HCV/HIV-1合并感染者血清GP73变化特征

李 鑫，黄玉波，张仁雯，郝晓花，李兴旺，魏红山

首都医科大学附属北京地坛医院，北京 100015

HCV/HIV-1合并感染者血清GP73变化特征

李 鑫，黄玉波，张仁雯，郝晓花，李兴旺，魏红山

首都医科大学附属北京地坛医院，北京 100015

目的 观察合并艾滋病的丙型肝炎患者血清GP73水平的变化特征。方法 本研究主要观察了3个人群:50例健康体检者;22例AIDS患者，其中10例患者合并慢性HCV感染;28例没有合并症的单纯慢性丙型肝炎的患者。血清GP73采用标准ELISA法检测。结果 与健康对照人群(36.18±12.26)ng/mL相比，慢性丙型肝炎患者血清GP73(79.73±43.91)ng/mL显著升高(P ＜0.0001);而AIDS患者血清GP73(122.6±65.51)ng/mL较单纯慢性丙型肝炎患者也显著升高(P=0.008)。对22例AIDS患者血清GP73分析显示，合并丙型肝炎的患者(98.32±60.14)ng/mL，低于单纯HIV-1感染的患者(142.8±65.23)ng/mL，但两组之间差异并无统计学意义(t=1.65，P=0.11)。AIDS患者的血清GP73水平与CD4+T和CD8+T细胞的绝对计数呈显著负相关(r值分别为－0.58和－0.49)，而与HIV RNA拷贝数成正相关(r=0.61，P=0.0026)。结论 合并HIV-1感染可以显著增加丙肝患者血清GP73水平。检测血清GP73水平的变化在一定程度上可以反映HIV-1复制情况及免疫状态的变化。

丙型肝炎病毒;人类免疫缺陷病毒-1;合并感染;获得性免疫缺陷综合征;高尔基体蛋白73

高尔基体蛋白73(Golgi Protein 73，GP73)是一个新的肝癌诊断标志物。该蛋白最初于2000年由Kladney等［1］首先体外克隆和表达。早期的研究结果提示，该基因高表达于病毒感染的肝实质细胞、胆管上皮细胞。随后的研究显示，该蛋白是一个良好的肝癌诊断标志物［2］。国内的研究甚至揭示，该蛋白诊断原发性肝癌的特异性和敏感性优于甲胎球蛋白［3-4］。近期研究还揭示，该蛋白的表达与慢性乙型肝炎患者的肝病进程有关［5］。不仅是国际上对GP73的应用研究越来越深入，我国肝癌诊断专家推荐指南中也将GP73列为肝癌诊断的一个新的标志物。但目前有关该标志物在肝病合并其他疾病，尤其是合并慢性病毒感染的变化特征的研究资料尚缺乏。本研究旨在观察慢性丙型肝炎患者合并HIV-1感染时，该蛋白的变化特征及可能的临床意义。

1 材料与方法

1.1 临床资料 本研究所观察的患者为北京地坛医院2011年2月－2012年2月22例住院AIDS患者，其中10例患者合并慢性丙型肝炎(所有患者HCV抗体、HCV-RNA均阳性半年以上)。所有HIV-1感染者均已经进入艾滋病期。其中10例患者接受HAART治疗半年以上(AZT+3TC+EFV)。50例健康对照者为本院健康体检者。28例没有合并症的单纯慢性丙型肝炎患者。所有慢性丙型肝炎患者均为未经干扰素治疗的患者。丙型肝炎患者剔除标准为:存在组织学证据的肝硬化;合并恶性肿瘤;合并自身免疫性肝病;胆结石等阻塞性胆管疾病;合并酒精性肝病;其它病毒性肝炎。

1.2 血清标本采集及分析 所有患者均于入院开始临床治疗前采集血清或血浆标本，－80℃冻存备用。患者入院后常规进行肝功能等生化检查(autoanalyzer Hitachi 917，德国);HIV-RNA采用 AmplicorTMHIV-1 Monitor Test(Roche Diagnostic Systems，美国)进行;CD4+T、CD8+T细胞亚群分析采用BD公司的FASCalibur进行。

1.3 血清GP73检测 血清GP73采用标准ELISA分析法进行分析，试剂盒为北京热景公司产品，按照供应商提供的标准操作说明书进行分析。

1.4 统计学分析 计量资料以均数±标准差表示。组间均数差异采用t检验。指标之间的相关性采用Spearman相关分析。多组间均数差异采用方差分析。P＜0.05为差异有统计学意义。统计软件采用GraphPad Prsim 5.0。

