VEGF-C mRNA在结直肠癌中的表达及其与肿瘤发展的关系

裴永彬，贺新奇，孟丽敏，刘 云，赵增仁

（河北医科大学第一医院普外科，河北石家庄050031）

VEGF-C mRNA在结直肠癌中的表达及其与肿瘤发展的关系

裴永彬，贺新奇，孟丽敏，刘 云，赵增仁*

（河北医科大学第一医院普外科，河北石家庄050031）

目的检测结直肠癌中血管内皮生长因子-C（vascular endothelial growth factor-C，VEGF-C）mRNA水平的表达，探讨其与肿瘤发展的关系及临床意义。方法选取临床及病理资料完整的结直肠癌患者42例，采用逆转录-聚合酶链反应法检测手术切除的结直肠癌标本及配对的正常结直肠黏膜组织中VEGF-C mRNA的表达，分析其与各临床病理参数之间的关系。结果在42例配对结肠癌标本中，癌与对应正常黏膜VEGF-C mRNA的相对表达量分别为0.545±0.273、0.494±0.330，在癌组织中轻度高表达，但二者差异无统计学意义（P＞0.05）；Duke分期C及D期患者VEGF-C mRNA水平明显高于A和B期（0.724±0.210 vs 0.445±0.257，P＜0.05）；TNM分期Ⅲ+Ⅳ期较Ⅰ+Ⅱ期VEGF-C mRNA有升高趋势，但差异无统计学意义（0.660±0.230 vs 0.401±0.317，P＞0.05）；淋巴结转移组VEGF-C mRNA也呈高表达状态（0.773±0.159 vs 0.473±0.264，P＜0.05）；VEGF-C mRNA在肿瘤浸润超过浆膜层的患者表达水平高（P＜0.05）；VEGF-C mRNA在不同性别、年龄、肿瘤位置及分化程度分组中差异无统计学意义（P＞0.05）。结论结直肠癌组织中VEGF-C mRNA表达与淋巴结转移、侵袭有关，可作为一个独立的预后因子应用于结直肠癌患者的病情监测和预后判断。

结直肠肿瘤；血管内皮生长因子；免疫组织化学

血管和淋巴管是肿瘤微环境的重要组成部分。它们是受肿瘤细胞表达的促血管、淋巴管生成因子刺激而形成的。肿瘤细胞营造了一个适合肿瘤生长（包括血管、淋巴管生成）的间质微环境；这个微环境除了与肿瘤细胞相互作用的间质细胞，还包括一个复杂的细胞因子网络［1］。血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）家族中的分子是其中目前研究最火热的细胞因子，特别是VEGF-C［2-3］和VEGF-D。免疫组织化学研究提示VEGF-C和VEGF-D在结直肠癌侵袭的边缘，并且与淋巴转移这个临床特征有关，但是关于两者mRNA水平的表达一直存在争议［4］。本文就VEGF-C在结直肠癌中的mRNA水平进行了研究。

1 资料与方法

1.1 一般资料：2007—2009年河北医科大学第一医院经病理诊断证实的结直肠癌患者42例，男性25例，女性17例，年龄31～90岁，平均（61.00± 3.75）岁。收集手术切除结直肠癌标本及配对的正常结直肠黏膜组织。癌标本取材于瘤体的边缘，而正常组织取材远离癌标本达5cm以上。所有标本在离体后15min内放入液氮，然后转入-80℃冰箱保存备用。

1.2 VEGF-C mRNA检测方法：采用逆转录-聚合酶链反应法。取新鲜组织50mg置于无RNA酶的匀浆器中，快速加入Trizol 1mL匀浆，按Trizol试剂盒说明书提取总RNA。分光光度计检测其吸光度，其OD260/280值为1.8～2.0，经1%琼脂糖［含溴化乙烷（ethidium bromide，EB）0.5mg/mL］电泳可见28S、18S两条亮带并且亮度呈2∶1关系，说明总RNA无降解。取2μg总RNA逆转录合成cDNA，用primer 5软件设计VEGF-C的引物序列，以管家基因β-actin作为内参照。反应条件，95℃30s，54℃30s，72℃30s，30个循环。PCR扩增产物经1.5%琼脂糖凝胶电泳（100V，1h），置紫外灯下拍照后进行面积灰度扫描。计算目的基因产物与β-actin基因RT-PCR产物吸光度容积之比值作为目的基因mRNA的相对含量。

1.3 统计学方法：应用SPSS16.0统计软件进行数据分析。计量资料以±s表示，组间比较采用两独立样本的t检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

在42例配对结肠癌标本中，癌与正常组织的VEGF-C相对表达量分别为0.545±0.273、0.494±0.330，癌组织中VEGF-C轻度高表达，但差异无统计学意义（P＞0.05）；Duke分期C+D期患者mRNA水平明显高于A+B期（0.724±0.210 vs 0.445±0.257，P＜0.05）；淋巴结转移组VEGFC表达也呈高表达状态（0.773±0.159 vs 0.473± 0.264，P＜0.05）；TNM分期Ⅲ+Ⅳ期的VEGF-C有升高趋势（0.660±0.230 vs 0.401±0.317，P＞0.05）；VEGF-C在浸润超过浆膜层的患者表达水平高（0.653±0.268 vs 0.427±0.247，P＜0.05）。VEGF-C mRNA表达水平在不同性别、年龄、肿瘤位置及分化程度分组中差异无统计学意义（P＞0.05）。见表1。

表1 VEGF-C mRNA在肿瘤组织中表达量与临床病理参数之间的关系Table 1 Correlation of VEGF-C mRNA expression with clinicopathologic features in colorectal tumor（±s）

