排风藤茎叶果中番茄碱的含量测定

董文娟 李双双 邹 坤 程 凡 周 媛

（三峡大学 化学与生命科学学院，湖北 宜昌 443002）

排风藤（Solanumcathayanu）为茄科（Solanaleae）茄属植物，我国特有种产.三峡地区的巴东、长阳、秭归、兴山以及神农架，全国大部分地区均有分布［1].排风藤亦为长江三峡库区民间广为使用的民间中草药［2]，本实验室对采自湖北恩施的排风藤进行了化学成分及其药理活性的研究，发现其中所含的生物碱具有显著的抗炎活性，而所含的番茄碱为含量较大的成分［3－4].本实验室曾报道［5]对自排风藤正丁醇部位水不溶部分中分离得到的番茄碱，采用RP－HPLC精制，以精制的番茄碱为对照品，采用RP－HPLC高效液相色谱法测定排风藤全草中番茄碱的含量.本文进一步测定排风藤茎叶果各部位中番茄碱的含量.采用甲醇超声辅助浸提，浸提液浓缩得浸膏，以水悬浮，乙酸乙酯萃取除去弱极性组分，水相部分过滤，滤渣以甲醇溶解得到排风藤待测样品，利用RP－HPLC高效液相色谱法测定排风藤茎叶果中番茄碱的含量，为更好地开发利用传统中草药排风藤［6]提供科学依据.

1 材料与仪器

1.1 材料与试药

排风藤：于2010年10月采自中国湖北恩施，其原植物标本采自同一地区，经本实验室杨进副教授鉴定为Solanumcathayanu，原植物及药材现保存于本实验室（编号：SC201010ES）.

对照品：番茄碱，为本实验室自排风藤中分离得到，并经波谱学解析（NMR，ESI－MS）并结合文献［7]确定其化学结构为番茄碱，以HPLC面积归一化法测定，纯度＞98%.

对照品溶液：准确称取番茄碱对照品适量，加甲醇配制成浓度约为1.0mg·mL－1的贮备液，临用时以甲醇稀释成0.10、0.15、0.25、0.40、0.50、0.60 mg·mL－1的系列对照品溶液.

1.2 仪器与设备

Prostar 210型高效液相色谱仪（美国瓦里安Varian）；N1001型旋转蒸发仪（上海爱朗仪器有限公司）；ME215S型十万分之一电子天平（德国Sartorius）；KQ－500DB数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）.

2 方 法

2.1 番茄碱的精制

对自排风藤正丁醇水不溶部分分离得到的粗番茄碱采用 HPLC精制分离.色谱条件：YMC－Pack ODS－AA（250×10mm，5μm）色谱柱；柱温30℃；流速4mL·min－1；检测波长203nm；流动相为乙腈－水（90∶10，v·v－1）.番茄碱色谱峰保留时间42.6min.将上述制备得到的流分减压浓缩，干燥得精制番茄碱，经面积归一化法测定纯度为98.2%.

2.2 番茄碱含量分析

2.2.1 色谱条件

YMC－Pack ODS－AA（150×4.6mm，5μm）色谱柱；流速1mL·min－1；柱温：30℃；流动相：乙腈－水（90∶10，v·v－1）；检测波长：203nm；在此色谱条件下，对照品与供试品的保留时间一致（42.6min），供试品中番茄碱成分达到有效分离，分离度大于1.5.对照品及供试品的色谱图如图1所示.

图1 番茄碱对照品和排风藤不同部位样品的高效液相色谱图

2.2.2 样品预处理

分别精密称取干燥的排风藤茎、叶、果粉末2g，加入25mL甲醇室温冷浸4h，于60℃下超声浸提60 min，过滤，滤液减压浓缩至干，加入20mL水悬浮，用20mL乙酸乙酯萃取，分取水层，过滤，滤渣用10 mL甲醇溶解，定容.以0.22μm微孔滤膜过滤，得供试品溶液，低温保藏备用.

