新疆沙枣总黄酮含量的测定及提取工艺的优化

孙芸 刘艺 燕雪花 丁文欢 田树革

摘要：以芦丁为对照品，ＮａＮＯ２－Ａｌ（ＮＯ３）３－ＮａＯＨ显色体系为显色剂，采用分光光度法测定新疆沙枣（Ｅｌａｅａｇｎｕｓ ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ Ｌ．）果实、树叶和树枝中总黄酮的含量。采用正交试验优化新疆沙枣树叶中总黄酮的提取工艺。结果表明，新疆沙枣树叶的总黄酮含量为（１８．７５±０．１１）ｍｇ／ｇ（ｎ＝３），树枝和果实的总黄酮含量分别为（１１．７２±０．１2）ｍｇ／ｇ和（８．７５±０．１０）ｍｇ／ｇ（ｎ＝３）。新疆沙枣树叶总黄酮的最佳提取工艺为乙醇体积分数７０％，提取时间１．５ ｈ，料液比１∶１２（ｍ／Ｖ，ｇ∶ｍＬ），提取２次。该方法简单、准确、重复性好。

关键词：新疆沙枣（Ｅｌａｅａｇｎｕｓ ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ Ｌ．）；总黄酮；工艺优化

中图分类号：Q949.761.2；R284.2 文献标识码：Ａ 文章编号：0439－８114（２０12）16－3570-02

Determination of Total Flavonoids in Elaeagnus angustifolia from Xinjiang and Optimization of the Extraction Process

ＳＵＮ Ｙｕｎ１，２，ＬＩＵ Ｙｉ３，ＹＡＮ Ｘｕｅ－ｈｕａ１，２，ＤＩＮＧ Ｗｅｎ－ｈｕａｎ２，ＴＩＡＮ Ｓｈｕ－ｇｅ１，２

（１． Ｘｉｎｊｉａｎｇ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｆａｍｏｕｓ Ｐｒｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ａｎｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ ｏｆ Ｆｏｒｍｕｌａｓ，Ｕｒｕｍｑｉ ８３００１１，Ｃｈｉｎａ；

２． Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｘｉｎｊｉａｎｇ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｕｒｕｍｑｉ ８３００１１，Ｃｈｉｎａ；

３． Ｔraditional Chinese Medine Ｈｏｓｐｉｔａｌ in Ｕｒｕｍｑｉ of Xinjiang Uygur Autonomous Region，Ｕｒｕｍｑｉ ８３００００，Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｉｎ ｆｒｕｉｔ， ｌｅａｖｅｓ ａｎｄ ｂｒａｎｃｈ ｏｆ Ｅｌａｅａｇｎｕｓ ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ L. ｗａｓ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｂｙ ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ ｗｉｔｈ ｒｕｔｉｎ ａｓ ｓｔａｎｄａｒｄ ａｇｅｎｔ ａｎｄ ＮａＮＯ２－Ａｌ（ＮＯ３）３－ＮａＯＨ ｓｙｓｔｅｍ ａｓ ｃｈｒｏｍｏｇｅｎｉｃ ｒｅａｇｅｎｔ． Ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｔｅｓｔ ｗａｓ ａｄｏｐｔｅｄ ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｐｒｏｃｅｓｓ ｉｎ ｌｅａｖｅｓ． Ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｉｎ ｌｅａｖｅｓ， ｂｒａｎｃｈ ａｎｄ ｆｒｕｉｔ ｗａｓ（１８．７５±０．１１），（１１．７2±０．１2），（８．７５±０．１０）ｍｇ／ｇ（ｎ＝３）， ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ． Ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｕｍ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｏｆ ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｆｒｏｍ Ｅ． ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ ｌｅａｖｅｓ ｗａｓ， ｖｏｌｕｍｅ ｆｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ ａｌｃｏｈｏｌ， ７０％； ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｉｍｅ， １．５ ｈ； ｍａｔｅｒｉａｌ ｔｏ ｌｉｑｕｉｄ ｒａｔｉｏ， １∶１２（ｍ／Ｖ，ｇ∶ｍＬ）； ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｉｍｅ， ｔｗｉｃｅ． Ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ ｓｉｍｐｌｅ， ａｃｃｕｒａｔｅ ａｎｄ repeatable．

Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： Ｘｉｎｊｉａｎｇ Ｅｌａｅａｇｎｕｓ ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ Ｌ．； ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ； ｐｒｏｃｅｓｓ ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ

