血清Fractalkine和超敏C反应蛋白与早期2型糖尿病肾病的相关性研究

谢绍锋，黄莉吉，赵 越，安晓飞，刘敬顺，余江毅

糖尿病是以高血糖为主要标志的代谢性疾病，糖尿病肾病(DN)是其严重微血管并发症之一，蛋白尿贯穿于DN整个过程，而且是直接导致肾功能恶化的重要危险因素［1］。研究显示，多种炎性因子作用导致的肾损伤可能是DN蛋白尿发生的重要原因之一［2］。C反应蛋白 (CRP)是一种敏感的、非特异性的炎症标志物［3］;Fractalkine(FKN)是一种重要的炎症趋化刺激因子，是CX3C类趋化因子中的惟一成员［4］。本研究通过测定139例2型糖尿病患者血清FKN和超敏C反应蛋白(hs－CRP)水平，探讨二者与相关代谢指标及尿微量清蛋白的关系和临床意义。

1 资料与方法

1.1 病例纳入标准 入选标准:(1)符合2007年《中国2型糖尿病防治指南》［5］中T2DM的诊断标准;(2)年龄在50～75周岁，性别不限;(3)无慢性并发症，或仅有轻度微血管并发症〔尿清蛋白/肌酐 (UACR) ＜300 mg/g;无明显视网膜病变或非增生性糖尿病视网膜病变〕;(4)血压≤140/90 mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa);(5)体质指数 (BMI)≤30 kg/m2。

排除标准:(1)空腹血糖 (FBG)≥13.9 mmol/L，或近1个月内出现糖尿病危急重症，如酮症酸中毒、糖尿病高渗状态;(2)合并感染、急性损伤、风湿等炎性反应性疾病;(3)合并肾囊肿、肾结石、尿道感染及其他原发性肾脏疾病;(4)已有大血管并发症，如冠心病、脑血管意外、下肢血管病变等;(5)具有严重的原发性心、肝、肺、肾、血液或影响其生存的严重疾病等。

1.2 一般资料 选取2009年3月—2010年2月在江苏省中医院内分泌科门诊就诊的2型糖尿病患者139例，其中男69例，女70例;平均年龄 (61.4±6.5)岁;糖尿病病程 (73.3±54.3)个月。本研究方案经伦理委员会批准，并获得患者书面知情同意。

根据UACR水平，将患者分为正常蛋白尿组 (UACR＜30 mg/g)92例，UACR平均为 (20±5)mg/g;微量清蛋白尿组(30 mg/g≤UACR＜300 mg/g)47例，UACR平均为 (47±22)mg/g。两组患者除腰围间差异有统计学意义 (P＜0.01)外，性别构成、年龄、病程、BMI、血压、高血压患者比例间均有可比性 (P＞0.05，见表1)。

1.3 方法 所有入选者禁食10 h以上，次日晨空腹采肘部静脉血液，采血前避免剧烈活动及应激等。(1)生化指标检测:包括FBG、糖化血红蛋白 (HbA1c)、血脂〔总胆固醇 (TC)、三酰甘油 (TG)、高密度脂蛋白胆固醇 (HDL－C)、低密度脂蛋白胆固醇 (LDL－C)〕、血肌酐，均采用Olympus AU2700全自动生化分析仪检测;根据Cockcroft－Gault公式计算肾小球滤过率 (eGFR)［6］;(2)连续3次测定随机尿清蛋白和尿肌酐水平，计算UACR［7］;(3)血清FKN测定采用双抗体夹心酶联免疫 (ELISA)法:血标本在室温下静置1 h左右，3 000 r/min离心8～10 min后分离血清，分装保存于－70℃冰箱中待检。采用BIO－RAD酶标仪、洗板机和美国USCN Life公司血清FKN试剂盒测定。采用Olympus AU2700全自动生化分析仪，利用免疫比浊法测定血清hs－CRP水平，最低检测值为0.15 mg/L。

1.4 统计学方法 采用SAS 8.0统计软件进行统计分析。符合正态分布的计量资料以 ()表示，两组间比较采用t检验。hs－CRP为非正态分布，采用常用对数转换后呈正态分布，采用t检验。采用Pearson相关分析及多元逐步回归分析判断两个变量间的相关关系。采用双侧检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组患者观察指标比较 两组患者 FBG、HbA1c、hs－CRP水平比较，差异有统计学意义 (P＜0.01);而两组血脂指标、FKN水平及eGFR比较，差异均无统计学意义 (P＞0.05，见表2)。

