六味地黄方剂复方前后丹皮酚溶出量比较

李吉锋

(渭南师范学院a.化学与生命科学学院;b.药物分析工程中心，陕西 渭南714000)

对于中药复方前后单味中药药性的变化，中国自古以来医者都比较留意，但对其原因，只有近几十年来随着分析测试技术的发展，科研工作者才逐渐从化学角度开始探讨.近年来很多分析工作者对于某些使用比较多的复方进行了分析［1－3］，发现复方前后其有效成分溶出率发生变化.比如一些原本毒性较大的药物在复方后虽然其使用量比较大，但却不会对人体造成大的伤害，就是由于复方后其溶出率降低，而有些有效成分因为协同作用溶出率反而会增大，使其功效增加，还可能在复方过程中有新的有效成分生成.传统中药一般是由医生开出处方，由患者购买生药后用砂锅将复方后的药材煎煮，服用汤药.传统中药使用方法历经数千年，各种有效、有害成分的协同或者拮抗效应已经过检验，能够充分扬长避短，发挥其药效，减少毒性.而目前，一些医院为了方便患者使用，采用提前将各单味中药煎好得到粉末，根据医生处方再将提前得到的各味中药的粉末交由患者，由患者按照处方混合后冲服.在此过程中，由于各单味中药是提前单煎得到，发生复方过程的协同或者拮抗作用或者化学反应的可能性降低，因此，有可能对于某一方剂的药效产生影响［4］.六味地黄丸是常用的一个复方，现代中药学研究发现其有效成分包括丹皮酚、马钱苷等一系列成分.对于其复方前后有效成分溶出率变化情况目前还未见报道，笔者对于六味地黄丸复方前后有效成分丹皮酚含量的变化进行研究.

1 实验部分

1.1 仪器与工作条件

Shimadzu LC-10ATVP泵、SCL-10AVP控制器、DGU-14A脱气机、CTO-10AVP柱温箱、SPD-10AVP紫外检测器、Class-VP 6.12工作站、SZ-93自动双重纯水蒸馏器(上海亚荣)、Shimadzu C-18柱(4.6mm*250mm，5μm).色谱条件为：甲醇 －水(70∶30)，流速0.8mL/min，柱温30℃，检测波长274nm.柱效按照丹皮酚计算，理论塔板数不低于2500，分离度不低于2.5.

1.2 试剂与药材

甲醇(色谱纯，天津科密欧)、无水乙醇(AR)、二次蒸馏水、丹皮酚对照品(昆明科翔生物科技)，熟地、茯苓、山药、山茱萸、牡丹皮、泽泻(均购自渭南市老百姓大药房).

2 方法

2.1 对照液的制备

准确称取丹皮酚对照品约50mg，加甲醇溶解后定容于100mL容量瓶，作为储备液，使用时分别稀释成不同浓度的工作液.

2.2 样品溶液的制备

2.2.1 合煎液的制备

准确称取六味地黄组方的各味中药各0.5g于100mL烧杯中，加入40mL二次蒸馏水，盖上表面皿，浸泡10min后，于电炉子上大火烧开，小火煎煮20min，冷却后倾出上清液.再加入30mL二次蒸馏水，大火烧开后小火煎煮15min，倾出上清液，与第一次的合并.将溶液用0.45μm滤膜过滤，加入甲醇5mL，用二次蒸馏水定容于100mL容量瓶中.

2.2.2 分煎液的制备

准确称取牡丹皮0.5g于100mL烧杯中，再准确称取其他5味中药各0.5 g于另一100mL烧杯中，分别按照前面方法煎煮.将牡丹皮两次煎煮得到的清液和其他5味中药两次的合煎液合并后过滤，加入甲醇5mL，用二次蒸馏水定容于100mL容量瓶中.

2.2.3 加标样的制备

准确称取六味地黄组方的各味中药各0.5g于100mL烧杯中，加入一定量的丹皮酚标准溶液，按照2.2.1方法制备、过滤，加入甲醇5mL，用二次蒸馏水定容于100mL容量瓶中.