沙枣（Ｅｌａｅａｇｎｕｓ ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ Ｌ．）属胡颓子科（Ｅｌａｅａｇｎａｃｅａｅ）胡颓子属（Ｅｌａｅａｇｎｕｓ）植物，又名香柳、桂香柳、银柳和七里香等［１］，集中分布在中国东北、西北等地区，在新疆作为防风林被广泛种植，具有抗旱、抗盐碱的特性，其自然资源极为丰富。沙枣的枝、叶、花、果都具有开发利用价值，具有较高的经济价值，被誉为沙荒、盐碱地的“宝树”。沙枣维药名为吉嘎旦［２］，具有健脾胃、止泻涩肠的作用，用于脾胃虚弱、消化不良、肠炎腹泻、肺热咳嗽等疾病的治疗。一般每年秋季采摘成熟果实，晒干贮藏于干燥处。沙枣的果实、枝叶、花均能供药用［３］。从沙枣树叶粗提后制成的总黄酮片能治疗慢性气管炎，沙枣树叶的黄酮制剂有缓解冠心病患者的症状、减少心绞痛的发病次数及改善心电图的作用［４］。

近年来对沙枣的研究主要集中在其果实方面，对沙枣树叶及树枝的研究较少。试验测定了新疆沙枣树叶、树枝和果实的总黄酮含量，比较了不同部位总黄酮含量的差异；同时对沙枣树叶总黄酮的提取工艺进行了优化，获得了最佳提取工艺，可为新疆沙枣资源的开发和合理应用提供参考。

１材料与方法

１．１材料

沙枣树叶、树枝和果实：于２０１０年１１月采自新疆维吾尔自治区昌吉回族自治区州阜康市２２２团场，阴干，密封保存。

试剂：芦丁对照品购自中国食品药品检定研究院，批号１０００８０－２００７０７，纯度﹥９８％；其余试剂均为分析纯。

仪器：Ｓｐｅｃｔｒｕｍｌａｂ ２２ｐｃ紫外可见分光光度计购自上海棱光技术有限公司，ＢＳ２２０２Ｓ电子天平购自北京赛多利斯仪器系统有限公司，ＤＫ－６００Ａ型电热恒温水箱购自上海一恒科技有限公司，ＤＨＧ－９２４０Ａ型电热恒温鼓风干燥箱购自上海精宏实验设备有限公司，ＲＥ－５２旋转蒸发仪购自上海亚荣生化仪器厂，ＴＤＬ－５型低速台式离心机购自上海隆拓仪器设备有限公司，ＤＬ－３６０Ａ超声波清洗器购自上海之信仪器有限公司。

１．２方法

１．２．１对照品溶液的制备精密称取在１０５ ℃干燥至恒重的芦丁对照品８．４０ ｍｇ，用体积分数为９５％的乙醇定容至５０ ｍＬ容量瓶中，得０．１６８ ｍｇ／ｍＬ对照品溶液，摇匀，备用［５－７］。

１．２．２最大吸收波长的确定精确吸取２．０ ｍＬ芦丁对照品溶液至２５ ｍＬ容量瓶中，加５０ ｇ／Ｌ ＮａＮＯ２溶液、１００ ｇ／Ｌ Ａｌ（ＮＯ３）３溶液和４０ ｇ／Ｌ ＮａＯＨ溶液为显色剂，作芦丁的吸收曲线，在２００～６００ ｎｍ波长下扫描其吸光度，结果表明在５００ ｎｍ处有强吸收峰，故选择５００ ｎｍ作为测定波长。

１．２．３标准曲线的建立分别准确量取上述芦丁对照品溶液１、２、３、４、５、６ ｍＬ至２５ ｍＬ容量瓶中，各加去离子水至６ ｍＬ，加５０ ｇ／Ｌ ＮａＮＯ２溶液１ ｍＬ，摇匀，放置６ ｍｉｎ，加１００ ｇ／Ｌ Ａｌ（ＮＯ３）３溶液１ ｍＬ，摇匀，放置６ ｍｉｎ，加４０ ｇ／Ｌ ＮａＯＨ溶液１０ ｍＬ，加去离子水至刻度，摇匀，放置１５ ｍｉｎ，在５００ ｎｍ波长下测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，制作标准曲线。

１．２．４供试品溶液的制备分别准确称取沙枣果实、树叶和树枝粗粉各３０ ｇ，按料液比１∶１０（ｍ／Ｖ，下同）加入体积分数为７０％的乙醇于２５０ ｍＬ容量瓶中，浸泡３０ ｍｉｎ，回流提取２ ｈ，过滤，浓缩，然后用去离子水定容，作为供试品储备液Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ。

１．２．５正交试验选取乙醇体积分数、提取时间、料液比和提取次数为考察因素，按照Ｌ９（３４）正交设计优化提取工艺［８－１０］，因素与水平见表1。

２结果与分析

２．１标准曲线的建立及各种验证试验结果

2.1.1标准曲线的建立结果以吸光度Ａ为纵坐标，浓度Ｃ为横坐标，得线性回归方程：Ａ＝０．１７３ ２Ｃ＋０．０１１ ７，ｒ＝０．９９８ ７。线性范围为０～０．０４０ ３ ｍｇ／ｍＬ。

