高效毛细管电泳法测定缬沙坦苯磺酸氨氯地平

李志伟，赵云超，齐建敏

（河北科技大学化学与制药工程学院，河北石家庄 050018）

高效毛细管电泳法测定缬沙坦苯磺酸氨氯地平

李志伟，赵云超，齐建敏

（河北科技大学化学与制药工程学院，河北石家庄 050018）

建立了一种高效毛细管电泳方法，用于缬沙坦和苯磺酸氨氯地平的同时分析：以30 mmol／L磷酸钠缓冲液（p H＝7.47）作为电解质溶液，检测波长237 nm，分离电压15 k V，高度差进样10 s.同时进行了方法学验证：缬沙坦在0.050 4～0.504 0 mg／mL内线性良好（r＝0.999 8，n＝6），迁移时间和峰面积的相对标准偏差（RSD）分别为0.3%和1.3%（n＝6），回收率为98.98%～99.79%；苯磺酸氨氯地平在0.050 4～0.504 0 mg／mL内线性良好（r＝0.999 6，n＝6），迁移时间和峰面积的RSD为0.6%和1.4%（n＝6），回收率为98.22%～99.46%.通过上述高效毛细管电泳法，缬沙坦和苯磺酸氨氯地平在15.0 min内分离良好，分离度（R＝29.8）.此方法快速，灵敏，实用.

缬沙坦；苯磺酸氨氯地平；高效毛细管电泳法

苯磺酸氨氯地平（amlodipine besylate）是一种重要的二氢吡啶类的钙离子通道阻滞剂，缬沙坦（valsa－rtan）属于血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂.通过缬沙坦和苯磺酸氨氯地平综合治疗，高血压患者的血压可以降低到正常水平，而不会影响生活质量［1］.2008年7月23日，FDA将缬沙坦和苯磺酸氨氯地平复方制剂，作为治疗高血压的一线药物.降压药物的联合应用，可以降低用药剂量，并且能够更好地保护靶器官.通过不同的作用机制，发挥协同作用，使血压得到长期的控制.目前，测定缬沙坦和苯磺酸氨氯地平的方法主要有：分光光度法［2］，荧光法，气相色谱法，流动注射化学发光法，高效液相色谱法和液相色谱－质谱联用法［3－7］.本文建立了一种高效毛细管电泳方法，用于缬沙坦和苯磺酸氨氯地平片剂中2种成分的分析，具有柱效高、分离速度快、样品用量少等优点.

1 实验部分

1.1 仪器和试剂

高效毛细管电泳仪（北京彩陆科学北京彩陆科学仪器有限公司），CL1020型紫外检测器，HW－2000型色谱工作站，未涂层石英毛细管柱（75μm×75 cm，河北永年锐沣色谱器件公司）.所用化学试剂均为分析纯或色谱纯.氢氧化钠、磷酸氢二钠、甲醇和磷酸均购自天津市科密欧化学试剂开发中心，水为自制重蒸水.

1.2 电泳条件

电泳介质30 mmol／L磷酸钠缓冲液（用磷酸调p H＝7.47，使用前脱气）；高度差进样10 s；分离电压15 k V；检测波长237 nm；室温下操作.实验前依次用0.1 mol／L NaOH冲洗2 min，重蒸水冲洗3 min，缓冲液冲洗3 min.2次进样之间，用缓冲液冲洗毛细管.

1.3 溶液配制

分别精密称取缬沙坦和苯磺酸氨氯地平各10.0 mg，置10 mL量瓶中，用甲醇－水（V（甲醇）∶V（水）＝1∶1）溶解并稀释至刻度；精密量取1 m L，置10 m L量瓶中，用甲醇－水（V（甲醇）∶V（水）＝1∶1）稀释至刻度.制备一系列不同质量浓度的标准溶液（0.050 4～0.504 0 mg／m L），进样前用0.45μm的滤膜过滤.

取缬沙坦苯磺酸氨氯地平薄膜衣片，置50 m L量瓶中，加入5 m L水，振摇45 min使崩散，超声15 min再机械搅拌30 min，放冷，加溶剂甲醇－水稀释至刻度，摇匀，离心，取上清液用0.45μm的滤膜过滤，作为供试品溶液.

2 结果与讨论

2.1 分离条件

2.1.1 缓冲液及p H值的选择

实验尝试使用几种不同类型的缓冲液如磷酸钠，磷酸－硼砂，硼酸钠.通过比较发现磷酸钠的分离效果较好.随后，考察了缓冲液的浓度和p H值的影响.对p H值在3.0～8.5内进行了考察，结果发现：p H越高，迁移时间越短.但是，p H值过高或过低，缬沙坦和苯磺酸氨氯地平不能达到很好地分离.因此，最终确定的缓冲液p H＝7.47.

2.1.2 浓度的选择

磷酸钠缓冲液的浓度会影响到电渗流和分离度.本实验考察了一系列不同浓度的磷酸钠缓冲液，结果表明：在低浓度时（7.5 mmol／L），峰部分重叠，而在高浓度时（40 mmol／L），由于离子强度增高而导致重现性变差，最终确定缓冲液的浓度为30 mmol／L.

