肺抑宁I号对Lewis肺癌小鼠TNF-α表达的影响

张颖 梁靓靓 徐银娣 蔡玉文

（辽宁中医药大学杏林学院，沈阳110100）

肺抑宁I号对Lewis肺癌小鼠TNF-α表达的影响

张颖 梁靓靓 徐银娣 蔡玉文

（辽宁中医药大学杏林学院，沈阳110100）

目的探讨肺抑宁I号对Lewis肺癌小鼠TNF-α表达的影响。方法以肺抑宁I号治疗Lewis肺癌小鼠，观察其对小鼠TNF-α表达的影响。结果肺抑宁I号能够上调细胞因子TNF-α蛋白的表达。结论肺抑宁I号上调细胞因子TNF-α蛋白的表达可能是其抗肿瘤的作用机制之一。

肺抑宁I号；Lewis肺癌小鼠；TNF-α

1 材料与方法

1.1 动物和瘤株10周龄雌性近交系C57BL/6小鼠60只，体重（20±2）g，清洁级，由中国医学科学院实验动物研究所提供，合格证号SCXK（京）2004-0001；Lewis肺癌细胞株，中国医科大学免疫教研室提供。

1.2 药物肺抑宁I号，组成：黄芪20g，人参20g，白术15g，南沙参15g，麦冬15g，山慈姑15g，莪术10g，天花粉15g，白花蛇舌草20g，土鳖虫10g，生甘草10g。购于千金堂药房。按中药常规煎法煎成相当生药1g/ml的药液，存4℃备用。注射用顺铂（DDP），10mg/支，齐鲁制药（海南）有限公司生产，国药准字H20073652，每日给药前用生理盐水配成1mg/ml溶液。

1.3 试剂和仪器一抗兔抗鼠TNF-α，碱性磷酸酶标记羊抗兔IgG，O-Dianidine，Tween-20，SDS，β-Naphthyl Acid Phosphate，NC membranes等。

1.4 实验方法

1.4.1Lewis肺癌小鼠模型的建立按常规方法将Lewis瘤株复苏，接种于C57BL/6小鼠腹腔，9d后抽取腹水以生理盐水洗涤，台盼蓝染色记录活细胞数＞95%，调整细胞浓度至约2×106个/ml，选48只小鼠于右侧腋窝皮下接种0.2ml。

1.4.2 分组与给药接种5d后，选取荷瘤成功的小鼠40只，随机分为模型组（MG）、肺抑宁I号组（FG）、综合组（肺抑宁I号加顺铂组，FDG）、顺铂组（DG）；取未种瘤的10只小鼠组成空白对照组（CG）。依据人和鼠给药剂量换算公式[2]dB=dARB/RA（WA/WB）1/3，各组均在接种5d后晨起空腹开始给药。灌胃，每日1次，连续12d，FG组和FDG组予肺抑宁I号16.5g/kg/d，0.4ml；其余各组予等量饮用水。腹腔注射，隔日一次，共3d。DG组和FDG组予顺铂注射液0.13ml；其余各组予等量生理盐水。

1.5 实验观察指标TNF-α的表达：用Western Blotting法检测移植瘤TNF-α的表达，以β-actin内参蛋白作对照，用Band Scan软件分析结果（灰度值）。

1.6 统计学处理用SPSS 11.0统计软件进行数据处理。

2 结果

电泳后，所有TNF-α及β-actin的扩增产物均符合设计的大小，见图1。经Band Scan软件扫描，分析条带灰度值，结果显示，中药组比模型组明显升高，差异具有显著统计学意义，P＜0.01；综合组比模型组升高，差异有统计学意义，P＜0.05。中药组和综合组均比西药组明显升高，差异具有显著统计学意义，P＜0.01。见表1，图2。

表1 各组小鼠TNF-α蛋白表达灰度值的比较（±s）

图1 小鼠肿瘤组织TNF-α的表达1DG2FG3FDG4MG

图2 小鼠肿瘤组织TNF-α表达灰度值曲线

3 讨论

沙参麦冬汤为治疗肺胃阴虚的代表方剂，具有清养肺胃，生津润燥的功效。后世[1-3]在该方的基础上配伍清热解毒药物，证实具有多途径多靶点抑制肿瘤生长、转移，延长荷瘤小鼠生存时间，提高荷瘤小鼠免疫力的作用。补中益气汤[4]为补中益气代表方剂，是金元四大家之一李杲所创。诸药合用，养阴清肺，扶正抗癌。

TNF-α通过对人体免疫系统的调节从而加强自身的抗肿瘤作用。本实验结果显示，中药组和综合组均比模型组和西药组升高，差异具有统计学意义，P＜0.05。以上结果表明，肺抑宁I号上调TNF-α的表达，可能是其抗肿瘤的作用机理之一。

[1]杨敬宁,周彬.沙参麦冬汤对阴虚大鼠免疫功能的影响[J].实用中医药杂志,2005,21(12):5.

[2]舒琦瑾,吴良村.新加沙参麦门冬汤抗肿瘤的实验研究[J].中国中医基础医学杂志,2002,8(4):34-36.

[3]冯正权,吴良村,沈敏鹤.新加沙参麦冬煎剂抑制肿瘤转移及其作用机制的实验研究[J].医药导报,2006,25(12):1249-1252.

[4]米娜,吴敏毓,孙卫民.拆方研究补中益气汤中黄芪甘草及全方的免疫调节作用[J].皖南医学院学报,2002,21(1):13-15.

10.3969/j.issn.1672-2779.2012.05.111

1672-2779（2012）-05-0159-01

：苏玲

2012-02-08）