素5 h后腹腔注射10 mg/kg脂多糖。蛋白酶体抑制剂Ps-341阳性对照组：注射脂多糖前0.5 h腹腔注射50% DMSO 0.2 mL(生理盐水稀释)。复方丹参注射液治疗组：复方丹参注射液20 mL加0.9%氯化钠150 mL静脉滴注每日1次，共7 d。对照组：用生理盐水代替雨蛙素和脂多糖，依上述同样方法腹腔注射。

1.4 检测指标 观察各组大鼠一般情况及病死率。

1.5 血清淀粉酶及血浆内毒素测定 各组大鼠于术后24 h乙醚吸入麻醉后开胸，迅速心脏穿刺取血液5 mL，4 ℃静置1 h，3 000 r/min离心10 min，取500 μL上清，日本东芝120全自动生化分析仪检测Amy、LDH、CRP。

1.6 血清细胞因子检测 同上处理，取500 μL上清，-20 ℃保存，ELISA法检测IL1-β、IL-6。

1.7 胰腺组织病理学检查 术后12 h取部分胰腺组织，4%多聚甲醛固定。常规石蜡切片，HE染色，由2位专业病理医师双盲阅片，每张切片随机选取10个视野，参照RONGIONE等[5]组织学病理分级法按水肿、炎细胞浸润、出血坏死进行评分，取各项积分总和为最终得分，10个视野的平均分数为每张切片的最后评分。

2 结果

2.1 各组大鼠血清淀粉酶、乳酸脱氢酶、C反应蛋白水平比较 见表1。

2.2 各组大鼠对血清白介素IL-1和IL-6的水平比较 见表2。

2.3 Ps-341各组大鼠胰腺组织评分比较 见表3。

表1 各组大鼠血清淀粉酶、乳酸脱氢酶和C反应蛋白水平比较(±s)

表2 各组大鼠血清IL-1和IL-6水平比较(±s) ng/mL

表3 各组大鼠胰腺组织评分比较(±s)

3 讨论

SAP的发病过程中出现的组织坏死、大量渗出和继发性感染均可刺激抗体释放大量炎症介质和各种细胞因子，包括TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8等。主要介导免疫和炎症反应，其大量释放时会破坏炎症和抗炎症细胞因子之间的平衡，导致全身炎症反应综合征(SIRS)和多器官功能障碍(MODS)。SIRS是多器官功能障碍(MODS)的主要诱因。因此预防与治疗SIRS是治疗SAP的重要措施。目前，中西医结合治疗和机制研究有一些报道[1-4],但是尚未发现一种特效的药物。本文就复方丹参注射液的抗炎和启动细胞抗炎因子平衡作了对比研究，结果均获得同抗蛋白酶一样的效果。

复方丹参注射液是以丹参为主的中药复方制剂。现代医学研究[6-8]表明，丹参的主要成分是丹参酮，具有抑制血小板凝聚、降低血黏度、抗血栓形成，改善微循环和血液流变学的作用，同时还抑制溶酶体的释放和中性粒细胞的趋化作用，有抗氧化和钙通道阻滞作用。其作用机制可能在于：1)为活血化瘀中药，具有抑制血小板黏附、聚集和释放的作用，能有效降低红细胞聚集指数，改善血液流变性，调节血液黏稠度，改善坏死区局部微循环及血液流变学的作用。2)具有良好的清除氧自由基、抗脂质过氧化作用，钙通道阻滞剂作用。3)有保护细胞膜、调节组织修复与再生作用。4)对重要脏器的缺血再灌注损伤有较好的保护作用。谢敏等[9]研究表明，在西医治疗重症急性胰腺炎的基础上加用复方丹参注射液能够提高SAP治疗效果，显著降低患者血清中的淀粉酶、白细胞水平和使血钙恢复,使患者的症状、体征能较快缓解，有效阻止了胰腺炎病变进一步恶化，加速机体康复。

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