表1 两组患者一般资料比较Table 1 Comparison of clinical characteristics between normoalbuminuric and microalbuminuric groups

表2 两组患者观察指标比较 ()Table 2 Comparison of obvervational index between normoalbuminuric and microalbuminuric groups

表2 两组患者观察指标比较 ()Table 2 Comparison of obvervational index between normoalbuminuric and microalbuminuric groups

注:FBG=空腹血糖，HbA1c=糖化血红蛋白，TC=总胆固醇，TG=三酰甘油，HDL－C=高密度脂蛋白胆固醇，LDL－C=低密度脂蛋白胆固醇，eGFR=肾小球滤过率，FKN=Fractalkine，hs－CRP=超敏C反应蛋白;*为对数换转后的数据

组别 例数 FBG(mmol/L)HbA1c(%)TC(mmol/L)TG(mmol/L)HDL－C(mmol/L)LDL－C(mmol/L)eGFR(ml·min －1·1.73 m－2)FKN(μg/L) hs－CRP*3±0.41微量清蛋白尿组 47 7.76±2.63 7.05±1.59 4.76±0.73 1.70±1.11 1.22±0.27 2.85±0.54 117.0±31.1 0.63±0.17 1.22±0.49 t正常蛋白尿组 92 6.89±1.67 6.30±1.18 4.82±0.90 1.41±0.85 1.31±0.34 2.89±0.67 110.2±21.5 0.65±0.19 0.8值4 ＜0.01 2.92 3.24 0.42 1.72 1.61 0.32 1.50 0.64 4.96 P值 0.004 0.002 0.675 0.088 0.110 0.748 0.136 0.52

2.2 血清FKN、hs－CRP与其他指标的相关性分析 139例2型糖尿病患者血清FKN水平为 (0.62±0.18)μg/L，与BMI、腰围、TG、hs－CRP均呈正相关 (P＜0.05)。多元逐步回归分析结果表明，调整年龄、性别、糖尿病病程、腰围、血压、血糖、HbA1c、血脂后，血清 FKN水平与 BMI相关 (β=0.32，P ＜0.01，R2=0.40，见表3)。

139例2型糖尿病患者血清hs－CRP对数转化值为 (0.96±0.48)，与BMI、腰围、eGFR、TG、UACR均呈正相关 (P＜0.01)，与HDL－C呈负相关 (P＜0.05);多元逐步回归分析结果表明，调整年龄、性别、糖尿病病程、腰围、血压、血糖、HbA1c、血脂后，血清hs－CRP与 BMI(β=0.30，P＜0.01，R2=0.37)、UACR(β =0.17，P ＜0.01，R2=0.27)相关 (见表3)。

表3 血清FKN、hs－CRP水平与其他指标的相关性分析及多元逐步回归分析结果 (n=139)Table 3 Correlation of serum fractalkine and hs－CRP level with different variables in all study subjects(n=139)

3 讨论

DN是糖尿病的主要死亡原因之一，已成为终末期肾病的主要原因。近年来许多研究认为炎症反应在2型糖尿病、肥胖症等代谢性疾病及其慢性血管并发症的发生过程中起着重要的作用［8］。DN的发生发展与有关炎性因子及促炎因子密切相关，并认为DN是一种炎症性疾病［9］。

研究表明，趋化因子FKN通过与其受体CX3CR1结合，参与单核细胞和T细胞趋化、黏附，导致血管内皮细胞损伤，从而促进动脉粥样硬化的形成［4］。然而，目前有关FKN与糖尿病慢性血管并发症关系的临床研究所获结论却并不一致。Shah等［10］发现2型糖尿病患者血清FKN水平显著高于非糖尿病患者 〔(0.506±0.262)μg/L与 (0.422±0.210)μg/L，P＜0.0001〕。Damas等［11］研究表明冠心病不稳定型心绞痛患者血清FKN水平明显高于健康人群 〔(1 199±112)ng/L与(423±25)ng/L〕。而另一项研究发现非糖尿病的冠心病患者FKN水平与健康人群相似 〔(477±225)ng/L与 (572±205)ng/L，P=0.303)〕，而1型糖尿病患者血清FKN水平明显低于健康人群 〔(430±256)ng/L与 (572±205)ng/L，P=0.042〕［12］;研究者认为冠心病和1型糖尿病患者FKN水平下降可能与多数病例使用了具有一定抗炎作用的血管紧张素转换酶抑制剂或血管紧张素受体阻滞剂类降压药物、他汀类降脂药物治疗有关。

