紫外－可见分光光度法测定枫叶中的单宁

蒋红芝 蒋蓉芝 义崇宽

摘要：采用紫外－可见分光光度法在２７５ ｎｍ处对枫叶中单宁的含量进行测定。结果表明，紫外分光光度法测单宁的线性关系良好，回归方程为Ａ＝３７．２４９c－０．００１ ８，Ｒ２＝０．９９９ ６，平均回收率为９９．９４％，ＲＳＤ＝０．７０％，该法测定枫叶中单宁的含量简便、快速、准确。

关键词：枫叶；单宁；紫外－可见分光光度法

中图分类号：Ｏ６５７．３２文献标识码：Ａ文章编号：0439－８114（２０12）16－3590-02

Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｔａｎｎｉｎ ｉｎ Ｍａｐｌｅ Ｌｅａｆ ｂｙ ＵＶ-Vis Ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ

ＪＩＡＮＧ Ｈｏｎｇ－ｚｈｉ１，ＪＩＡＮＧ Ｒｏｎｇ－ｚｈｉ２，ＹＩ Ｃhｏｎｇ－ｋｕａｎ１

（１． Ｇｕａｎｇｘｉ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｖｏｃａｔｉｏｎ－Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ， Ｎａｎｎｉｎｇ ５３０００７， Ｃｈｉｎａ；

２． Ｗｕｚｈｏｕ Ｍａｔｅｒｎａｌ ＆ Ｃｈｉｌｄ Ｈｅａｌｔｈ Ｈｏｓｐｉｔａｌ， Ｗｕｚｈｏｕ ５４３００２， Ｇｕａｎｇｘｉ， Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ｔａｎｎｉｎ ｉｎ ｍａｐｌｅ ｌｅａｆ ｗａｓ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ａｔ ２７５ ｎｍ ｂｙ ＵＶ－Ｖｉｓ ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔs ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ａ ｇｏｏｄ ｌｉｎｅａｒｉｔｙ ｗａｓ ｏｂｔａｉｎｅｄ， ｔｈｅ ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ ｅｑｕａｔｉｏｎ ｗａｓ Ａ＝３７．２４９c－０．００１ ８， Ｒ２＝０．９９９ ６， ａｖｅｒａｇｅ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｗａｓ ９９．９４％ ｗｉｔｈ ＲＳＤ ｏｆ ０．７０％． Ｉｎ ａ ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ， ｔｈｉｓ ｍｅｔｈｏｄ ｉｓ ｓｉｍｐｌｅ， ｒａｐｉｄ ａｎｄ ａｃｃｕｒａｔｅ ｆｏｒ ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ ｔａｎｎｉｎ ｉｎ ｍａｐｌｅ ｌｅａｆ．

Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： ｍａｐｌｅ ｌｅａｆ； ｔａｎｎｉｎ； ＵＶ－Ｖｉｓ ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ

单宁又称单宁酸、鞣酸，通常指相对分子量在５００～３ ０００ Da，能沉淀蛋白质、生物碱的水溶性多酚化合物。这类化合物广泛存在于植物的叶、果、根及皮等部位，常用于医药、食品、制革、日用化学品、水处理等领域［１］。特定分子结构的单宁具有生理活性，能与生物体内的蛋白质、多糖、核酸等发生作用。食物中过量的单宁会产生抗营养作用，如降低蛋白质的营养价值、影响机体对维生素Ａ和维生素Ｂ１２的摄取［２］，单宁还具有收敛和抗菌作用［３］。单宁作为功能性组分，可用于生产食品添加剂、风味剂等；在化妆品中主要起收敛、防晒、美白、抗皱、保湿和防腐等作用［２］。

枫树，别名枫香树、大叶枫、鸡爪枫，落叶乔木，叶为掌状３裂或５浅裂，春天叶片呈绿色，秋季为红色，常以根、叶、果及树脂入药，夏季采叶，全年采根。根性味苦、温，可祛风止痛，用于风湿性关节痛、牙痛。叶性味苦、平，可祛风除湿、行气止痛，用于肠炎、痢疾和胃痛等症，外用治毒蜂螫伤，皮肤湿疹［４］。

目前，单宁测定方法包括皮粉法、干酪素法、胶体滴定法、络合滴定法、氧化滴定法、分光光度法及高效液相色谱法等。皮粉法步骤繁琐，误差较大。高锰酸钾滴定法终点误差大，络合滴定法在碱性条件下操作，鞣酸不稳定，而干酪素法操作复杂［２，３］。紫外－可见分光光度法操作简便、快速，准确度高。本文采用紫外－可见分光光度法测定枫叶中单宁的含量，为快速分析单宁提供参考。

