HPLC法测定藏药十五味乳鹏丸中大黄酚的含量

巴桑卓嘎 兰 钧

西藏自治区食品药品检验所，西藏 拉萨 850000

HPLC法测定藏药十五味乳鹏丸中大黄酚的含量

巴桑卓嘎 兰 钧

西藏自治区食品药品检验所，西藏 拉萨 850000

目的：建立藏药十五味乳鹏丸中大黄酚的含量测定方法。方法：色谱柱为岛津VP－ODS C18（4.6mm×250mm，5μm）；以甲醇－0.1%磷酸溶液（85：15）为流动相；流速为1.0mL／min；检测波长为430nm。结果：大黄酚的线性范围为0.015884～0.07942μg （r＝0.9992），平均回收率为100.81%， RSD%＝1.6%。结论：本方法高效，快速，灵敏，可用于藏药催汤丸的质量控制。

十五味乳鹏丸；HPLC；大黄酚；含量测定

藏药十五味乳鹏丸是由乳香、宽筋藤、决明子、渣驯膏、黄葵子、藏菖蒲等15味蔵药制成的复方藏药制剂。具有消炎止痛，干黄水的功效，用于关节红肿疼痛，发痒，痛风，黄水积聚［1］。决明子为主药，大黄酚为其主要成分。为有效控制产品质量，建立了十五味乳鹏丸中大黄酚含量的高效液相色谱（HPLC）测定法［2］。本法操作简便、准确、重复性好，可作为藏药十五味乳鹏丸的质量控制方法。

1 仪器与试药

Waters高效液相色谱仪，Waters2696泵自动进样器，2998二极管阵列紫外检测器，Waters自带数据处理器，超声仪，旋转蒸发仪，十万分之一电子天平。

大黄酚（中国生物制品检定所，批号：110796－2000716）；十五味乳鹏丸（西藏雄霸拉去藏药厂，批号：20090901、20091101；西藏金珠雅砻藏药责任有限公司，批号：090301）；阴性样品药材（西藏自治区食品药品检验所）；甲醇、磷酸为色谱级，水为超纯水，其余试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

岛津VP－ODS C18色谱柱（4.6mm×250mm，5μm），以甲醇－0.1%磷酸溶液（85：15）为流动相；检测波长：430nm；流速：1.0ml／mim；进样：10μl。

2.2 空白试验 按处方中药味比例，配制不含决明子的药群，按其工艺制成空白制剂，再按供试品溶液的制备方法制备并测定，色谱图见图1。表明阴性样品溶液在与大黄酚对照品相同保留时间处未现色谱峰，故认为无干扰。

2.3 对照品溶液的制备 取大黄酚对照品适量，精密称定，置容量品中，加甲醇制成1ml含8μg的溶液，即得。取宽筋藤对照药材1g，加甲醇10ml，同法制成对照药材溶液。

2.4 供试品溶液的制备 取本品粉末2g，精密称定，置100ml锥形瓶中，精密加入甲醇50ml称定重量，加热回流1h，放冷；再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25ml，置50ml烧瓶中，挥去甲醇；加2.5mol／l硫酸溶液20ml，超声处理5分钟，再加三氯甲烷20ml，加热回流1h，冷却；移置分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗涤容器，并入分液漏斗中，分取三氯甲烷层，酸液用三氯甲烷提取2次，每次约10ml，合并三氯甲烷液，用无水硫酸钠脱水，三氯甲烷液移置50ml烧瓶中，回收三氯甲烷，残渣加无水乙醇－醋酸乙酯（2∶1）溶解定容置10ml量瓶中，摇匀，用0.45μm超滤膜过滤，取续滤液，即得。

2.5 线性关系的考察 精密量取大黄酚对照品溶液（7.942μg／ml），分别进样2、4、6、8、10μl，记录色谱图，以峰面积（A）对进样量（C）作图，得一直线（r＝0.9992）。大黄酚在0.015884～0.07942μg范围内线性关系良好。结果见表1。

表1 线性范围考察

2.6 精密度试验 精密吸取大黄酚对照品溶液（7.924μg／ml）10μl，重复进样5次，测得大黄酚峰面积值的相对标准偏差（RSD）为0.3%。

2.7 稳定性试验 取供试品溶液（批号：20090901）分别于0、2、4、8、12h，各进样10μl，测得样品中大黄酚峰面积值的相对标准偏差（RSD）为2.0%，表明供试品溶液在24h内基本稳定。

2.8 重复性试验 按照拟定的含量测定方法，取同一批样品（由雄巴拉曲藏药厂生产批号：20090901）5份，分别制成供试品溶液，进样10μl，测得大黄酚含量，其相对标准偏差（RSD）为0.7%

2.9 加样回收率 取已知含量（63.2μg／g）（批号：20090901）的样品约1.2g，精密称定，精密加入对照品溶液（大黄酚8.2944μg／ml）4ml，按照供试品制备方法和色谱条件，制备加样回收供试品溶液并注入高效液相色谱仪，计算回收率。结果见表2。

表2 大黄酚对照品加样回收率试验结果（n＝6）

2.10 样品的测定 按上述方法制备供试品溶液和对照品溶液（7.942、8.36μg／ml），分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。结果见表3。

表3 十五味乳鹏丸中大黄酚含量测定结果

3 讨论

本品功效消炎止痛，干黄水。用于关节红肿疼痛，发痒，痛风，黄水积聚。处方中决明子具有干黄水、止痒、止痛的功效［3］，涵盖了本处方的主要功能主治。因此本标准建立了决明子中的大黄酚含量测定，并参考文献建立了高效液相色谱法测定十五味乳鹏丸中大黄酚的含量，该法简便，准确，灵敏度高，重复性好，可用于本品中大黄酚的含量测定。

对本品中大黄酚进行相应的提取方法考察，甲醇加热回流提取1h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25ml，置50ml烧瓶中，挥去甲醇，再加2.5mol／L硫酸溶液和三氯甲烷加热回流，其次用三氯甲烷萃取，合并三氯甲烷液，回收溶剂，最后残渣用甲醇－三氯甲烷（1∶1）和乙醇－乙酸乙酯（2∶1）不同的混合溶液溶解，综合提取率、干扰背景、分离度等因素，最终确定了残渣加乙醇－乙酸乙酯（2∶1）溶解。

［1］中国卫生部药典委员会编.中华人民共和国卫生部药品标准［S］.藏药（第一册），1995.

［2］国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）［M］.北京：中国医药科技出版社，2010.

［3］占堆，赵军宁.藏医成方制剂现代研究与临床应用［M］.四川：四川科学技术出版社，2009：12.

Content determination of Chrysophanol in Tibet traditional medicine Shiwuwei Rupeng pills by HPLC

BaSang Zhuoga，LAN Jun
Tibet Institute for Food and Drug Control，Lhasa 850000，China

ObjectiveTo set up a method for determining the content of chrysophanol in Shiwuwei Rupeng Wan.MethodsThe chromatogram column was SHIMADZU VP－ODS C18（4.6mm×250mm，5μm），the mobile phase composition was methanol－0.1%orthphosphoric acid（85：15），the flow rate was 1 mL／min，the detection wavelength was at 430nm.ResultsThe linear range of chrysophanol was 0.015884～0.07942μg，r＝0.9992.The average recovery rate was 100.81%，RSD%＝1.6%.ConclusionThe method is highly effective，quick and sensitive，and suitable for quality control of Tibet traditional medicine Shiwuwei Rupeng pills.

shiwuwei Rupeng Wan；HPLC；chrysophanol；content determination

R291.406

A

1007－8517（2013）16－0004－02

2013.06.04）