表1 VEGF-C mRNA在肿瘤组织中表达量与临床病理参数之间的关系Table 1 Correlation of VEGF-C mRNA expression with clinicopathologic features in colorectal tumor（±s）

ParametersnVEGF-C mRNA tP Sex Male Female 25 17 0.576±0.278 0.450±0.2720.6730.508 Age＞61 years≤61 years 20 22 0.608±0.297 0.487±0.2451.1140.277 Duke A+B C+D 27 15 0.445±0.257 0.724±0.2102.7810.011 Tumor location Dectum Colon 20 22 0.600±0.286 0.486±0.2561.0500.304 Depth of invasion Exceeding serosa Not exceeding serosa 22 20 0.653±0.268 0.427±0.2472.1320.045 Lymph node metastasis No Yes 26 16 0.473±0.264 0.773±0.1592.6100.016 TNMⅠ+ⅡⅢ+Ⅳ26 16 0.401±0.317 0.660±0.2301.8500.075 Differentiation Low High 11 31 0.562±0.278 0.547±0.2740.1040.920

3 讨 论

众所周知，结直肠癌最常见的转移方式是淋巴转移，并且是否发生淋巴转移是预测结直肠癌患者预后的关键因素。尽管目前人们普遍认为结直肠癌淋巴管生成在转移过程中发挥作用，但在淋巴管密度与肿瘤转移的关系问题上仍未达成一致。Furudoi等［5］认为肿瘤表面的VEGF-C表达与结直肠癌临床病理特征无明显关系。Hanrahan等［6］研究发现VEGF-C表达与淋巴结转移无关。还有研究显示结直肠肿瘤中VEGF-C表达水平没有升高［7］。本研究检测了42例结直肠癌组织及其配对正常黏膜组织VEGF-C mRNA的表达，发现在癌组织中其表达水平有升高的趋势，这可能与取材靠近肿瘤边缘有关。研究显示VEGF-C表达在肿瘤边缘明显增高［8］。多种体内模型显示过表达VEGFC和VEGF-D可以促进肿瘤侵袭及淋巴结转移，而这个作用会被游离VEGFR-3或VEGF-D单克隆抗体以及作用于VEGF-C的siRNA抑制［9］。免疫组织化学研究显示VEGF-C的高表达与淋巴管密度、TNM分期、肿瘤转移等临床特征有关［10-13］。我们发现TNM分期较低者（Ⅰ+Ⅱ）VEGF-C表达较低，而侵袭深度超过浆膜层患者其表达水平明显升高。

Zhang等［14］研究发现VEGF-C与胰岛素样生长因子受体同时高表达与淋巴结转移有很强的的相关性，而且在表达胰岛素样生长因子受体的结直肠癌细胞中，胰岛素样生长因子刺激能导致VEGF-C mRNA表达的升高。Du等［10］研究显示VEGF-C与高转移相关蛋白表达上调与淋巴结转移及Duke分期有关。本研究显示在Duke C+D期VEGF mRNA水平明显升高，而且与淋巴结转移有关。

大肠癌的淋巴转移是个复杂的过程，尽管其分子机制尚未完全阐明，但VEGF-C在促进大肠癌淋巴管生成和肿瘤转移中发挥着重要作用。临床分析显示VEGF-C与结直肠癌淋巴结转移、侵袭有关，可以作为一个独立的预后因子应用于大肠癌患者的病情监测和预后判断。这些研究的深入将为大肠癌转移的预防和治疗提供新的方向和思路。

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（本文编辑：赵丽洁）

RELATIONSHIP BETWEEN THE EXPRESSION OF VEGF-C mRNA AND TUMOR EVOLUTION IN COLORECTAL CANCER

PEI Yongbin，HE Xinqi，MENG Limin，LIU Yun，ZHAO Zengren*
（Department of General Surgery，the First Hospital of Hebei Medical University，Shijiazhuang 050031，China）

ObjectiveTo investigate the relationship between the expression of vascular endothelial growth factor-C（VEGF-C）mRNA and tumor evolution in colorectal cancer.MethodsForty-two colorectal cancer tissues and normal tissues were selected randomly，reverse transcriptionpolymerase chain reaction（RT-PCR）was used to detect the expression of VEGF-C mRNA.All specimens had complete clinicopathologic data.ResultsRT-PCR showed the expression of VEGF-C mRNA in colorectal cancer and normal tissue were 0.545±0.273 and 0.494±0.330，respectively. However，VEGF-C mRNA was mildly high expressed in adenoma tissues，but there was no significance compared with the normal tissues（P＞0.05）.The expression of VEGF-C mRNA in Dukes C+D were significantly higher than Dukes A+B（0.724±0.210 vs 0.445±0.257，P＜0.05）.There was an increasing tendency of VEGF-C mRNA expression in TNM stageⅢ+Ⅳ（0.660±0.230 vs 0.401± 0.317，P=0.075），and high expression in lymph node metastasis group（0.773±0.159 vs 0.473± 0.264，P＜0.05）.The expression of VEGF-C mRNA were closely correlated with lymph node metastasis（P＜0.05），but not with patient's sex，age，differentiation degree and tumor location（P＞0.05）.ConclusionThis study suggests that the expression of VEGF-C mRNA in CRC is associatedwith lymph node metastasis and invasion depth，and it may be used as an independent factor for disease surveillance and prognosis assessment.

colorectal neoplasms；vascular endothelial growth factor C；immunohistochemistry

R735.3

A

1007-3205（2012）12-1396-03

2012-06-04；

2012-11-23

河北省卫生厅青年科技课题（20100263）

裴永彬（1977-），男，河北邯郸人，河北医科大学第一医院主治医师，医学硕士，从事普外科疾病诊治研究。

*通讯作者

10.3969/j.issn.1007-3205.2012.12.012