亚贡叶中总酚酸提取工艺研究

赵松松，窦德强

（辽宁中医药大学，辽宁 大连 116620）

中药工业

亚贡叶中总酚酸提取工艺研究

赵松松，窦德强*

（辽宁中医药大学，辽宁 大连 116620）

目的：确定亚贡叶中总酚酸提取工艺。方法：确定以溶媒量、提取时间、提取次数为考察因素，水回流法提取总酚酸，采用正交设计试验确定最佳提取工艺。结果：最佳提取工艺为水回流法提取3次，每次10倍量水提取20 min。结论：该工艺条件稳定，简便易行，重现性好，适于亚贡叶中总酚酸提取。

亚贡；绿原酸；酚酸；正交设计

亚贡Smallanthus sonchifolius（Piepp.et Endl.）H.Robinson为菊科Smallanthus属多年生草本植物，原产于南美洲安第斯山脉，俗称 “雪莲果”、“雅龙果”，英文名为 “YACON”，是当地人的传统根茎食品［1-2］。其块根素有 “糖尿病人水果”之称。目前日本是引种亚贡最多的国家，20世纪90年代引种到中国，目前在我国辽宁、云南、海南、四川、台湾等地均有种植。亚贡的传统用药部位为其块根及其茎叶，茎叶在当地作为降糖茶来饮用，其中以绿原酸、咖啡酸及其衍生物为主的酚酸类成分被认为是亚贡中的主要活性成分之一［3］。本实验采用分光光度法对亚贡叶中总酚酸的提取工艺进行研究，以期对其资源进行合理的开发利用。

1 试药与仪器

1.1 试药

绿原酸对照品（中国食品药品检定研究院，批号：110753-200413）；甲醇、95%乙醇、三氯化铁、盐酸、铁氰化钾、十二烷基硫酸钠均为分析纯；亚贡叶采自辽宁省海城市，经辽宁中医药大学药学院王冰教授鉴定为菊科亚贡Smallanthus sonchifolius的叶。

1.2 仪器

FA-1004分析天平（上海精科天平厂）；Unico-2100紫外分光光度计（上海尤尼柯仪器有限公司）；U3010紫外分光光度计（日本东芝公司）；DZF-6050真空恒温干燥箱（上海一恒科学仪器有限公司）；HH-S水浴锅（巩义市予华仪器有限公司）；DZHW电热套（北京市永光明医疗仪器厂）；KQ-250DE型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。

2 方法与结果

2.1 绿原酸对照品溶液的配制

精密称取绿原酸对照品以50%甲醇定容，配成0.139 2 mg·mL－1对照品溶液，待用。

2.2 供试品溶液的制备

精密称取亚贡叶粉末0.1 g，置100 mL圆底烧瓶中，加入50 mL水加热回流提取0.5 h，滤过，滤液蒸干，真空干燥至恒重，以50%甲醇定容至50 mL容量瓶中，待用。

2.3 测定波长的确定

精密吸取绿原酸对照品溶液、供试品溶液和50%甲醇溶液各1.0mL，分别置于25mL容量瓶中，加甲醇5 mL，加0.3%十二烷基硫酸钠2 mL及0.6%FeC13－0.9%K3［Fe（CN）6］（1∶1）混合溶液1 mL，混匀，避光放置5 min，以0.1 mol·L－1的盐酸溶液定容至刻度，混匀，避光放置20 min。以上述50%甲醇溶液瓶为空白，采用U3010紫外－可见分光光度计对其进行扫描，可见对照品与样品吸收光谱基本一致，其最大吸收波长为λmax＝760 nm。因此，采用该波长下样品溶液吸光度计算总酚酸含量。

2.4 提取溶媒的确定

精密称取亚贡叶5.0 g，共5份，分别以50 mL的水，30%、50%、70%、95%乙醇回流提取0.5 h，将提取液过滤，滤液浓缩，真空干燥至恒重。计算不同浓度乙醇提取的出膏率和总酚酸含量，其计算公式如下。

出膏率（%） ＝干膏重/提取药材重量×100%

式中：A为样品溶液的吸光度，m为干膏重量（g），M为药材重量（g），V为定容的体积（mL）。

实验结果表明，以水作提取液溶媒所得的总酚酸的含量最高，故以水为提取溶媒对亚贡叶中总酚酸进行提取。

2.5 线性关系考察

精密吸取绿原酸对照品溶液0.25，0.5，0.75，1.0，1.25，1.5，1.75 mL，分别置于25 mL容量瓶中，按上述方法测定吸光度A。得线性方程：Y＝56.677X＋0.155 7，r＝0.999 6，线性范围1.39～8.35μg·mL－1。其中Y为吸光度，X为对照品溶液浓度（mg·mL－1）。

