痰瘀同治方对高脂血症心肌缺血再灌注损伤大鼠血脂、血液流变及炎症因子的影响

唐丹丽，佟琳，张华敏，隋宇，崔海峰

[摘要] 目的：观察痰瘀同治方对高脂血症心肌缺血再灌注损伤（MI/RI）大鼠血脂、血液流变及炎症因子的影响。方法：60只雄性SD大鼠随机分为5组：假手术组、模型组、西药对照组、痰瘀同治方低、高剂量组。采用可逆性冠脉左前降支结扎缺血30 min再灌注2 h复制MI/RI模型，检测再灌注后各组大鼠血清CHO，TG，HDL-L，LDL-L，全血黏度，血浆黏度以及ICAM-1，TNF-α，IL^-10含量。结果：与假手术组比较，模型组大鼠血清CHO，TG，LDL-L显著升高且HDL-L含量降低（P<0.01或P<0.05），全血黏度（1.0，3.0切度）及血浆黏度明显升高（P<0.01或P<0.05），炎症因子ICAM-1，TNF-α含量明显升高且IL^-10含量显著降低（均为P<0.01）；与模型组比较，痰瘀同治方低剂量组能明显降低CHO，TG含量（P<0.01或P<0.05），改善全血黏度（1.0，3.0，30切度，P<0.05），并显著降低血清ICAM-1，TNF-α表达（P<0.01或P<0.05）。结论：痰瘀同治方可通过降低血脂、改善血液流变及降低炎症因子含量，发挥干预MI/RI的作用。

[关键词] 心肌缺血再灌注损伤；高脂血症；血液流变；炎症因子

心肌缺血再灌注损伤（mycardial ischemia-reperfusion injury，MI/RI）发生、发展是个多因素协同作用的过程。研究显示，血脂升高和血液流变性损害在缺血性心脏病中起着重要的作用[1]。高脂血症是动脉粥样硬化最主要的危险因素，并通过促进炎症因子产生和氧化应激等机制参与再灌注损伤的发生[2]。血脂的升高以及心肌缺血再灌注均可使血液的流变学特性发生异常改变，而血液流变性异常又会加重心肌再灌注损伤。如何有效预防和治疗MI/RI是近年临床和科研的研究热点，本实验通过建立高脂血症MI/RI模型，观察痰瘀同治方对高脂血症MI/RI大鼠血脂、血液流变及炎症因子的影响，研究其对心肌再灌注损伤保护作用机制，以期对MI/RI临床治疗提供新的启示。

1 材料与方法

1.1 动物 雄性SD大鼠60只，体重（260±20） g，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，许可证号SCXK（京）2012-0001。

1.2 试剂与药物 总胆固醇（CHO， 批号120931）、甘油三酯（TG， 批号120621）、低密度脂蛋白（LDL-C，批号120521）及高密度脂蛋白（HDL-C，批号120502）试剂盒均购自北京中生北控生物科技有限公司；ICAM-1（批号GR101667-1），TNF-α（批号k120727），IL^-10（批号GR95720-1） ELISA试剂盒（英国Abcam公司），购自北京中原领先科技有限公司。

痰瘀同治方（瓜蒌15 g、薤白15 g、清半夏10 g、赤芍15 g、黄连5 g等），由亳州市芳益堂药业有限责任公司提供。以上药物加水浸泡1 h，水煎2次，每次1 h，之后合并2次滤液并浓缩至4.3 g·mL^-1（高剂量组）及2.15 g·mL^-1（低剂量组）的质量浓度，4 ℃保存备用。辛伐他汀（Merck Sharp & Dohme Limited U.K.，批号110157）。高脂饲料配方：74%基础饲料、1%胆固醇、10%蛋黄粉和15%猪油，购自北京科澳协力饲料有限公司，许可证号SLXK（京）2009-0012。

1.3 造模方法 参考文献方法并加以改进[3]，腹腔注射1%戊巴比妥钠（50 mg·kg^-1），麻醉后仰卧位固定四肢及头部。记录Ⅱ导心电图。颈部、胸前手术野备皮，切开气管，连接动物呼吸机（呼吸频率70次/min，吸呼比1∶2，潮气量9 mL·kg^-1）。自左侧第3～4肋间剪开皮肤，钝性分离肌肉组织，打开胸腔，剪开心包膜，于左心耳与肺动脉圆锥之间找出冠状动脉左前降支，并以5-0号丝线结扎分支起点外约1～2 mm（在丝线与心肌间放一根约1 cm长细棉绳），此时缺血心肌壁呈现发绀、膨出，同时记录心电图，以标准肢导联Ⅱ导联ST段弓背上抬，T波高耸，显示心肌缺血形成。30 min后松开结扎，使缺血冠脉再灌注，关闭胸腔，再灌注120 min，心电图示ST段回落1/2以上。结扎前心电图不正常，或未到观察终点而死亡以及造模不成功者剔除。