２．1.２精密度试验结果精密吸取上述芦丁对照品溶液２ ｍＬ置于２５ ｍＬ容量瓶中，共３份，按１．２．３操作分别测定其吸光度。得到变异系数为０．３７％（ｎ＝３），表明仪器的精密度良好。

２．1.３稳定性试验结果按１．２．４操作制备沙枣树叶供试品溶液，在波长５００ ｎｍ处测定吸光度，每隔３０ ｍｉｎ测定１次，连续测定４ ｈ，得到吸光度的变异系数为２．８７％，表明供试溶液在４ ｈ内基本稳定。

２．1.４重复性试验结果按１．２．４操作制备沙枣树叶供试品溶液６份，在５００ ｎｍ处测定吸光度，得到变异系数为２．２４％，表明方法重复性良好。

２．1.５回收率试验结果按１．２．４操作精密吸取已知含量的沙枣树叶供试品溶液６份，每样吸取１ ｍＬ，分别精密加入芦丁对照品溶液１ ｍＬ，按１．２．３操作分别测定吸光度，计算回收率和变异系数。得到平均回收率为９９．８９％，变异系数为２．７４％（表２）。

２．2样品的测定结果

准确量取供试品储备液Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ各２ ｍＬ，分别置于２５ ｍＬ容量瓶中，按１．２．３操作测定吸光度，由线性回归方程计算供试品溶液中总黄酮的含量。测得沙枣果实、树叶和树枝中总黄酮含量分别为（８．７５±０．１０）、（１８．７５±０．１１）和（１１．７２±０．１2）ｍｇ／ｇ（ｎ＝３）。试验结果表明，沙枣树叶中总黄酮含量最高。

２．3正交试验结果

方差分析结果表明，乙醇体积分数对总黄酮的含量有显著影响。由表３可知，各因素的影响大小为乙醇体积分数＞料液比＞提取时间＞提取次数，新疆沙枣树叶中总黄酮的最佳提取条件为Ａ２Ｂ２Ｃ３Ｄ２，即乙醇体积分数为７０％，提取时间为１．５ ｈ，料液比为１∶１２，提取２次。

２．4验证试验结果

按照最佳提取工艺Ａ２Ｂ２Ｃ３Ｄ２进行验证试验，结果新疆沙枣树叶总黄酮的平均含量为（１８．８９±０．０8）ｍｇ／ｇ（ｎ＝３）。

３结论与讨论

试验结果表明，新疆沙枣树叶的总黄酮含量最高，其次为沙枣树枝，沙枣果实中最低。在乙醇体积分数为７０％，提取时间为１．５ ｈ，料液比为１∶１２，提取２次的最佳提取工艺条件下，新疆沙枣树叶的总黄酮含量可达（１８．８９±０．０8）ｍｇ／ｇ（ｎ＝３）。试验结果表明，沙枣的树叶和树枝中总黄酮含量丰富，具有广泛的开发和应用价值。研究为今后新疆沙枣资源的开发应用提供了新的思路和方法。

参考文献：

［１］ 中国科学院中国植物志编辑委员会．中国植物志（第５２卷）：第２分册［Ｍ］．北京：科学出版社，１９８３．

［２］ 刘勇民． 维吾尔药志（上册）［Z］．乌鲁木齐：新疆科技卫生出版社，１９９９．

［３］ 南京中医药大学．中药大辞典（上册）［Z］．上海：上海科学技术出版社，１９９７．

［４］ 刘媖心，杨喜林，姚育英．中国沙漠植物志（第２卷）［Ｍ］． 北京：科学出版社，１９８７．

［５］ 李红，郅洁，马彦梅，等．沙枣黄酮的提取及其抗氧化作用的研究［Ｊ］．时珍国医国药，２０１０，２１（１）：３５-36．

［６］ 王凯． 宁夏沙枣中总黄酮的提取工艺研究［Ｊ］． 安徽农业科学，２０１１，３９（１４）：８３４３－８３４４．

［７］ 赵超，陈华国，靳凤云．槐枝中总黄酮的含量测定［Ｊ］．光谱实验室，２０１０，２７（１）：１８８－１９１．

［８］ 王基云，陆钊罡．正交实验法优选沙枣花总黄酮提取工艺及沙枣花醇提物体外抗氧化活性的研究［Ｊ］．时珍国医国药，２０１０，２１（１０）：2487-2489．

［９］ 张春云，谢伟刚，张雅丽，等．黄芩总黄酮的含量测定及提取工艺优化［Ｊ］．光谱实验室，２０１１，２８（３）：１２５３－１２５７．

［１０］ 李敏，杨建华，李渊，等．酒花黄酮提取工艺和含量测定［Ｊ］．食品科学，２０１１，３２（６）：１６－１９．