我国苎麻根际寄生线虫调查和初步研究

刘慧玲，余永廷，曾粮斌，薛召东，朱爱国

(1，中国农业科学院麻类研究所，长沙410205;2，中国农业科学院研究生院，北京100081)

根腐病是苎麻生产上的主要病害之一，在我国各苎麻主产区均有发生。上世纪80年代，陈洪福等对湖南沅江地区苎麻根腐病病蔸中的线虫进行了分离观察，先后发现咖啡短体线虫(Pratylenchus coffeae)和穿刺短体线虫(P.penetran)，二者均能侵染苎麻，引发根腐病［1，2］。后来，程瑚瑞等对我国苎麻主产区进行了根腐病病原分离和观察，发现咖啡短体线虫是主要病原［3］。

近来，本研究小组对沅江地区苎麻根腐病病蔸中分离的一种线虫，从形态特征和rDNA－ITS序列特征，将此线虫鉴定为咖啡短体线虫，证实了前人的研究结果。为了全面了解我国苎麻产区根腐病发生情况，以及能引起苎麻根腐病发生的植物病原线虫种类，我们在我国苎麻主产区进行了根腐线虫病发生情况调查，并采集了病蔸和病土，分离其中的线虫，同时利用形态特征对病原线虫进行了鉴定。

1 材料和方法

1.1 样品采集

2010年9月至2011年7月，分别在江西宜春、湖南张家界和沅江、湖北咸宁、重庆涪陵、四川达州等地苎麻主产区进行根腐调查。在苎麻园采集根腐病病蔸和根际周围土壤，在根腐病严重的麻园采用5点采样法，在20 cm深度每点采集病土500 g左右;用塑料袋包装，并以地块为单位(样品集)做好标记，带回实验室备用。

表1 样品采集地点、苎麻品种及土壤类型Tab.1 Sample locations，ramie species and soil types

1.2 线虫的分离、杀死和固定

病根中的线虫，采用改良贝曼漏斗法分离［3］。病土中的线虫，采用蔗糖浮选离心法分离［4］。采集的病土以田块为单位，将五个点的土壤分别碾碎，挑去碎石和草根等杂物，分别称量100 g，混合均匀，过60目筛，取筛下细土，称量30 g，采用蔗糖浮选离心法分离线虫，重复3次。剩余的土样放在4℃冰箱保存。分离的线虫，在体式显微镜下观察，根据口针的有无，挑选植物寄生线虫，用热水浴(65℃，2～3 min)杀死线虫，用FG固定液固定和保存。

1.3 线虫的鉴定

将固定的线虫制作成临时玻片，在显微镜下观察，根据线虫的形态特征［4］进行分类鉴定。

1.4 线虫密度

本研究主要计数根围土壤中的线虫数量。每个样品集取30 g鲜土，分离线虫，显微镜下观察计数;而后换算成100 g鲜土中的线虫数量。每个样品集重复3次。

2 结果

2.1 苎麻根部寄生线虫种类

调查发现，各地苎麻主产区均有根腐线虫病发生。从各地样品中分离到的线虫，经观察，根据有无口针，判断是否为植物寄生线虫;而后，挑取植物寄生线虫，根据形态特征［4］，分别鉴定为P.coffeae(图1a)、P.penetran(图1b)，长针属线虫(Paratylenchus sp.)(图1c)和丝尾属线虫(Filenchus sp.)(图 1d)。

图1 苎麻根际分离的四种寄生线虫.a－咖啡短体线虫，b－穿刺短体线虫，c－长针属线虫，d－丝尾属线虫Fig.1 Four species of parasitic nematodes isolated from the rhizosphere of ramie.a－P.coffeae，

2.1 不同种类寄生线虫的分布

4种线虫在各地的分布，整理录入表2，不难发现，大部分样品中分离到了咖啡短体线虫(20/22，90.9%)，丝尾垫刃线虫分布次之，存在于在54.5%的样品中，只有少部分样品(4/22，18.2%)中分离到穿刺短体线虫，长针属的线虫最少，只存在于13.6%的样品中(3/22)。

表2 各地样品中植物寄生线虫种类Tab.2 Parasitic nematode species in the samples at different locations

2.3 土壤类型、种植年限与线虫密度初步分析

研究发现，同一苎麻品种种植在相同的土壤类型中，随着种植年限的增加，苎麻根际土壤中寄生线虫数量增加(图2)。同时，相同的苎麻品种种植在不同类型的土壤中，虽然年限相同，但根际土壤中寄生线虫的密度不同(图3)，不同土壤类型似乎影响线虫的生长和繁殖。

图2 不同种植年限对寄生线虫密度的影响Fig.2 Effect of the planting years on parasitic nematode densities

图3 不同土壤类型对寄生线虫密度的影响Fig.3 Effect of the soil types on parasitic nematode densities

3 讨论

本研究通过对我国不同苎麻产区根部寄生线虫研究发现，寄生于苎麻根部的病原线虫主要有4种，分别为短体属的咖啡短体线虫和穿刺短体线虫，1种丝尾属线虫和1种长针属线虫。其中，咖啡短体线虫是比较普通存在于苎麻根际的寄生线虫，这一结果与以往的研究报道类似［3］。长针属线虫和丝尾属线虫能够寄生大豆、玉米，以及多种园艺、花卉植物;前者是一类营外寄生的植物线虫，主要分布在我国的北方地区［6－10］。这两种属的线虫能够寄生于苎麻根部，尚属于首次报道。至于寄生于苎麻的这两个属的线虫是什么种，尚需要通过分子生物学手段进一步来鉴定。

本研究中样品采集地集中在我国中南部地区，气候差异较小，且多集中在苎麻二麻生长期间采集，可以忽略季节对根腐线虫生长繁殖的影响。研究发现相同的苎麻品种，随着种植年限的增加，根部寄生线虫数量增加，符合病害发展规律。潘凤娟等研究发现，不同土壤类型中，大豆根际寄生线虫种类不同，肥沃的土壤中，寄生线虫种类较多［7］。本研究发现，不同的土壤类型，苎麻根际寄生线虫数量也不同。苎麻种植于山地黄棕壤，根际寄生线虫较多，似乎较适合寄生线虫的生长及繁殖。

致谢:在本研究实施过程中，国家麻类产业技术体系咸宁苎麻试验站、涪陵苎麻试验站、达州苎麻试验站和宜春苎麻试验站团队成员协助我们采集了样品，在此一并表示感谢!

［1］陈洪福，张怀芳，陈绵才.苎麻根腐线虫病及其防治方法研究简报［J］.中国麻作.1982(4):9－10，8.

［2］陈洪福，张怀芳，陈绵才.苎麻根腐线虫病及其防治研究［J］.中国麻作.1985(1):41－45，16.

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［4］谢辉.植物线虫分类学［M］.第二版.北京.高等教育出版社.2005，9.

［5］毛小芳，李辉信，陈小云，等.土壤线虫三种分离方法效率比较［J］.生态学杂志.2004，23(3):149－151.

［6］陈立杰，刘维志，秦博.中国针属线虫的寄主植物种类和地域分布研究［J］.辽宁农业科学.2002，3:4－8.

［7］潘凤娟，许艳丽，李春杰，等.不同土壤类型和纬度大豆田植物线虫分布特征［J］.大豆科学.2009，28(5):869－874.

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