1.4 动物分组及给药 将60只大鼠随机分5组，每组12只，分别为假手术组、模型组、西药对照组、痰瘀同治方低、高剂量组。假手术组动物常规饲养，其余各组给予高脂饲料，条件相同。假手术组、模型组大鼠每日灌服生理盐水10 mL·kg^-1，阳性对照组每日灌服辛伐他汀悬液4 mL·kg^-1[4]，痰瘀同治方高、低剂量组每日灌服中药煎液43，21.5 g·kg^-1，造模前连续给药4周。

1.5 标本采集及检测 以锥板式旋转黏度计进行全血黏度和血浆黏度测定，取肝素钠抗凝的1 mL全血加入血液黏度计的样品池中，于37 ℃测定切变率200，100，30，3，1切度下的全血黏度。取2 mL肝素钠抗凝血，3 500×g离心10 min，取0.8 mL血浆于37 ℃测定血浆黏度。采用全自动生化仪检测各组大鼠血清CHO，TG，HDL-C及LDC-C。ELISA法按试剂盒说明检测血清ICAM-1，TNF-α，IL^-10含量。

1.6 统计学处理 采用SPSS 11.5软件进行统计分析。计数资料以±s表示，采用随机区组设计的单因素方差分析（ANOVA），满足方差齐性时的两两比较采用LSD法，不满足方差齐性时的两两比较采用Tamhane′s T2 法。

2 结果

2.1 各组大鼠血脂变化情况 模型组大鼠CHO，TG，LDL-C明显升高，HDL-C下降，与假手术组比较差异显著（P<0.01或P<0.05），证明高脂血症模型建立成功。辛伐他汀组与痰瘀同治低剂量组可降低CHO，TG表达，与模型组比较具有统计学意义（P<0.01或P<0.05）；辛伐他汀组还能升高HDL-C含量，与模型组比较具有明显差异（P<0.05）。痰瘀同治高剂量组对于血脂各项指标的改善与模型组比较不具有统计学意义，见表1。

2.2 各组大鼠血液流变变化情况 与假手术组比较，模型组1.0，3.0切度的全血黏度及血浆黏度明显升高，差异显著（P<0.01或P<0.05）；辛伐他汀组能显著降低全血黏度中1.0，3.0，30，100切度下的表达，与模型组比较有显著差异（P<0.01或P<0.05）；痰瘀同治低剂量组能降低1.0，3.0，30切度下全血黏度，与模型组比较有显著差异（P<0.05）。痰瘀同治高剂量组对于全血黏度及血浆黏度的作用与模型组比较不显著，见表2。

2.3 各组大鼠血清ICAM-1，TNF-α，IL^-10变化情况 缺血再灌注后模型组大鼠血清ICAM-1，TNF-α含量明显升高，且IL^-10含量显著降低，与假手术组比较均差异显著（均为P<0.01），提示炎症反应增强；辛伐他汀组能显著降低ICAM-1，TNF-α含量并上调IL^-10表达，与假手术组比较有统计学意义（均P<0.01）；痰瘀同治低剂量组能降低ICAM-1，TNF-α含量，与模型组比较差异显著（P<0.01或P<0.05），痰瘀同治高剂量组仅能降低TNF-α含量（与模型组比较P<0.05）；痰瘀同治高、低剂量组均能在一定程度上上调IL^-10表达，但与模型组比较不具统计学意义，见表3。

3 讨论

冠心病患者往往伴有血脂代谢的紊乱，大规模临床试验结果明确了血脂异常与冠心病的关系，CHO及LDL-C升高是冠心病最主要的独立危险因素之一，也是主要的病理基础，血脂升高与动脉粥样硬化、冠心病及心肌梗死的发生呈正相关[5-6]。资料显示，用高脂饲料喂养大鼠8周，高脂血症可致大鼠对MI/RI的敏感性增加[7]。同时，脂代谢紊乱亦与机体内免疫炎症反应有密切的关系。研究显示，高脂饲料诱导的脂代谢紊乱大鼠血清hs-CPR，IL-6水平显著高于对照组，说明脂代谢紊乱组大鼠体内由于脂肪过多而处于低度慢性损伤状态[8]。

