白饭树总生物碱的提取分离与鉴定

秦贻强，邓俊刚，邓立东

（桂林医学院附属医院，广西 桂林541001）

白饭树为大戟科白饭树属（Flueggea）植物，生于丘陵地的山坡，路旁和旷野灌木丛中。产于广西各地区。全株入药，味苦、微涩，性凉，有小毒，具清热解毒、消肿止痛、止痒止血等功效，外用可治疗湿疹、脓疱疮、过敏性皮炎、疮疖及烧烫伤［1，2］等。白饭树在民间做为传统的药用植物单味及复方内服或外用治疗风湿性疾病较早，但对白饭树的应用研究始于20世纪60年代，日本、印度、德国等学者在化学和药理等方面作了一些研究［3，4］，白饭树含有多种化合物，且有多种生理活性，被各国药学和化学工作者所关注。本文对白饭树生物碱进行提取分离，并作出了鉴定，为白饭树在药物制剂研究中质量标准提供科学依据。

1 试药与仪器

1.1 试药

白饭树药材，由桂林医药公司提供购，经桂林医学院附属医院药剂科蔡小玲副主任中药师鉴定，为大戟科植物白饭树Fluggea virosa（Roxb.Ex Willd.）Voigt.干燥全株。硅胶G（青岛海洋公司，批号：1984211）；羧甲基纤维素（青岛海洋公司，批号：0908011）；其余试剂均为分析纯。

1.2 仪器

旋转蒸发仪RE－52AA（上海亚荣生化仪器厂）；DZF－250真空干燥器（郑州长城科工贸有限公司）；B2500S－M7超声波清洗器（必能信超声有限公司产品）；HANGPING FA2004电子天平（上海精科天平仪器厂）；SHZ－Ⅲ循环水真空泵（上海亚荣生化仪器厂）；YOKO－SY 紫外线分析仪（武汉药科新技术开发公司）。

2 实验方法和结果

2.1 原料的预处理

取白饭树药材1kg，洗净后，水浸泡静置过夜，备用。

2.2 白饭树总生物碱的提取分离

2.2.1 提取

取预处理好的白饭树药材1kg，加入5 000mL水采用水煎煮法进行提取，煮沸后保持微沸继续煎煮4h后，倒出煎煮液。药渣再加3 000mL 水继续煎煮，煮沸后保持微沸继续煎煮3h后，倒出煎煮液，合并两次煎煮液，将煎煮液放入圆底烧瓶中在旋转蒸发仪上减压蒸馏，得到两次煎煮白饭树总水提浓缩液，保存，备用。

2.2.2 大孔树脂的预处理

在柱底端放少许棉花，用适量蒸馏水浸润，然后将大孔吸附树脂用水边搅拌下转移到树脂柱中，然后用蒸馏水淋洗至柱子紧实，再在柱子上端放一层薄薄的棉花。将500mL的5%HCL以30d·min－1的流速通过树脂柱进行活化，然后用蒸馏水以30d·min－1的流速洗至中性；再将500mL的5%NaoH 以30d·min－1的流速通过树脂柱进行活化，再用蒸馏水以30d·min－1流速洗至中性；最后用75%乙醇洗脱杂质，洗至与水无白色浑浊现象；再用蒸馏水洗至无有机溶剂味即可，备用。

2.2.3 分离

将白饭树总水提浓缩液一半经上样预处理活化过的D101型大孔吸附树脂柱，先用蒸馏水洗脱至洗脱液无色，收集洗脱液，再用75%乙醇进行洗脱至醇液无色，收集洗脱液。分别得到了上样收集液、水洗脱液、乙醇洗脱液，将上述液体分别浓缩后真空干燥。上样流出物和水洗脱物为粘稠状黄色物体。乙醇洗脱物为褐色固体，即白饭树总生物碱，称重得，干燥物3.75g。

2.3 生物碱的鉴定

2.3.1 生物碱的沉淀反应（试管法）

取少量水洗脱液、乙醇洗脱液、上样收集液分别置于5支干净的试管中，分别加入以下已配制好的生物碱沉淀试剂中：碘化铋钾、改良的碘化铋钾、硅钨酸、碘－碘化钾、鞣酸，观察其现象与结果。结果如表1所示。

表1 企业家试管法鉴定结果

表1结果显示，只有乙醇洗脱液样品跟生物碱沉淀试剂有颜色反应，可知白饭树生物碱主要在乙醇洗脱液中，而较少或没有生物碱成分在水洗脱液和上样收集液中，然而由于该方法本身灵敏度较差有一定局限性，需要用薄层层析法来进一步判断。

2.3.2 生物碱的薄层色谱定性鉴别

取少量的上样收集液样品、水洗脱液样品、乙醇洗脱液样品。用毛细管从中取大约4μL 溶液点在分别点于同一CmC－Na为粘合剂的含2%NaOH 的硅胶G 薄层板硅胶G薄层板同一起跑线上。以氯仿：正丁醇：甲醇（3：5：2）为展开剂，于室温（25℃）上行法展开，展程约15cm，取出晾干，置紫外光灯（365nm）下检视，只有乙醇洗脱液样品有荧光显示，而上样收集物及水洗脱物相应位置未发现有荧光斑点。然后喷以改良的碘化铋钾显色，可见只有乙醇洗脱浓缩液样品的最上方有黄褐色斑点，由以上的实验现象可以推断出白饭树中的生物碱主要在乙醇洗脱液中，为进一步研究白饭树生物碱的药理活性做好准备。

3 讨论

本次实验采用打孔树脂对白饭树生物碱进行了分离，结果显示分离效果良好，去除了提取物中的大部分杂质，得到了固体状的总生物碱，为下一步进行药理实验做好准备，为白饭树在制剂中的利用提供了有效途径。

本实验首次利用薄层色谱法鉴定了白饭树提取物，所用分离系统分离效果良好，在紫外灯下可见清晰的荧光斑点，对白饭树在制剂研发中的质量控制提供依据。

［1］ 中国植物志编辑委员会.中国植物志［M］.北京：科学出版社，1997：68－72.

［2］ 中华本草编委会.中华本草［M］.上海：上海科学技术出版社，1999：858－859.

［3］ 张庆荣，夏光成.有毒中草药彩色图鉴（第二版）［M］.天津科技翻译出版公司，2006：112.

［4］ 陈梦青，侯林林.白饭树化学成分的研究［J］.植物学报，1985：228.