不同外源激素对清远笔架茶愈伤组织诱导的影响

欧少云 陈珊 陈春兰 刘细群

摘要：采用清远笔架茶［Ｃａｍｅｌｌｉａ ｓｉｎｅｎｓｉｓ （Ｌ．）Ｏ． Ｋｕｎｔｚｅ］的嫩叶作为外植体，探索不同外源激素种类及浓度对清远笔架茶愈伤组织诱导的影响。结果表明，在培养基１／２ＭＳ＋６－ＢＡ ２．０ ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ １．０ ｍｇ／Ｌ中诱导效果最好，诱导率为８６．７％，且愈伤组织生长健壮。

关键词：清远笔架茶［Ｃａｍｅｌｌｉａ ｓｉｎｅｎｓｉｓ （Ｌ．）Ｏ． Ｋｕｎｔｚｅ］；外源激素；愈伤组织

中图分类号：Ｑ９４９．７５８．４；Ｑ９４３．１文献标识码：Ａ 文章编号：0439－８114（２０12）16－3626-02

Effects of Type and Concentration of Exogenous Hormone on Callus Induction of Qingyuanbijia Tea

ＯＵ Ｓｈａｏ－ｙｕｎ，ＣＨＥＮ Sｈａｎ，ＣＨＥＮ Ｃｈｕｎ－ｌａｎ，ＬＩＵ Xｉ－ｑｕｎ

（Ｑｉｎｇｙｕａｎ Ｐｏｌｙｔｅｃｈｎｉｃ，Ｑｉｎｇｙｕａｎ ５１１５１０，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ，Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ ｔｅｎｄｅｒ ｌｅａｆ ｏｆ Ｑｉｎｇｙｕａｎｂｉｊｉａ ｔｅａ［Ｃａｍｅｌｌｉａ ｓｉｎｅｎｓｉｓ（Ｌ．）Ｏ． Ｋｕｎｔｚｅ］ ａｓ ｅｘｐｌａｎｔｓ， ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｔｙｐｅ ａｎｄ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｅｘｏｇｅｎｏｕｓ ｈｏｒｍｏｎｅ ｏｎ ｃａｌｌｕｓ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｗａｓ ｓｔｕｄｉｅｄ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ １／２ＭＳ＋６－ＢＡ ２．０ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ １．０ｍｇ／Ｌ ｈａｄ ｔｈｅ ｂｅｓｔ ｃａｌｌｕｓ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ ｗｉｔｈ ａｎ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｏｆ ８６．７％， ａｎｄ ｔｈｅ ｃａｌｌｕｓ ｇｒｏｗｅｄ ｖｉｇｏｒｏｕｓｌｙ．

Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： Ｑｉｎｇｙｕａｎｂｉｊｉａ ｔｅａ ［Ｃａｍｅｌｌｉａ ｓｉｎｅｎｓｉｓ（Ｌ．）Ｏ． Ｋｕｎｔｚｅ］； ｅｘｏｇｅｎｏｕｓ ｈｏｒｍｏｎｅ； ｃａｌｌｕｓ

清远笔架茶［Ｃａｍｅｌｌｉａ ｓｉｎｅｎｓｉｓ （Ｌ．）Ｏ． Ｋｕｎｔｚｅ］属于山茶科（Ｔｈｅａｃｅａｅ）山茶属（Ｃａｍｅｌｌｉａ），是清远笔架山种植的特有地方品种，叶椭圆形，芽叶黄绿色，叶质硬，适合制作为绿茶，茶汤香气清长持久，滋味爽口而滑，带甜甘味，有解暑、化痰、生津之功效。目前清远笔架茶主要通过有性形式进行繁殖，但利用种子繁殖发芽率很低。欧少云等［１］用嫩叶、嫩茎和花瓣进行试验发现，嫩叶的愈伤组织的诱导率最高。本文采用清远笔架茶的嫩叶作为外植体，以ＭＳ和１／２ＭＳ为基本培养基，以６－ＢＡ、ＮＡＡ、２，４－Ｄ为外源激素，研究不同外源激素种类及浓度对清远笔架茶嫩叶愈伤组织诱导的影响，为今后研究清远笔架茶植株的快繁技术打下基础。

１材料与方法

１．１材料

清远笔架茶的嫩叶取自清远市笔架山农场；外源激素有６－ＢＡ、ＮＡＡ、２，４－Ｄ；基本培养基有ＭＳ、１／２ＭＳ。

１．２方法

１．２．１培养基的制备（单位：ｍｇ／Ｌ）①以１／２ＭＳ为基本培养基，添加６－ＢＡ（０、１．０、２．０、４．０）和ＮＡＡ（０、０．５、１．０、２．０）或者添加６－ＢＡ（０、１．０、２．０、４．０）和２，４－Ｄ（０、０．５、１．０、２．０）形成试验组合。②以ＭＳ为基本培养基，添加６－ＢＡ（０、１．０、２．０、４．０）和ＮＡＡ（０、０．５、１．０、２．０）或６－ＢＡ（０、１．０、２．０、４．０）和２，４－Ｄ（０、０．５、１．０、２．０）形成试验组合。