目前有关血清FKN水平与糖尿病尿清蛋白关系的临床研究报道仅有1篇［13］，该研究检测了130例2型糖尿病患者及40例正常人群的血清FKN水平，结果发现2型糖尿病患者血清FKN水平随着UAER的升高逐渐升高，并与血糖、血脂代谢紊乱密切相关。而本研究结果显示，微量清蛋白尿患者(即早期2型DN患者)血清FKN水平与正常清蛋白尿2型糖尿病患者相似，FKN与BMI、腰围、TG、hs－CRP呈正相关，而与糖尿病病程、血糖、血压无相关性;多元逐步回归分析结果表明，BMI是血清FKN水平独立的影响因素。结论的不一致可能与研究的人群不同有关，本研究选择的人群为2型糖尿病微量清蛋白尿期患者，且入组2型糖尿病患者血糖、血压控制基本达标。尽管本研究排除了使用具有一定抗炎作用的ACEI或ARB类降压药物、他汀类降脂药物治疗的2型糖尿病患者，但口服降糖药物或胰岛素注射治疗是否对糖尿病患者低度炎症状态具有影响目前尚不清楚。此外，由于本研究缺乏正常人群的资料，因此尚不确定糖代谢异常的2型糖尿病患者较正常人群血清FKN水平是否升高。

CRP是一种非糖基化的聚合蛋白，含有5个亚单位，属于Pentraxin家族;由肝脏产生并分泌，受激活的单核细胞、巨噬细胞产生的白介素1、肿瘤坏死因子α、转化生长因子β、白介素6等细胞因子的调节［14］。越来越多的研究表明，血清hs－CRP水平作为一种敏感的、非特异的炎症指标，在高血压、糖尿病以及非糖尿病患者尿清蛋白产生过程中起着重要的作用［3］。Zambrano－Galvan等［15］研究发现升高的 hs－CRP 水平作为独立的主要风险因素，与UACR呈正相关，而与血肌酐水平无相关性。另一项有关多种族亚裔人口的研究发现，升高的hs－CRP水平独立于高血压、高血糖，与尿微量清蛋白密切相关［16］。本研究相关分析结果表明，早期 DN患者hs－CRP水平较正常清蛋白尿组显著升高，且与BMI、腰围、eGFR、TG、UACR呈正相关，与HDL－C呈负相关;多元逐步回归分析结果表明，BMI和UACR是血清hs－CRP水平主要的独立影响因素。

目前，大多数研究都将BMI或腰臀比 (WHR)作为衡量肥胖程度的重要指标。由于本研究缺乏WHR数值，尽管相关分析结果表明，BMI、腰围与血清FKN、hs－CRP均呈正相关，但回归分析结果仅提示BMI为血清FKN和hs－CRP的独立影响因素，与以往文献报道一致［17－19］，提示2型糖尿病高BMI患者慢性炎症状态较低BMI患者更加明显。Guven等［19］研究表明高BMI是肥胖症患者血清hs－CRP水平升高的重要相关因子，并推测肥胖促进CRP水平升高的原因可能与肥胖时多种脂肪源性激素分泌增多、血脂和游离脂肪酸增高、氧化应激增强、血液流变学异常等病理生理改变，从而促进机体的轻微慢性炎症的进展有关。

综上所述，本研究初步探讨了血清炎性因子FKN和hs－CRP与早期2型DN患者UACR、血糖、血脂等代谢指标的关系。结果表明，升高的血清hs－CRP水平与早期DN患者UACR密切相关，提示低度炎症是早期DN微量蛋白尿产生的独立危险因素。而血清FKN水平与早期2型DN患者UACR无相关，血清FKN水平在预测早期2型DN中的作用及其与糖尿病慢性并发症的关系尚需要更大样本的、更加合理、科学的临床试验进行研究。

1 Gross JL，de Azevedo MJ，Silveiro SP，et al.Diabetic nephropathy:diagnosis，prevention，and treatment［J］.Diabetes Care，2005，28(1):164－176.

