超声提取–毛细管气相色谱法检测酱腌菜中对羟基苯甲酸酯

张全美，黄锦燕 王守卿

(淄博市产品质量监督检验所，山东淄博 255033) (淄博市淄川区农业局，山东淄博 255033)

对羟基苯甲酸酯(Paraben)也称为尼泊金酯，因非挥发性、良好的杀菌能力和稳定性，而被用作防腐剂。对羟基苯甲酸酯类是世界上用量较大的防腐剂，它具有高效、低毒、广谱、易配伍的优点，其毒性比苯甲酸钠低，且pH应用范围广，在pH 4～8时，其抑菌作用基本不受pH的影响，对霉菌、酵母、细菌等具有广泛的抗菌作用。我国于2002年3月批准对羟基苯甲酸甲酯钠、对羟基苯甲酸乙酯钠和对羟基苯甲酸丙酯钠作为食品防腐剂。近年来的研究表明，对羟基苯甲酸丙酯危害较大，吸入、摄入或经皮肤吸收对身体有害，对眼、粘膜和上呼吸道和皮肤有刺激作用[1]，因此GB 2760-2011标准不再支持对羟基苯甲酸丙酯作为食品添加剂使用[2]。建立一个高选择性和高灵敏度的方法来检测食品中的对羟基苯甲酸酯，对于确保食品安全具有非常重要的意义。目前对羟基苯甲酸酯的检测方法有固相萃取-高效液相色谱法[3]、超声萃取-高效液相色谱法[4]、毛细管气相色谱法[5]和国家标准方法 GB／T 5009.31-2003[6]。GB／T 5009.31-2003 规定用气相色谱法测定对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯，适合酱油、醋、水果汁及果酱中对羟基苯甲酸酯的测定，不适合酱腌菜中对羟基苯甲酸酯的测定，且样品前处理方法繁琐耗时，无法满足大批量检测的需要。笔者采用超声提取-毛细管气相色谱法检测酱腌菜中对羟基苯甲酸酯，前处理简单，耗时短，灵敏度高，重现性好，适合大批量检测的需要。

1 实验部分

1.1 主要仪器与试剂

气相色谱仪：6890型，配FID检测器、7890A色谱工作站、G4513A自动进样器，美国安捷伦科技有限公司；

离心机：TGL-16M型,长沙湘仪离心机有限公司；

漩涡混合器：GL-88B型，海门麒麟医用仪器厂；

超声波仪：SK 2200H型，广州沪瑞明仪器有限公司；

乙醚：重蒸；

盐酸溶液：取50 mL盐酸，用水稀释至100 mL；

对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯标准品：纯度分别为99.8%，99.7%，99.2%，上海安普科学仪器有限公司。

1.2 样品处理

将样品在组织粉碎机中捣碎，称取5.0 g试样于25 mL容量瓶中，加入1 mL 1∶1盐酸溶液酸化，漩涡混合2 min，再加入20 mL乙醚溶液，在超声波水浴中超声提取20 min，用乙醚溶液定容至标线，摇匀。将溶液转移至离心管，以3000 r／min离心10 min，取上清液上机测定。

1.3 气相色谱条件

毛细管柱：SE30型(33 m×0.53 mm，2.65 μm)；柱温：170℃；进样口、检测器温度：220℃；载气：氮气，流速为15.1 mL／min；氢气流速：40 mL／min，空气流速：350 mL／min；进样体积：1 μL。

1.4 标准曲线的绘制

对羟基苯甲酸酯混合标准溶液：准确称取对羟基苯甲酸甲酯、羟基苯甲酸乙酯、羟基苯甲酸丙酯标准品各0.2000 g，混合后用乙醚溶解，定容至200 mL，此溶液中对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯的含量均为1.0 mg／mL。

对羟基苯甲酸酯混合标准使用液：各取对羟基苯甲酸酯类混合标准液 0，5，10，25，50，75 mL，分别移入100 mL容量瓶中，以乙醚定容，此时标准系列的浓度分别为 0，50，100，250，500，750 μg／mL。

2 结果与讨论

2.1 线性范围及检出限

将混合标准溶液进样1 μL进行气相色谱分析，色谱图如图1。

从图1可见，对羟基苯甲酸甲酯、羟基苯甲酸乙酯、羟基苯甲酸丙酯标准样品在1.3色谱条件下都得到了较好分离，出峰保留时间在3～6 min之间。实验结果表明，对羟基苯甲酸甲酯、羟基苯甲酸乙酯、羟基苯甲酸丙酯在0～750 μg／mL浓度(X)范围内与色谱峰面积(Y)呈良好的线性关系，线性方程与相关系数见表1。由表1可知，对羟基苯甲酸甲酯、羟基苯甲酸乙酯、羟基苯甲酸丙酯的线性相关系数均大于0.999。

按照3倍信噪比计算，对羟基苯甲酸甲酯、羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯的检出限分别为0.1，0.1，0.2 μg／mL。

表1 线性方程和相关系数

2.2 精密度试验

以超声波浸提离心的方法进行样品前处理，各连续测定11次，计算相对标准偏差，测定结果列于表2。

表2 精密度试验结果

由表2可知，对羟基苯甲酸甲酯、乙酯、丙酯的平均值分别为 0.068，0.084，0.054 g／kg，相对标准偏差分别为3.22%，2.61%，3.57%。

2.3 回收试验

称取不含对羟基苯甲酸甲酯、乙酯、丙酯的酱腌菜5.0 g于25 mL容量瓶中，分别加入对羟基苯甲酸酯类混合标准液 0.5，2，4，8 mL，浓度分别为20，80，160，320 μg／mL。按 1.2 样品处理方法处理样品并分离提取后，经气相色谱仪分析测定，测定数据见表3。

表3 回收试验结果

由表3可知，对羟基苯甲酸甲酯的平均回收率在87.5%～95.4%之间，对羟基苯甲酸乙酯的平均回收率在84.5%～94.8%之间，对羟基苯甲酸丙酯的平均回收率在86.5%～97.1%之间，表明该法准确度较高。

3 结语

采用超声提取和离心处理酱腌菜样品，气相色谱法检测对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯和对羟基苯甲酸丙酯，方法的精密度、准确度均较好。该方法快速简便、使用溶剂较少，适合日常大批量检测工作的需要。

[1]黄辉，曹小彦，彭新凯.气相色谱法快速测定槟榔中的对羟基苯甲酸酯[J].食品科技，2010(8): 336-338.

[2]GB 2760-2011 食品安全国家标准食品添加剂使用标准[S].

[3]陈春祝，谢维平，曾志定.固相萃取-高效液相色谱法测定6种常见食品添加剂[J].中国卫生检验杂志，2006(6): 49-50.

[4]刘文杰，万英，马玲.超声萃取-液相色谱法测定食品中对羟基苯甲酸酯类防腐剂[J].塔里木大学学报，2006 (3): 18-20.

[5]陈利国，曹小彦，黄辉，等.毛细管气相色谱法直接测定食品中4种对羟基苯甲酸酯[J].食品与机械，2010(1): 67-69.

[6]GB／T 5009.31-2003 食品中对羟基苯甲酸酯类的测定[S].