ABO新生儿溶血病实验室检测方法及临床应用

黎海澜 综述，焦 伟 审校

（广西壮族自治区人民医院输血科，南宁 530021）

近年来对新生儿溶血病（HDN）的研究越来越受关注，HDN的早期诊断与防治已成为临床研究的热点。现就ABOHDN实验室检测方法及临床应用等进行综述。

1 ABO-HDN的发病机制及实验室检测的临床意义

新生儿溶血病是由于母婴血型不合而引起的同族免疫性溶血，临床表现为不同程度的黄疸、贫血、肝脾肿大，严重者可有核黄疸，甚至死亡［1］。ABO-HDN是ABO血型抗体引起的，在O型母亲所生的A型或B型婴儿中有较高的发生率，由于自然界广泛存在类A和类B物质，故ABO-HDN第1胎即可发病，但通常病情较轻，随着妊娠次数增加，发病率会相应增高，病情相对严重［2］。一般由抗-A引起的 HDN要比抗-B常见［3］。在A型、B型等母亲所生B、A、AB型婴儿仅少数发生溶血病。Wang等［4］曾报道1位A型母亲的血清中具有高滴度的IgG B抗体，其效价大于1∶1 024，导致B型新生儿发生溶血；Deng等［5］报道了1例更罕见的ABO-HDN，1位O型母亲所生具有cisAB血型的婴儿发生ABO新生儿溶血，在新生儿血清中同时检测出IgG抗-A和抗-B两种抗体，该婴儿具有高水平的胆红素血症以及严重的贫血。因此ABO-HDN不局限于O型母亲所生血型不合婴儿，A型／B型母亲所生血型不合婴儿也可发生，其研究显得越来越重要。

据统计，孕妇与胎儿发生ABO血型不合的概率为20%～25%，而其中发生溶血病的概率为10%左右。西安地区3 876例新生儿溶血病产后检测资料的分析结果显示，由A、AB血型不合引起的HDN占被检样本的0.08%，由B、AB血型不合引起的HDN占被检样本的0.1%，而由O、A血型不合引起的HDN占被检样本的20.12%，由 O、B血型不合引起的 HDN占被检样本19.74%，后两种血型不合共占39.86%［6］。因此对ABO-HDN进行早期、准确诊断有重要临床意义。

2 ABO-HDN实验室检测方法

血型血清学诊断是确诊HDN的主要依据。其基本程序为第一步血型鉴定，第二步进行三项试验，第三步从三项检查结果对ABO-HDN进行实验室诊断。

2.1 新生儿及父母血型鉴定方法 这是检查HDN的第一步，以便考虑以后进一步检查的程序。血型鉴定的方法很多，常用试管法，被认为是最可信赖的方法。随着实验技术的不断发展，单克隆凝胶血型卡已广泛应用于临床，全自动血库系统血型鉴定也逐步在临床推广应用［7］。

2.2 检测导致新生儿红细胞破坏的IgG抗-A（B）的方法

2.2.1 临床上对HDN的实验室诊断主要依靠HDN血型血清学检查，最有力的证据是证实新生儿红细胞被来自母亲的IgG抗体致敏。常用的检测方法包括红细胞致敏抗体放散试验、血清游离抗体试验、红细胞直接抗球蛋白试验，被称为HDN“三项试验”。

2.2.2 新生儿溶血病红细胞致敏抗体放散技术 在HDN“三项试验”中，患儿红细胞致敏抗体放散试验敏感度最高，是判定新生儿溶血病最为重要的依据。热放散法是ABO-HDN诊断最常用、最经典的试验，它是通过热释放的方法将致敏在红细胞表面的抗体放散到盐水（或AB型血清）中，再用已知的抗原检测盐水中的相应抗体。然而，因其为物理方法，热放散试验效果受诸多因素的影响，摇动的频率与力度、放散时间和温度等均难以控制［8］。多年来人们对实验室检测方法进行不断地探索，以寻找更为敏感、简捷的放散方法，如2004年孙爱农等［9］研究发现改良氯仿放散法适合检测由IgG抗-A或抗-B导致的ABO-HDN，且敏感性并不比传统热放散试验低；2000年周晓华等［10］报道微波放散法可以作为红细胞抗体放散的一种方法。但由于客观原因，均未能在临床上推广应用。近年来酸放散试验逐渐应用于HDN的实验室诊断［11］，且越来越受到人们的重视，已被英国血液学标准委员会列为红细胞血液免疫学检测常规方法。

2.2.3 患儿红细胞释放抗体及血清游离抗体检测方法 新生儿溶血病的严重程度主要与抗体种类、效价高低以及红细胞被致敏程度有关。游离实验是检测新生儿血清中是否存在与其红细胞不配合的ABO以外抗体和（或）IgG抗-A（B），可提示病情严重程度［12］。使用酶试验检测引发HDN的抗体，被认为工序繁琐，对技术人员操作要求高，难度大，耗时久，且在操作过程中易出现假阴性结果［13］。也有研究者利用不完全抗体快速反应试剂（主要含凝聚胺、聚乙二醇、枸橼酸钠）进行HDN的实验室检查诊断［14］。有人将凝聚胺技术应用于HDN抗体检测，认为凝聚胺法的敏感性能达到要求，且快速简便［15］。近几年微柱凝胶技术（MGCT）被引进HDN血型血清学实验，对临床标本检测的敏感性大大提高［16－20］。

2.2.4 患儿红细胞直接抗球蛋白试验 直接抗球蛋白试验阳性在新生儿溶血病诊断中有着非常重要的作用，阳性结果提示患儿体内红细胞可能被抗体致敏。因此直接抗球蛋白试验敏感性的提高有益于HDN初次确诊率的提高。ABO型溶血病因红细胞上抗体结合少，故直接法常显阴性，须作改良直接法、抗体释放试验及游离抗体试验［21］。

2.3 检测母体针对新生儿的免疫性抗体 母亲标本做与患儿血型抗原相对应IgG抗-A（B）效价的测定。新生儿 ABOHDN的发病率随其母亲体内IgG抗体效价的升高而升高，且与母亲体内IgG1呈正相关［22］。有研究表明，HDN的发病率随母体内抗-A（B）水平的升高而递增，但仍有一些高抗体水平的个体并无HDN，而一些低抗体水平的个体发生了中度至重度的HDN［22－24］。这可能与抗体的IgG亚型有关，有学者认为主要是IgG1抗体引起严重的HDN，而另一些学者研究显示：严重的HDN的发生与IgG1和IgG3存在相关性［25－27］。尽管如此，有关IgG亚型的定量检测目前仍处于试验阶段，要应用于临床尚待进一步的研究。虽然有关IgG抗体滴度与HDN严重程度之间的相关程度尚未确定，但目前仍作为临床对新生儿溶血病的实验室诊断依据之一。

3 结束语

HDN是由于母－胎间血型不合而引起的免疫性溶血性疾病，是儿科最常见的急性溶血性疾病之一，一直备受妇幼医疗学界的重视，尽管产前、产后、都有有效的治疗手段，但准确、及时的实验室检查检测，做到早发现、早防治仍将是值得探讨和研究的热点。

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