丙戊酸钠对RPMI8226细胞增殖的影响*

乔 莲，张志华，王陶然，王丽红，郝长来

(承德医学院附属医院血液病科，河北承德 067000)

多发性骨髓瘤(multiple myeloma，MM)是以浆细胞恶性克隆性增殖为主要特征的血液系统恶性肿瘤，好发于中老年人，近年来发病率有逐渐增高的趋势，目前的主要治疗措施是联合化疗与造血干细胞移植，但无法完全治愈。组蛋白去乙酰化酶抑制剂(histone deacetylase inhibitors，HDACI)能在肿瘤的发生发展过程中通过改变DNA或染色质的结构性组分，调节肿瘤抑制因子的表达和转录因子的激活[1]。HDACI作为新型的抗肿瘤药物，能够显著抑制肿瘤细胞的增殖，促进肿瘤细胞分化并诱导肿瘤细胞凋亡，可对肿瘤细胞产生广泛的影响。丙戊酸钠(valproic acid，VPA)是一种耐受性良好的抗癫痫药，同时也作为HDAC抑制剂具有抗肿瘤的作用。近年的研究证实，VPA对MM细胞具有体外抗增殖及诱导凋亡作用[2]。本研究以人多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226细胞为研究对象，观察VPA对RPMI8226细胞增殖的影响，并对相关作用机制进行初步探讨。

1 材料与方法

1.1 材料和试剂 人多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226，购自上海中美合资博慧斯生物医药科技有限公司。VPA，美国Sigma公司，用灭菌注射用水稀释，-20℃冰箱密闭避光保存，临用前用不含血清和抗生素的RPMI 1640液稀释至所需浓度。MTT试剂，石家庄市勃盛化学试剂有限公司(配制方法:称取MTT粉剂250mg，溶于50ml的PBS液中，于电磁力搅拌机上搅拌30min溶解后，用0.22μm的微孔滤膜过滤除菌分装，-20℃避光保存。)。

1.2 细胞培养 RPMI8226细胞培养于含15%胎牛血清的RPMI 1640培养基中，同时加入青霉素(100U/ml)和链霉素(100U/ml)，37℃、5% CO2培养箱中培养;每2-3d换液传代1次，取对数生长期细胞用于实验。

1.3 MTT法检测RPMI8226细胞的增殖情况 取对数生长期RPMI8226细胞，800r/min离心5min收集细胞，调整细胞浓度为5×104个/ml，接种于96孔培养板。实验组分别加入不同浓度的VPA(0.5、1.0、2.0、4.0mmol/L)，对照组不加药，每个药物浓度设3个复孔。各组细胞于37℃、5% CO2培养箱内分别培养24h、48h、72h后，每孔加入MTT溶液(5mg/ml)10μl;继续培养4h后，加入三联液(10% SDS-5%异丁醇-0.012 mol/L HCL)，100μl/孔，于37℃放置过夜后，应用酶标仪检测各孔490nm处的吸光度(A)值。以该组复孔的平均值作为该组细胞的A值，计算细胞生长抑制率:细胞生长抑制率(%)=(1-实验组A值/对照组A值)×100%，实验重复3次。

1.4 统计分析 采用SPSS 17.0统计学软件处理数据，组间比较行单因素方差方析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

不同浓度VPA对RPMI8226细胞的增殖抑制作用:同一时间点，不同浓度VPA处理RPMI8226细胞后，各处理组与对照组相比，细胞增殖均受到抑制(P＜0.05)，且随着VPA处理浓度的增加，细胞增殖抑制率逐渐升高(P＜0.05)。同一浓度VPA作用下，随着作用时间的延长，细胞增殖抑制率亦逐渐升高(P＜0.05)。见附表。

附表 不同浓度VPA对RPMI8226细胞的增殖抑制作用(±s)

附表 不同浓度VPA对RPMI8226细胞的增殖抑制作用(±s)

与对照组同时间点比较:aP＜0.05;同时间点VPA各浓度间比较:bP＜0.05;同一VPA浓度不同时间点间比较:cP＜0.05

VPA(mmol/L) 抑制率(%)24h 48h 72h对照组 0 0 0 0.5 2.96±2.53abc 10.31±3.63abc 38.42±1.78abc 1 7.66±3.09abc 16.76±5.03abc 47.67±2.16abc 2 13.65±4.85abc 21.91±6.21abc 52.62±1.95abc 4 21.92±3.08abc 30.42±3.83abc 58.52±1.29abc

3 讨论

多发性骨髓瘤(MM)是来源于终末分化B淋巴细胞的恶性肿瘤，特征是骨髓中浆细胞克隆性增生，合成并分泌大量免疫球蛋白。多发性骨髓瘤占造血系统肿瘤的10%，占全部恶性肿瘤的1%[3]。由于传统的常规化疗缓解率低及多药耐药的形成，目前多发性骨髓瘤的临床治疗仍十分困难，寻找新的靶向治疗药物成为当今的研究热点。

组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACI)是以组蛋白乙酰化修饰为作用靶点的新的抗血液肿瘤药物，很多研究显示，HDACI能够通过诱导细胞凋亡和分化、促使细胞周期停滞而抑制血液肿瘤细胞增殖[4-5]。近年的研究表明，耐受性良好的抗癫痫药物VPA是一种强有力的HDAC抑制剂，VPA能够解除HDAC依赖性转录抑制，并能在体内、体外引起组蛋白的高乙酰化[6]。

已有研究显示，VPA可通过抑制HDAC的作用，使核小体组蛋白乙酰化，逆转HDAC参与的异常基因表达，从而有效抑制肿瘤细胞增殖;并且VPA可以选择性地作用于肿瘤细胞，而对正常细胞无毒性，因此，由于VPA较好的生物利用度和低毒副作用而备受关注[7]。本研究发现，不同浓度的VPA均能有效抑制RPMI8266细胞增殖，这与前人的研究结果一致，VPA在体内和体外均能抑制多发性骨髓瘤细胞增殖并诱导其凋亡[8-9]。有研究表明，VPA能诱导乙酰化组蛋白的积聚，并能有效的以剂量依赖性方式抑制骨髓瘤细胞的增殖并诱导其凋亡[10]。本研究也证实了这一点:本研究中，随着VPA浓度的增加及作用时间的延长，对RPMI8226细胞的增殖抑制率逐渐升高。

本研究表明，VPA具有抑制骨髓瘤细胞系RPMI8226细胞增殖的作用，为VPA作为HDAC抑制剂治疗多发性骨髓瘤提供了实验依据。

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