ELISA法检验乙肝标志物影响因素的探讨

王 璐 河南大学淮河医院检验科，河南省开封市 475000

乙型病毒性肝炎是由乙型肝炎病毒（HBV）引起的一种世界性疾病。发展中国家发病率高，据统计，全世界无症状乙肝病毒携带者（HBsAg携带者）超过2.8亿，我国约占9300万［1］。多数带菌者无症状，其中1／3出现肝损害的临床表现。目前我国有乙肝患者3000万［2］。

目前，酶联免疫吸附实验（Enzyme－Linked Immunosorbent Assay，简称酶免）是临床实验室最常用的一种检验乙肝的标记免疫方法［3］。ELISA在基础研究和常规的临床实验室中有着广泛的适用性，具有操作简便、灵敏度较高、试剂成本低、环保、适于大批量人群抗原抗体筛查等优点，已广泛应用于肝炎病毒、艾滋病毒筛查和激素等项目的检测。但是如果忽视影响其结果的因素，难免造成假阳性或假阴性。所以了解影响因素对减少差错事故的发生是极其必要的。

1 试剂因素

试剂质量是影响检测结果的直接因素，对于生产厂家出售的试剂盒，其抗原抗体纯度、抗体的亲和力、滴度和特异性、标记物的比活性或免疫活性等［4］，均对测定结果产生直接影响。试剂盒的稳定有效期、运输条件及储存方式等也均会对结果有一定程度影响。

试剂灵敏度主要取决于抗体亲和常数（E值）和抗体的滴度，还取决于标准曲线的斜率和零标准管的重复性两个因素［4］。因此，重视试剂质量，才能有效地进行室内质控以及参加室间质量评价，使结果具有可比性。

此外，试剂应冰箱保存。使用前要平衡至室温，不同批号的试剂组不宜交叉使用，试剂打开后要1周内用完，应同时做室内质控，确保结果的可靠性。

2 标本因素

影响ELISA法检测乙肝标志物的因素很多，除上述因素外，还与内源物质（包括溶血、脂浊、类风湿因子、甲胎蛋白、自身抗体等）干扰和外源物质（如血液抗凝剂）的干扰有关［5］。另外试剂的运输、保存、使用者素质［6］以及一步法检测HBsAg的钩状效应［5］等都影响到检测质量。

因此，收到标本后要认真查对，对不符合要求的标本和申请单要拒收，建立拒收登记制度，合格标本要及时分离、及时检测，避免溶血。如条件不允许，将标本置于4℃冰箱保存5d内检测或1周后检测需低温冻存（－20℃），但不可反复冻融，并在检测前要轻柔混匀，不可强烈振荡。

3 操作过程中的影响因素

3.1 操作前要检查一些物理因素 如室温（18～25℃）孵育箱的温度，不同的温育环境会影响到检测结果。明确孵育时间和洗涤次数等。

3.2 正确使用加样器 应垂直加入标本或试剂，避免刮擦包被板底部；加样要准，避免液体外溅使血清残留在反应壁上，加样吸头要用一次性的，避免交叉污染。

3.3 洗板时的注意事项 洗板时（手工洗和机洗），应严格按说明书的次数和浸泡时间，不要使洗液外溢，造成孔间污染，导致假阴性或假阳性。洗板过程也是影响结果的因素之一［7］，冲力过大，会造成酶结合物丢失，使吸光度值偏低。

3.4 显色剂不可过多 显色要避光反应，要放够时间，显色时间不够，可使一些滴度低的标本反应不出来，造成假阴性。

3.5 颜色终止条件［8］影响实验的准确性 由于ELISA实验终止剂选用引起的持续发展的颜色加深影响了阴性和弱阳性样品及定量检测样品的结果，特别在大批样品需较长时间进行读数时，这种潜在的颜色逐渐加深现象成为影响结果的重要因素。

4 环境因素

实验室环境也是保证结果可靠的因素之一，应做好以下控制：（1）通风、采光与防尘；（2）控制温度及湿度，环境温度与湿度随地理位置不同可有很大差异，应使用系统空调进行控温，并要求控制空气湿度为35%～65%之间；（3）消除噪音与电磁干扰；（4）稳定水电，实验过程中应采用蒸馏水（纯水）或经软化处理的自来水。

综上所述，ELISA检测结果是受多方面因素影响的，我们要有一个良好的工作环境，提高个人工作责任心，提高质量控制意识；建立SOP文件，建立完善的质量体系以及标准化操作流程。在工作中总结经验，尽量避免或减少人为干扰因素对结果的影响。

［1］何爱玲.1757例血清乙肝五项指标检测结果分析〔J〕.社区医学杂志，2006，4（3）：46－47.

［2］彭文伟.传染病学〔M〕.北京：人民卫生出版社，2006：21－44.

［3］李宏杰，朱峰，程家坤，等.ELISA竞争抑制法检测Anti－Hbe试剂盒共系统检测HbeAg结果分析〔J〕.中国现代医生，2007，45（9）：15－17.

［4］于自正.现代医学标记免疫学〔M〕.北京：人民军医出版社，2000：41－45.

［5］许斌，朱虎定.ELISA检测HbsAg影响因素的探讨〔J〕.临床检验杂志，2000，18（4）：232.

［6］王露楠，王文丽，郑怀竞.一九九三年全国乙肝标志物免疫学检验室间评价〔J〕.肝脏病杂志.1995，3（1）：44.

［7］吴晓岩.临床免疫实验室室内质控影响因素分析〔J〕.中国免疫学杂志，2001，17（5）：277－280.

［8］杨崇先，郭北诚，麻卓云.比色时间对ELISA结果判读的影响〔J〕.大理学院学报，2003，2（增刊）：19－20.