球孢白僵菌对榕母管蓟马成虫和若虫的致病性

袁盛勇，孔 琼，李 珣，沈登荣，陈 斌，田学军

(1.红河学院生命科学与技术学院，云南蒙自 661100;2.云南农业大学植物保护学院昆明 650201)

榕母管蓟马Gynaikothrips ficorum属于缨翅目Thysanoptera 管蓟马科Phlaeothripidae，是危害榕树的一种重要害虫之一，在我国主要分布于云南、福建、广东、海南、江西、广西等省区(杨希，1994)。榕母管蓟马在云南省的危害日益加重(梁贵红等，2007)，云南蒙自地区危害最为严重，榕母管蓟马主要危害新梢及其嫩叶，导致嫩叶卷曲形成“饺子状”虫瘿，最终树叶变硬枯死。云南榕母管蓟马不同地理种群的遗传分化研究发现蒙自种群与云南其它地理种群存在明显差异(张利娟等，2012)。目前对榕母管蓟马的田间防治主要以化学防治为主，配合栽培管理合理修剪和自然天敌防治为辅的防治方法(赵国富，2008)。白僵菌寄主范围广，能够侵染鳞翅目Lepidoptera、鞘翅目 Coleoptera、膜翅目 Hymenoptera、同翅目Homoptera、双翅目Diptera 等15个目，149科的700余种昆虫及蜱螨目的6科、10余种螨和蜱(蒲蛰龙，1997)。球孢白僵菌Beauveria bassiana常用于防治森林白蚁(柯云玲等，2011)、棕尾别麻蝇Boettcherisca peregrine(王松田等，2009)、斜纹夜蛾Prodenia litura(Fabricius)(罗成等，2011)、玉米螟Ostrinia furnacalis Guenée(张振铎等，2010)、松褐天牛Monochamus alternatus(丁德贵等，2007)、火红蚁Solenopsis invicta(杨佳后等，2009)、蛴螬Holotrichia parallela(林华峰等，2006)、桔小实蝇Bactrocera dorsalis(Hendel)(潘志萍等，2008)和西花蓟马 Frankliniella occidentalis(袁盛勇等，2010)等农林害虫。目前未见球孢白僵菌对榕母管蓟马的报道，本实验利用球孢白僵菌开展榕母管蓟马成虫和若虫的致病性研究，为利用该菌防治榕母管蓟马提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 供试菌种

球孢白僵菌MZ050724 菌株保存于红河学院生命科学与技术学院昆虫病原体实验室。

1.1.2 供试虫源

实验用榕母管蓟马成虫和若虫采自红河学院校园内小叶榕树叶内。

1.2 试验方法

1.2.1 菌株的扩繁和分生孢子液配制

采用PPDA 培养基，菌种接种于培养皿中并用封口膜封好，置于26℃相对湿度为85%的人工气候箱内，培养10～15 d 后供实验用，取培养10～15 d 的菌块放入烧杯中用无菌水+两滴0.05%吐温－20，过滤除去菌丝和杂质，稀释成测定致病性所需的分生孢子液浓度。

1.2.2 五个菌株对榕母管蓟马成虫和幼虫的室内致病性研究

配制4.5×105、4.5×106、4.5×107和4.5×108个/mL 4个处理浓度，成虫和若虫的每个处理浓度各重复3次，每个重复挑取榕母管蓟马成虫和若虫各30头(成虫和若虫分开单独接种)，并用0.05%吐温－20+无菌水作为对照。在培养皿中放滤纸保湿，采用喷雾法接种，在滤纸、榕树叶和榕母管蓟马成虫和若虫虫体上喷洒配制好的分生孢子液，用保鲜膜封口，饲养于26℃下的人工气候箱中，每24 h 观察记录死虫数，连续观察8 d。