3 结果与分析

3.1 标准工作曲线

分别精密吸取各番茄碱对照品溶液20μL进样，按2.2.1中色谱条件测定色谱峰面积（番茄碱对照品的HPLC图谱见图a），以峰面积Y为纵坐标，浓度X（mg·mL－1）为横坐标，绘制工作曲线，并进行线性回归.结果表明，在对照品浓度为0.10～0.60mg·mL－1范围内线性关系良好，回归方程：Y＝5.014 5×107X－0.248 6，r＝0.999 7.

3.2 精密度试验

精密吸取0.10、0.25、0.60mg·mL－1的对照品溶液各20μL，按2.2.1中色谱条件连续进样，每个浓度进样3次，测定色谱峰面积，计算RSD为2.60%（n＝9），表明仪器精密度良好.

3.3 重复性试验

取排风藤茎叶果各部位粉末约2.0g，每个部位6份，精密称定.按2.1方法平行制备，按2.2.1色谱条件下进行分析，测定茎部位的平均峰面积为7 234 412，RSD为2.60%；叶部位的平均峰面积为3 237 136，RSD为2.40%；果部位的平均峰面积为6 749 496，RSD为2.80%.

3.4 稳定性试验

精密吸取排风藤茎部位供试品溶液20μL，于0、4、12、24、36、48h分别进样，测定其平均峰面积为7 084 945，其RSD值为1.67%（n＝6），表明48h内供试品溶液稳定性良好.

3.5 加标回收率试验

精密称取已知番茄碱含量的样品9份（排风藤茎部位样品），平均分为3组.各样品分别精密加入已知浓度的对照品溶液适量，按供试品溶液制备方法平行制备.按2.2.1中色谱条件，分别进样20μL进行测定，得平均回收率为97.6%（n＝9），RSD为2.93%.结果见表1.

表1 番茄碱加标回收率的测定（n＝9）

3.6 排风藤茎叶果中番茄碱的含量测定

按2.2.1中色谱条件测定排风藤茎叶果中番茄碱的含量.排风藤茎叶果部位供试液的HPLC色谱图见图1.测得排风藤茎部位中番茄碱的含量为1.104mg·g－1，RSD为2.60%；排风藤叶部位中番茄碱的含量为0.494mg·g－1，RSD为2.40%；排风藤果部位中番茄碱的含量为1.030mg·g－1，RSD为2.80%；以茎部位中番茄碱含量最高.

4 结 论

本文对采用系统分离方法得到的排风藤正丁醇部位中水不溶部分经正相硅胶柱层析后，重结晶纯化得到的粗番茄碱进行HPLC精制，采用超声辅助浸提的方法制备排风藤供试品，并且以精制得到的番茄碱为对照品，建立了RP－HPLC法测定排风藤茎叶果中番茄碱的含量.测得排风藤茎叶果中番茄碱的含量分别为1.104mg·g－1、0.494mg·g－1、1.030mg·g－1，RSD分别为2.60%、2.40%、2.80%.同时还进行了方法学验证，结果表明方法的精密度、稳定性、回收率等指标均满足测定要求，可为排风藤药材的质量控制提供参考，为开发利用三峡库区民间中草药排风藤提供研究基础.

［1]中国科学院武汉植物研究所.湖北植物志［M].武汉：湖北科学技术出版社，2002：517.

［2]余甘霖，沈 力，易东阳，等.长江三峡库区中草药资源调查研究［J].实用中医药杂志，2005，21（3）：187.

［3]谢明霞.排风藤化学成分及抗炎、保肝药理活性研究［D].宜昌：三峡大学，2009.

［4]张红艳，周 媛，邹 坤，等.排风藤的生药学鉴定［J].实用中医药杂志，2005，21（3）：187.

［5]郭江红，周 媛，刘 蓉，等.RP－HPLC测定排风藤中番茄碱的含量［J].中国中药杂志，2010，35（7）：882－884.

［6]湖北省食品药品监督管理局.湖北省中药材质量标准［M].武汉：湖北科学技术出版社，2009：117－118.

［7]Thorne H V，Clarke G F.The Inactivation of Herpes Simplex Virus by Some Solanaceae Glycoalkaloids［J].Antiviral Res，1985，5（6）：335－343.