2.3 色谱测定方法考察

2.3.1 精密度试验

将合煎液连续进样5次，测定色谱峰面积和保留时间.合煎液吸收谱图见图1.丹皮酚峰保留时间RSD为1.4%，峰面积的RSD为2.9%，方法精密度较好.

图1 合煎液

2.3.2 线性范围

取丹皮酚对照液稀释配制浓度分别为20mg/L、40mg/L、60mg/L、80mg/L、100mg/L的丹皮酚标准溶液，分别进样测定峰面积，标准品溶液吸收谱图见图2.以测得的丹皮酚峰面积为纵坐标，以丹皮酚浓度为横坐标做图，得到标准曲线回归方程和相关性系数y=16867 x－5852，R2=0.9998，表明丹皮酚在上述浓度范围内线性关系良好.

2.3.3 方法的准确性

图2 丹皮酚标准品(60mg/L)

据2.2.3加标实验测定结果计算，加标回收率93%(三次平均)，方法准确性较好.

3 测定结果

将2.2.1和2.2.2试验所得溶液分别用HPLC在1.1仪器工作条件下测定，结果(三次平均)见表1.

表1 复方前后丹皮酚溶出量 (以每克牡丹皮含量计算)

4 结论

中药复方后可能存在协同效应或者拮抗效应，使得煎煮过程中各种有效成分的溶出率发生变化，也可能发生化学反应，使得某一组分的溶出量发生变化，从而对其功效产生影响.中成药加工过程充分考虑以上因素，采取方剂合煎后，将得到的粉末制成丸剂或者片剂服用.而目前一些医院采用的将单味中药分别煎煮后得到的粉末混合冲服方法没有考虑以上问题.针对以上可能存在的问题，我们选择传统的六味地黄方剂，针对其中丹皮酚的溶出量进行分析.结果发现，对于六味地黄组方而言，无论是采用复方煎煮或者单煎后将各种组分混合得到的溶液，丹皮酚含量略有差异，说明复方对于六味地黄方剂中的丹皮酚溶出效果影响较小.

李吉锋［5］在前面研究了六味地黄方剂复方前后提取液中金属元素含量的变化情况.结果表明，Cu组方后合煎液的溶出量大于将单味中药提取得到颗粒再组方，而Zn则是组方后合煎的溶出量小于将单味中药提取得到颗粒再组方.由此说明组方后合煎使得有些元素表现为协同作用，有的表现为拮抗作用，而且对微量元素溶出率等都存在一定的影响.

杨亚［4］对多个方剂复方前后比较发现，发现方剂配伍对复方的化学成分确实存在一定的影响，导致复方汤剂中化学组分的含量或种类的变化，这种变化可能是中药复方配伍的协同作用的物质基础之一.目前，进行方剂配伍的化学机制的研究还不够系统，方法还不够完善，采用色谱质谱联用技术，对方剂配伍和单味药材进行全成分比较，可能是研究方剂配伍的化学机制的有效方法之一.

［1］辛杨，皮子凤，宋凤瑞，等.超高效液相色谱—质谱法比较黑顺片单煎液及其复方煎煮液中次乌头碱在大鼠体内的吸收［J］.色谱，2011，29(5)：389 －393.

［2］杨翀，梁光义，曹佩雪，等.三拗汤不同配伍中麻黄碱、甘草酸和苦杏仁苷的变化［J］.中草药，2008，(3)：372－375.

［3］何丽仙，黄忠京，谭倪，等.中药复脉汤复方与单方提取物化学成分的分析研究［J］.中山大学学报，2006，45(3)：120－122.

［4］杨亚，肖盛元.方剂配伍影响复方化学成分的研究进展［J］.世界科学技术(中医药现代化)，2010，(5)：699－707.

［5］李吉锋.六味地黄丸组方前后金属元素溶出量变化分析［J］.光谱实验室，2012，29(3)：1566－1568.