2.6 精密度试验

精密吸取一定量的供试品溶液共6份，按2.3项下测定吸光度，结果RSD＝1.3%，表明精密度良好。

2.7 重复性试验

精密称取样品0.1 g共6份，按供试品溶液的制备方法制得供试品溶液，按上述方法测定吸光度，结果RSD＝0.9%，表明重复性良好。

2.8 稳定性试验

精密吸取一定量的供试品溶液，按上述方法显色，分别在0，2，4，6，8 h测定一次吸光度，结果RSD＝1.4%，表明供试品溶液显色后8 h内基本稳定。

2.9 回收率试验

精密称取样品粉末0.05 g共5份，精密加入绿原酸对照品溶液1.5 mL，按供试品溶液的制备方法制得样品液，按上述方法测定吸光度，结果见表1。

表1 总酚酸回收率试验

2.10 亚贡叶中总酚酸提取的正交试验

综合考虑亚贡总酚酸的理化性质及生产实际，确定以溶媒量、提取时间、提取次数为考察因素，采用水回流法提取总酚酸，正交试验设计优选工艺，因素水平表见表2，采用L9（34）正交表安排试验，制定试验方案。分别称取亚贡叶粉末5 g，共9份，浸泡1 h，按正交试验各试验号进行试验，将提取液滤过，滤液浓缩，真空干燥至恒重。以出膏率及总酚酸含量为考察指标，正交试验设计及结果见表3，方差分析见表4。

表2 正交试验设计因素水平表

表3 L9（34）正交试验设计表

表4 正交试验方差分析表

以出膏率和总酚酸含量的综合评分为指标的正交试验直观分析、方差分析结果表明，各因素对水提取影响大小顺序为C＞B＞A，C项（提取次数）影响最大，各项差异均没有统计学意义。因素水平优化组合为A2B3C3，即加10倍量水，提取3次，每次20 min。

2.11 验证实验

按正交试验结果确定的因素水平优化组合做3次平行实验，结果见表5。

表5 验证实验/%

验证实验结果表明，出膏率和总酚酸含量均高于正交试验中的最高值，且工艺条件稳定，重现性好。

3 讨论

酚酸类物质具有抗氧化、抗肿瘤、降血糖、降血脂、抗菌和抗病毒等作用，其应用研究是目前医药界追逐的热点。本实验采用以亚贡出膏率和总酚酸含量的综合评价为指标的正交试验，确定最佳提取工艺为：水回流法提取3次，每次10倍量水提取20 min。该工艺条件稳定，简便易行，重现性好，出膏率可达33.8%，总酚酸含量可达6.1%，适于亚贡叶中总酚酸提取。

［1］ ValentováK，UlrichováJ.Smallanthus sonchifoliusand Lep-idium meyenii-prospective Andean crops for the prevention of chronic diseases［J］.Biomed Papers，2003，147（2）：119-130.

［2］ 丘鹰昆，窦德强，康廷国.亚贡及同属植物化学成分研究进展［J］.中国现代中药，2011，13（7）：45-51.

［3］ ValentováK，Cvak L，Muck A，et al.Antioxidant activity of extracts from the leaves ofSmallanthus sonchifolius［J］.Eur JNutr，2003，42（1）：61-66.

The Extraction Procedure of Total Phenolics from Yacon Leaves

ZHAO Song-song，DOU De-qiang
（Liaoning University of Traditional Chinese Medicine，Dalian116600，China）

Objective：To confirm the extract method of total phenolic acids in yacon leaves.Methods：Orthogonal design was used for exploring themain factors of extractmethod.Results：The optimal extraction procedure of total phenolicswas established as thematerialswas refluxed with ten times amount ofwater for 3 times，20 minutes for each.Conclusion：The established method showed good stability and reproducibility and could be used as a method for extracting total phenolic acids in yacon leaves.

Smallanthus sonchifolius；Chlorogenic acid；Total phenolic acids；Orthogonal design

2011-11-02）

*［通讯作者］窦德强，E-mail：doudeqiang2003＠yahoo.com.cn