2结果

2.1 不同人群血清GP73的差异 本研究所观察的患者及健康体检人群均为我院连续入组的人群。其中AIDS患者22例;单纯慢性丙型肝炎患者28例;健康体检人群包括50人。被观察对象的人口学资料如表1所示。

表1 被观察对象的人口学资料Tab 1 The demography data of subjects

对上述人群的血清GP73分析结果显示，无论是单纯慢性丙型肝炎患者，还是合并AIDS的患者，其血清GP73的浓度均显著高于健康对照人群(见图1)。与健康对照人群(36.18±12.26)ng/mL相比，慢性丙型肝炎(CHC)患者血清 GP73(79.73±43.91)ng/mL显著升高(P＜0.0001);而AIDS患者血清 GP73(122.6±65.51)ng/mL较单纯慢性丙型肝炎患者也显著升高(P=0.008)。对22例AIDS患者血清GP73分析显示，合并丙型肝炎的患者血清GP73(98.32±60.14)ng/mL低于单纯 HIV-1感染的患者(142.8±65.23)ng/mL，但两组之间比较差异无统计学意义(t=1.65，P=0.11)。

图1 不同人群血清GP73的差异 A:Control，健康体检者;CHC，慢性丙型肝炎患者;AIDS，艾滋病患者;B:HCV(－)，不合并丙肝的单纯AIDS患者;HCV(+)，合并丙肝的AIDS患者Fig 1 The serum GP73 concentration of patients in different groups A:Control，healthy persons;CHC，patients with chronic hepatitis C;AIDS，AIDS patients;B:HCV(－)，AIDS patients not co-infection with hepatitis C virus;HCV(+)，AIDS patients co-infection with hepatitis C virus

2.2 AIDS患者血清GP73可能的影响因素 为了明确AIDS患者血清GP73升高的可能影响因素，我们对既往报告的一些影响因素进行了分析(见图2)。

根据对AIDS患者血清相关因素的分析，AIDS患者血清GP73浓度与病毒核酸之间的相关性最高(r=0.61，P=0.0026);其次是患者的 CD4+T 细胞的绝对计数(r= －0.58，P=0.005);与患者外周血CD8+T细胞计数也有很好的相关性(r=－0.49，P=0.02)。ALT 和 GP73之间无显著相关性(r=0.003，P=0.98)。以上结果提示，对AIDS患者而言，病毒复制和患者免疫状态可能是决定血清GP73的重要因素。

图2 AIDS患者病毒载量、免疫细胞及生化指标与血清GP73之间的相关性Fig 2 The correlation between the serum GP73 of AIDS patients，viral load，immune cells，and biochemical indicators

2.3 HAART治疗对患者血清GP73的影响 为了进一步明确HIV-1病毒复制对患者血清GP73水平可能的影响，我们观察了HAART治疗对患者血清GP73水平的影响。如图3所示，与未接受治疗的患者(159.2±66.24)ng/mL相比，经过抗病毒治疗后，10例患者的HIV-RNA均低于可检测下限，患者的血清GP73(78.63 ±26.82)ng/mL 显著降低(t=3.60，P=0.0018)。在未接受HAART治疗的12例患者中，5例患者的血清GP73高于150 ng/mL，占全部未治疗患者的41.67%(5/12);而且，未接受抗病毒治疗的患者中，仅2例(16.67%)患者的血清GP73低于100 ng/mL。而接受HAART治疗的10例患者中，仅2例患者的血清GP73高于100 ng/mL。显然，病毒复制是血清GP73升高的主要影响因素之一。

图3HAART对AIDS患者血清GP73表达的影响 HAART:HAART组;no-HAART:未接受HAART组Fig 3 The effect of HAART on serum GP73 concentration of AIDS patientsHAART:the HAART group;no-HAART:not receiving HAART group

3 讨论

通过本研究对部分丙型肝炎患者，以及AIDS合并丙型肝炎患者的血清GP73分析观察，我们发现，合并感染HIV-1后患者血清GP73显著升高。该研究结果提示，对于那些丙型肝炎患者血清GP73过高，不仅需要考虑肝癌及终末期肝病，还需要考虑是否有合并感染HIV的可能。