１．２．２培养基的灭菌所有培养基和接种器具均用高压蒸汽灭菌锅于１２１ ℃灭菌２０ ｍｉｎ，冷却待用。

１．２．３外植体的消毒处理取清远笔架茶刚展开的嫩叶，用软毛笔蘸取洗洁精稀释液小心清洗，用流水冲洗１．０～１．５ ｈ后，用洁净纱布吸干；于超净工作台上用体积分数为７０％的乙醇处理２０ ｓ，用无菌水漂洗２次，然后将其置于１ ｇ／Ｌ ＨｇＣｌ２溶液中浸泡１０～２０ ｍｉｎ；用无菌水漂洗５～６次，用无菌滤纸吸干表面水分待用。

１．２．４接种把经过消毒处理的嫩叶切成１ ｃｍ２左右、具叶脉的小叶块，将小叶块上表面朝上，接种于按１．２．１的方法制得的培养基中，每瓶接种５个小叶块，每种培养基共接种１０瓶。试验３次重复，结果取３次的平均值。

１．２．５培养将接种后的外植体均放在２５ ℃下暗培养２周，然后在散射光下以１４ ｈ／ｄ继续光照培养。试验３次重复，结果取３次的平均值。

２结果与分析

培养３０ ｄ后统计的愈伤组织诱导情况见表１至表４。试验发现，用１／２ＭＳ作为基本培养基比用ＭＳ对清远笔架茶嫩叶愈伤组织诱导的效果更好。由表１至表４可知，在不添加外源激素的情况下，清远笔架茶嫩叶无法有效地形成愈伤组织；只添加６－ＢＡ不添加ＮＡＡ、２，４－Ｄ，或只添加ＮＡＡ或２，４－Ｄ不添加６－ＢＡ，也不能有效地诱导愈伤组织的形成；当６－ＢＡ浓度为１．０、４．０ ｍｇ／Ｌ时，不管添加的ＮＡＡ或２，４－Ｄ浓度是低还是高，也不能诱导愈伤组织的形成；只有当６－ＢＡ浓度为２．０ ｍｇ／Ｌ时，添加一定浓度的NAA或２，４－Ｄ才能诱导愈伤组织的形成，且在６－ＢＡ ２．０ ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ １．０ ｍｇ／Ｌ组合下愈伤组织诱导率最高，愈伤组织的状态最好。

３讨论

基本培养基中的大量元素对茶树组织培养影响很大。成浩等［２］认为，ＭＳ培养基中大量元素减半，不仅有利于茎段的诱导和生长，而且有利于减少茎段的褐化率，提高成活率。张娅婷等［３］研究发现，基本培养基１／２ＭＳ比ＭＳ培养效果好，而且ＭＳ中含有的无机离子浓度较高，对芽的分化具有一定的抑制作用。但在实际应用中，大多数学者在诱导和增殖培养时采用全量的大量元素，而在生根培养时采用半量的大量元素［４］。本试验也得到了与上述研究相同的结果，即用１／２ＭＳ作为基本培养基比用ＭＳ在诱导清远笔架茶嫩叶愈伤组织形成上的效果好。

生长调节物质的种类和浓度配比是影响外植体能否成功启动的关键因素之一。董德贤［５］用茶树的新梢作材料诱导再生植物，结果表明，在生长诱导中培养基的生长素浓度发挥着关键作用。李家华等［６］探讨了不同激素配方对大叶种茶树新梢组织培养的效果，结果表明，６－ＢＡ ０．５ ｍｇ／Ｌ＋２，４－Ｄ ４．０ ｍｇ／Ｌ促进腋芽形成单生芽的效果最好，６－ＢＡ １０．０ ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ ０．５ ｍｇ／Ｌ诱导愈伤组织形成和腋芽分化均获得了较好效果，６－ＢＡ ４．０ ｍｇ／Ｌ促进丛芽形成的效果最好。本研究发现，在培养基１／２ＭＳ＋６－ＢＡ ２．０ ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ １．０ ｍｇ／Ｌ中清远笔架茶嫩叶愈伤组织的诱导效果最好，诱导率为８６．７％，且愈伤组织生长健壮。可见，生长调节物质在清远笔架茶的组织培养中发挥着重要的作用。

参考文献：

［１］ 欧少云，陈春兰，郑正．清远笔架茶不同器官诱导愈伤组织的研究［Ｊ］．科技资讯，２０１１（２４）：３．

［２］ 成浩，李素芳． 茶树微繁殖技术的研究与应用［Ｊ］．中国茶叶，１９９６（２）：２９－３１．

［３］ 张娅婷，张伟． 薮北茶的组织培养［Ｊ］．周口师范学院学报，２００４，２１（５）：７４－７６．

［４］ 程柳，汤浩如．茶树组织培养及影响因素［Ｊ］．安徽农业科学，２００７，３５（７）：１９６０－１９６３．

［５］ 董德贤． 茶树组织培养的研究［Ｊ］．茶业通报，１９８９，５７（１）：４９．

［６］ 李家华，周红杰，李明珠．不同激素配方对大叶种茶树新梢组织培养的效果［Ｊ］．云南农业科技，２００１（３）：２７－２８．