１材料与方法

１．１材料

单宁对照品，购于ｓｉｇｍａ公司，分析纯；去离子水。

１．２仪器

Ｔ６新世纪紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）；ＡＬ２０４电子天平（梅特勒－托利多仪器（上海）有限公司）；ＨＨ－Ｓ数显恒温水浴锅（江苏省金坛市医疗仪器厂）。

１．３方法

１．３．１贮备液配制准确称取单宁０．０１０ ０ ｇ，用去离子水定容至１００ ｍＬ，配制成０．１０ ｍｇ／ｍＬ单宁贮备液。

１．３．２波长选择吸取上述贮备液５．０ ｍＬ，以去离子水定容于２５ ｍＬ，配制０．０５ ｍｇ／ｍＬ的单宁溶液，于２００～４００ ｎｍ测定其紫外－可见光谱图。

１．３．３绘制标准曲线精确吸取不同体积的贮备液（０～５．０ ｍＬ）于２５ ｍＬ比色管中，加去离子水至刻度，摇匀，在２７５ ｎｍ测定吸光度，绘制标准曲线。

１．３．４温度对单宁提取效果的影响分别称取１０．００ ｇ经粉碎的叶、茎、皮，放入不同的烧杯中，各加去离子水１００ ｍＬ，水浴加热，在不同温度下提取３０ ｍｉｎ，冷却，过滤，定容至１００ ｍＬ，稀释后在最大吸收波长处测定样品吸光度，公式：单宁含量//ｍｇ/１００ ｇ ＝ ｃ×稀释倍数×１ ０００，计算单宁含量。其中，ｃ为回归方程中吸光度对应的单宁浓度，单位ｍｇ／ｍＬ。

１．３．５时间对单宁提取效果的影响称取１０．００ ｇ叶末样品，加去离子水１００ ｍＬ，１００ ℃水浴加热，提取不同时间，冷却，过滤，定容至１００ ｍＬ，在最大吸收波长处测定提取液的吸光度，计算单宁含量。

１．３．６料液比对单宁提取效果的影响称取１０．００ ｇ叶末样品，按不同的料液比加去离子水，１００ ℃水浴加热，提取３０ ｍｉｎ，冷却，过滤，定容至１００ ｍＬ，在最大吸收波长处测定提取液的吸光度，计算单宁含量。

２结果与分析

１）单宁的紫外－可见光谱图。由图１可知，单宁的测定波长为２７５ ｎｍ。根据标准曲线，得其回归方程为Ａ＝３７．２４９ｃ－０．００１ ８，Ｒ２＝０．９９９ ６，在０～０．０２ ｍｇ／ｍＬ浓度范围内线性关系良好。

２）温度对单宁提取效果的影响。由图２可知，枫叶不同部位单宁含量大小为：皮＞叶＞茎，１００ ℃提取的单宁含量最高。由于前处理简单，样品粉碎后均一，故后续试验选用叶做原料，１００ ℃水浴提取。

３）时间对单宁提取效果的影响。由图３可知，提取时间为３０ ｍｉｎ时效果最好。

４）料液比对单宁提取效果的影响。由图４可知，随着料液比增大，单宁提取效果下降，料液比为１∶３．３时提取效果较好。

５）精密度试验。取同一批样品分别制备５份样品溶液，测定吸光度并计算单宁的含量，结果见表１。由表１可知，测定结果的相对标准偏差（ＲＳＤ）为２．３６７％。

６）回收率试验。取已测得单宁含量的枫叶提取液０．５ ｍＬ，再加０．１０ ｍｇ／ｍＬ单宁对照品溶液１．５ ｍＬ，按上述方法测定，计算回收率。结果见表２。由表２可知平均回收率为９９．９４％。

３结论

用水作为提取剂，提取枫叶中单宁，在料液比为１∶３．３，１００ ℃水浴加热３０ ｍｉｎ，采用紫外－可见分光法测定枫叶中的单宁达到３ ０６７ ｍｇ／１００ ｇ，不同枫叶部位的单宁含量依次为：皮＞叶＞茎。该方法的平均回收率为９９．９４％±０．７０％，ＲＳＤ为０．７０％，回收率高且重现性好，操作简单快速，结果可靠。

参考文献：

［１］ 但卫华，程凤侠．制革化学及工艺学［Ｍ］． 北京：中国轻工业出版社，２００６．

［２］ 王全杰，任方萍，高龙．植物单宁的含量测定方法［Ｊ］．西部皮革，２０１０，３２（２３）：２６－３１．

［３］ 李春华，沈国荣，府子琪．鞣酸软膏中鞣酸的含量测定［Ｊ］．儿科药学杂志，２００８，１４（５）：３８－３９．

［４］ 《全国中草药汇编》编写组．全国中草药汇编［Ｍ］．北京：人民卫生出版社，１９７６．