血液流变性障碍不可避免地导致微循环灌注不足，减少了组织细胞氧和营养物质的供应。从而引起局部组织一系列功能和代谢的紊乱，使组织器官的功能出现障碍。以MI/RI为例，反复缺血再灌注可升高血液黏度，血黏度升高后，血流缓慢，使缺血组织的血液灌注减少，进一步加重心肌组织的缺血缺氧，如此往复，形成恶性循环。临床检测和实验研究均已报道心绞痛患者和心肌梗死患者可有全血黏度升高、血浆黏度升高及红细胞电泳速度降低等血液流变学改变。有高黏度血症的冠心病患者，采用降低血液黏度的方法进行治疗，可改善症状和降低心肌梗死的发生率[9]。由此可见，在MI/RI发生、发展过程中，炎症反应、脂代谢紊乱及血液流变异常之间相互影响。高脂血症可导致内皮细胞损伤、血液流变学异常，血流变异常则可以影响肝脏微循环灌注，从而影响其代谢功能，导致出现高脂血症加剧[9]。再者，血脂以及血液生化代谢的异常，均可导致机体炎症反应的启动及加重。

痰瘀互结是MI/RI发病的重要病理因素，且贯穿于冠心病的始终，因此痰瘀同治法是治疗MI/RI常用法则。遣方以瓜萎、薤白、半夏、赤芍、川芎为主，共奏活血化痰，通阳宣痹之效，临床实践证明，痰瘀同治法是治疗冠心病的有效方法。发作期运用本法，能使标实之证迅速缓解，并且有利于阴邪的消散；缓解期运用本法，寓通于补，祛邪以扶正[10]。现代研究普遍认为，脂质代谢紊乱是“痰浊”的物质基础，血液流变学异常则是“痰瘀痹阻”的客观指征[11]。实验结果显示，痰瘀同治方能降低高脂血症MI/RI大鼠血清CHO，TG含量，改善1.0，3.0，30切度下全血黏度升高状态，同时抑制再灌注后TNF-α及ICAM-1高表达，减轻炎症反应。说明痰瘀同治方能从调节血脂、血液流变性及炎症损伤等多个环节起到减轻再灌注损伤、保护心肌的作用，至于高脂血症、血液流变及炎症之间的相互影响、作用的深层机制则有待于进一步探讨。

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Effects of Tanyu Tongzhi recipe on hemorheology， blood lipid and

inflammatory factors in rats with mycardial ischemia-

reperfusion injury and hyperlipidemia

TANG Dan-li1， TONG Lin2， ZHANG Hua-min2*， SUI Yu1， CUI Hai-feng1

（1. Experimental Research Center of Chinese Medicine， China Academy of Chinese Medical Sciences， Beijing 100700， China；

2.Institute of Information on Chinese Medicine， China Academy of Chinese Medical Sciences， Beijing 100700， China）

[Abstract] Objective： To investigate the influence of Tanyu Tongzhi（TYTZ） recipe on chemorheology， blood lipid and inflammatory factors of hyperlipidemia and myocardial ischemia.reperfusion injury in rats- Method： Sixty SD male rats were divided into 5 groups randomly， sham.operated group， model group， high dose group of reproduced by ligation of left descending artery for 30 min followed by releasing the TYTZ and low group of TYTZ- The model of MI/RI injury of the myocardium was ligation for 2 hours in rats- Serum contents of CHO， TG， HDL.L， LDL.L and whole blood viscosity， plasma viscosity and ICAM.1， TNF.α，IL.10 were measured after myocardial reperfusion injury- Result： Compared with sham.operated group， the levels of CHO， TG， LDL.L， whole blood viscosity （1-0，3-0） plasma viscosity and the contents of ICAM.1 were significantly higher ，however， HDL.L， IL.10 levels were lower in model group（P<0-01 and P<0-05）- CHO， TG， whole blood viscosity （1-0，3-0，30） and expression of ICAM.1， TNF.α were obviously lower in low group than the model group（P<0-01 and P<0-05）- Conclusion： The TYTZ recipe can relieve reperfusion injury through regulating blood lipid， improving hemorheological characteristic and inhibiting inflammatory reaction-

[Key words] myocardial ischemia.reperfusion injury； hyperlipidemia； hemorheology； inflammatory factor

doi：10.4268/cjcmm20130221

[责任编辑 张宁宁]