2 Galkina E，Ley K.Leukocyte recruitment and vascular in jury in diabetic nephropathy［J］.J Am Soc Nephrol，2006，17(2):368－377.

3 Kshirsagar AV，Bomback AS，Bang H，et al.Association of C－reactive protein and microalbuminuria(from the National Health and Nutrition Examination Surveys，1999 to 2004) ［J］.Am J Cardiol，2008，101(3):401－406.

4 D＇Haese JG，Demir IE，Friess H，et al.Fractalkine/CX3CR1:why a single chemokine－receptor duo bears a major and unique therapeutic potential［J］.Expert Opin Ther Targets，2010，14(2):207 －219.

5 中华医学会糖尿病学分会.2007年版中国2型糖尿病防治指南［J］.中华内分泌代谢杂志，2008，24(2):S1－S26.

6 Sampson MJ，Drury PL.Accurate estimation of glomerular filtration rate in diabetic nephropathy from age，body weight，and serum creatinine［J］.Diabetes Care，1992，15(5):609－612.

7 American Diabetes Association.Standards of medical care in diabetes—2009 ［J］.Diabetes Care，2009，32(Suppl 1):S13－S61.

8 Qatanani M，Lazar MA.Mechanisms of obesity－associated insulin resistance:many choices on the menu ［J］.Genes Dev，2007，21(12):1443－1455.

9 Mora C，Navarro JF.The role of inflammation as a pathogenic factor in the development of renal disease in diabetes ［J］.Curr Diab Rep，2005，5(6):399－401.

10 Shah R，Hinkle CC，Ferguson JF，et al.Fractalkine is a novel human adipochemokine associated with type 2 diabetes ［J］.Diabetes，2011，60(5):1512－1518.

11 Damas JK，Boullier A，Waehre T，et al.Expression of fractalkine(CX3CL1)and its receptor，CX3CR1，is elevated in coronary artery disease and is reduced during statin therapy［J］.Arterioscler Thromb Vasc Biol，2005，25(12):2567 －2572.

12 Maegdefessel L，Schlitt A，Pippig S，et al.Patients with insulin－dependent diabetes or coronary heart disease following rehabilitation express serum fractalkine levels similar to those in healthy control subjects［J］.Vasc Health Risk Manag，2009，8(5):849－857.

13 唐灵，甄瑞峰，刘树娇，等.2型糖尿病肾病患者血清Fractalkine因子与血糖、血脂的关系 ［J］.世界中西医结合杂志，2011，6(7):579－581.

14 Kanga ES，Kim HJ，Kim YM，et al.Serum high sensitivity C －reactive protein is associated with carotid intima－media thickness in type 2 diabetes［J］.Diabetes Research and Clinical Practice，2004，66(Suppl 1):S115－S120.

15 Zambrano－Galvan G，Rodriguez－Moran M，Simental－Mendia LE，et al.C－reactive protein is directly associated with urinary albumin－to－creatinine ratio［J］.Arch Med Res，2011，42(6):451－456.

16 Sabanayagam C，Lee J，Shankar A，et al.C －reactive protein and microalbuminuria in a multi－ethnic Asian population［J］.Nephrol Dial Transplant，2010，25(4):1167 －1172.

17 Fatma GH，Suzanne W，Gustavo GZ，et al.Waist circumference and BMI in relation to serum high sensitivity C－reactive protein in Cuban Americans with and without type 2 diabetes［J］.Int J Environ Res，Public Health，2010，7(3):842－852.

18 Tajiri Y，Mimura K，Umeda F.High－sensitivity C－reactive protein in Japanese patients with type 2 diabetes ［J］.Obesity Research，2005，13(10):1810－1816.

19 Guven A，Cetinkaya A，Aral M，et al.High－sensitivity C－reactive protein in patients with metabolic syndrome ［J］.Angiology，2006，57(3):295－302.