2.1.3 分离电压的选择

工作电压会影响到分离度及分析时间.实验在5～25 k V内对分离电压进行了考察，结果显示：随着分离电压的增大，分析时间缩短，柱效增大.然而，随着电压的增大，柱内的焦耳热也变大，分离度降低，系统变得不稳定.综合考虑分离度以及分析时间等因素，最终选择分离电压为15 k V.

通过上述考察，最终确定的分离条件是0.03 mol／L磷酸盐缓冲液（用磷酸调p H＝7.47），分离电压15 k V.在此条件下，缬沙坦和氨氯地平能够在较短时间内达到完全分离.图1为电泳图谱，其中，苯磺酸氨氯地平的迁移时间为4.12 min，缬沙坦的迁移时间为11.12 min，分离度良好（R＝29.8），并且没有其他杂峰的干扰.结果表明，高效毛细管电泳法是一种简单，快速的测定缬沙坦和苯磺酸氨氯地平的方法.

图1 标准溶液电泳（10 mg／L）Fig.1 HPCE electrophoregram of the standard solution（10 mg／L）

2.2 方法学验证考察

2.2.1 线性实验

在0.050 4～0.504 0 mg／mL内，分别配制6种不同质量浓度的缬沙坦和氨氯地平的标准溶液，每种质量浓度进样6次.以质量浓度和峰面积进行线性回归，苯磺酸氨氯地平的线性方程为Y＝720.2X＋2.85

（r＝0.999 6），缬沙坦的线性方程为Y＝2735.3X＋226.47（r＝0.999 8），其中，X为溶液质量浓度（mg／m L），

Y为峰面积.结果表明：在0.050 4～0.504 0 mg／mL内，缬沙坦和氨氯地平线性关系良好.

2.2.2 回收率实验

按照处方中主药及辅料的比例，分别配制低、中、高3种不同质量浓度的缬沙坦和苯磺酸氨氯地平溶液，按照2.2节下的方法进行检测.苯磺酸氨氯地平的回收率为98.22%～99.46%，缬沙坦的回收率98.98%～99.79%.结果如表1和表2所示.

表1 缬沙坦回收率Tab.1 Assary results of recovery for valsartan

表2 苯磺酸氨氯地平回收率Tab.2 Assary results of recovery for amlodipine besylate

2.2.3 检测限

依据色谱峰信噪比S／N＝3计算.缬沙坦和苯磺酸氨氯地平的检测限分别为1.5 mg／L和9 mg／L.结果如图2所示.

图2 检测限电泳Fig.2 Electrophoregram of the detection limit

2.2.4 重复性

在相同条件下，对配制好的溶液（按照处方比例）进行重复检测，计算迁移时间和峰面积的相对标准偏差.缬沙坦迁移时间和峰面积的相对标准偏差分别为0.3%和1.3%（n＝6），苯磺酸氨氯地平迁移时间和峰面积的相对标准偏差分别为0.6%和1.4%（n＝6）.

2.3 样品测定

按照已经确定的方法，对3批缬沙坦氨氯地平片进行检测，电泳图谱如图3所示，3批样品含量测定结果如表3所示.

图3 缬沙坦氨氯地平片电泳Fig.3 Electrophoregram of the tablets

表3 3批片剂的含量测定结果Tab.3 Results of three batches of tablets

3 结论

实验考察了不同电泳条件对分离的影响，结果表明，与现有的液相色谱方法相比，该法是一种快速、简便、高效的方法，可以同时测定缬沙坦苯磺酸氨氯地平片中的有效成分.

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LIU Xuesong，LIU Wei，MEN Jinyu，et al.Determination of valsartan in human plasma a by HPLC－MS／MS［J］.Chinese Journal of New Drugs，2011，20（14）：1321－1324.

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Simultaneous determination of valsartan and amlodipine besylate by high performance capillary electrophoresis

LI Zhi－wei，ZHAO Yun－chao，QI Jian－min
（College of Chemical and Pharmaceutical Enginering，Hebei University of Science and Technology，Shijiazhuang 050018，China）

A high performance capillary electrophoresis（HPCE）method was established for the simultaneous determination of valsartan and amlodipine.The background electrolyte system composed of 30 mmol／L phosphate buffer（p H＝7.47）was found to be the most suitable solution for this separation at the detection wavelength of 237 nm，separation voltage of 15 k V and the injection of sample for 10 s.The linear calibration ranges were 0.050 4 to 0.504 0 mg／mL（r＝0.999 8，n＝6）for valsartan，and 0.050 4 to 0.504 0 mg／mL（r＝0.999 6，n＝6）for amlodipine besylate.The relative standard deviations（RSD）（n＝6）of the migration time and peak－area counts of valsartan were 0.3%and 1.3%respectively，while amlodipine besylate 0.6%and 1.4%.The recoveries were determined to be 98.98%—99.79%for valsartan，98.22%—99.46%for amlodipine besylate.By using proposed HPCE method，valsartan and amlodipine besylate were well－separated within only 15.0 min（R＝29.8）.This method is rapid，sensitive and practical.

valsartan；amlodipine besylate； HPCE

O657.8

A

1000－1565（2012）02－0149－05

2011－11－20

河北省自然科学基金资助项目（B2010000849）

李志伟（1977－），男，河北唐县人，河北科技大学副教授，博士，主要从事药物分析研究.E－mail：lizhiwei＠hebust.edu.cn

梁俊红）