最初的研究报道显示，GP73高表达于胆管上皮细胞、炎症及肝癌细胞［1］。随后的一系列研究揭示，该蛋白还高表达于其他肿瘤组织，被认为是前列腺癌［6］、睾丸癌、肺癌［7-8］，以及中枢神经疾病，诸如脑胶质瘤［9］等疾病，而被认为一个有前景的临床标志物。与AFP等其他标志物相比，GP73诊断HCC敏感性较高，特异性较低［10］。而近期的研究揭示，GP73的表达水平可能与乙型肝炎的进程有关［5］。我们对部分肝硬化患者的观察也提示，GP73的水平与肝硬化患者的Child-Pugh分级密切相关［11］。联合检测GP73和AFP也已经成为我国肝癌诊断的一个重要手段［12］。

作为一个新的肝癌诊断标志物，GP73的来源和影响因素一直是临床和基础研究人员所关注的焦点问题之一。GP73是一种II型跨膜蛋白，功能未知，主要功能域位于胞内C区［13］。C-末端截短型小鼠基因模型显示，GP73功能丧失的小鼠主要表现为肝肾组织结构的异常，提示该基因主要调控靶器官为肝脏和肾脏［14］。但有关该蛋白的主要来源研究显示，增生的肝细胞、胆管上皮细胞，以及前列腺上皮、肺组织可能是血清GP73的主要来源［1，14］。尽管外周血单个核细胞中可以检测到GP73 mRNA，但蛋白印迹显示，脾脏可能GP73表达唯一证实了的器官。我们的研究显示，HIV-1感染可能通过免疫系统的功能而不是通过肝功能的变化而影响了GP73的表达。因为，对这一部分AIDS患者的分析显示，血清ALT的水平差异与GP73水平变化无关。但更为客观的结论还需要更大样本分析。

与既往早期的报道一致，我们的结果也提示，HIV-1复制可能上调GP73的表达。目前至少已知腺病毒［15］、HBV 和HCV 感染可以上调GP73 的表达［16］。AIDS患者血清GP73表达与抗病毒疗效、患者CD4+T细胞和CD8+T细胞的变化均有显著的相关性，提示对血清GP73的检测在一定程度上可以反映患者病情的变化。

总之，丙型肝炎患者合并HIV-1感染可以导致血清GP73的显著增加，而且多数合并AIDS的丙型肝炎患者血清GP73在150 ng/mL以上，提示:对那些GP73过高的肝病患者，除考虑肝癌的诊断外，还需要考虑合并有HIV-1感染的可能。对AIDS患者血清GP73评价的临床意义也是一个非常有趣的课题，相关的工作我们也在进行中。

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Variation characteristics of serum GP73 in Patients with HCV/HIV-1 co-infection

LI Xin，HUANG Yubo，ZHANG Renwen，HAO Xiaohua，LI Xingwang，WEI Hongshan
Beijing Ditan Hospital，Capital Medical University，Beijing 100015，China

ObjectiveTo investigate the Variation characteristics of serum GP73 in HCV/HIV-1 co-infected patients.MethodsThree study groups included in this study:50 healthy individuals as control;22 HIV patients including 10 patients with HCV/HIV-1 co-infection;28 chronic HCV-infected patients.Serum GP73 was measured with ELISA according to the protocol.ResultsThe serum GP73 concentration in chronic HCV-infected patients(79.73 ±43.91)ng/mL was significantly higher than that in healthy individuals(36.18 ± 12.26)ng/mL(P ＜0.0001);but the level of GP73 in chronic HCV-infected patients was significantly lower than that in HIV-1-infected patients(122.6± 65.51)ng/mL(P=0.008).The serum GP73 concentration in HCV/HIV-1 co-infected patients was(98.32 ±60.14)ng/mL，which was lower than that in HIV-1 infected patients(142.8 ± 65.23)ng/mL，but the difference was not significant(t=1.65，P=0.11).More importantly，serum GP73 protein in HIV-1 infected patients was negatively related with CD4+cell counts(r= －0.58)and CD8+cell counts(r= －0.49)，and positively related with HIV viral loads(r=0.61，P=0.0026).ConclusionSerum GP73 in HCV/HIV-1 co-infected patients was significantly increased，and changes of serum GP73 to a certain extent reflect the HIV-1 replication and immune status.

HCV;HIV-1;Co-infection;AIDS;GP73

R512.6+3

A

1006－5709(2012)08－0778－04

2012-06-27

10.3969/j.issn.1006-5709.2012.08.027

国家自然科学基金(30872243;81071411);北京市科委“艾滋病急性期治疗研究”(D09050703590903);北京市优秀人才培养专项经费资助项目(2009D003015000001)

李鑫 ，医学博士，副主任医师。E-mail:Leaxin@sina.com通讯作者:魏红山，E-mail:drwei@ccmu.edu.cn