1.3 数据分析方法

应用SPSS13.0 统计软件分别对剂量和时间作线性回归分析，建立直线回归模型，分别计算剂量效应LC50和时间效应LT50。

2 结果与分析

2.1 球孢白僵菌对榕母管蓟马成虫的致病性

球孢白僵菌MZ050724 菌株对榕母管蓟马成虫的致病性测定结果如表1 所示，第2 d 出现成虫死亡，各处理浓度下第8 d 的致病性最强，4.5×105～4.5×108个/mL 下的累计校正死亡率分别是56.52%，68.57%，74.75%和88.56%，说明孢子浓度越高，死亡率越高，致病性相应增强;如表3 所示，其致死中时间LT50分别7.5 d，6.39 d，5.17 d和4.52 d，随着分生孢子浓度的增加，致死中时间LT50逐渐缩短。如表2 所示，第5～8 d的致死中浓度LC50分别是3.6041×108个/mL，3.5816×107个/mL，3.2289×106个/mL和2.2417×105个/mL，说明随着接种后时间推移，致死中浓度LC50逐渐减小。

表1 球孢白僵菌分生孢子不同浓度对榕母管蓟马成虫的致病性Table1 Pathogenicity of Beauveria bassiana to adult of Gynaikothrips ficorum different concentrations

表2 球孢白僵菌分生孢子对榕母管蓟马成虫的致死中浓度Table 2 LC50of Beauveria bassiana against adult of Gynaikothrips ficorum

表3 球孢白僵菌分生孢子对榕母管蓟马成虫的致死中时间Table 3 LT50of Beauveria bassiana against adult of Gynaikothrips ficorum

2.2 球孢白僵菌对榕母管蓟马若虫的致病性

球孢白僵菌MZ050724 菌株对榕母管蓟马若虫进行致病性测定结果如表4，表5和表6 所示，第2 d 若虫出现死亡，在4.5×108个/mL 下的累计校正死亡率为16.40%，随着接种后时间的延长，第8 d 时4.5×105～4.5×108个/mL 下的累计死亡率均达到最大，其分别为53.01%，65.24%，71.85%和83.46%。在4.5×105～4.5×108个/mL 下的致死中时间LT50依次是7.78 d，6.64 d，5.35 d和4.85 d，随着浓度增加，致死中时间逐渐缩短。接种后从第5～8 d 该菌对若虫的致死中浓度LC50逐渐减小，分别是3.7836×108个/mL，3.9153×107个/mL，3.4586×106个/mL和2.9441×105个/mL。

表4 球孢白僵菌分生孢子不同浓度对榕母管蓟马若虫的致病性测定Table4 Pathogenicity of Beauveria bassiana to larvae of Gynaikothrips ficorum different concentrations

表5 球孢白僵菌分生孢子对榕母管蓟马若虫的致死中浓度Table 5 LC50of Beauveria bassiana against larvae of Gynaikothrips ficorum

表6 球孢白僵菌分生孢子对榕母管蓟马若虫的致死中时间Table 6 LT50of Beauveria bassiana against larvae of Gynaikothrips ficorum

3 结论与讨论

球孢白僵菌MZ050724 菌株对榕母管蓟马成虫和若虫有较强的致病性，累计校正死亡率均大于80%以上，该菌对成虫的致病性比若虫的强。袁盛勇等(2010)报道蜡蚧轮枝菌MZ041024 菌株对棕榈蓟马若虫的毒力效果相对强于对成虫的毒力效果，袁盛勇等(2010)报道蜡蚧轮枝菌MZ041024 菌株对西花蓟马的毒力若虫强于成虫，以上结论与球孢白僵菌MZ050724 菌株对榕母管蓟马致病性成虫强于若虫的结论不一致。高浓度比低浓度致病力强，说明了高浓度的球孢白僵菌孢子对于成功侵染榕母管蓟马的成虫和若虫的成功率至关重要，因为高浓度的孢子提高了单位昆虫体表球孢白僵菌的孢子数，增加了球孢白僵菌孢子侵染榕母管蓟马成虫和若虫体表形成附着孢的几率，提高了球孢白僵菌的致病力。从实验结果看，该菌对成虫的致病性要强于对若虫的致病性，这可能主要原因是在接种后若虫出现蜕皮，在球孢白僵菌分生孢子菌丝还未侵入表皮时，幼虫蜕皮而使分生孢子离开虫体，导致致病性下降。从成虫与若虫的致死中浓度LC50和致死中时间LT50来看该菌株的分生孢子作为防治榕母管蓟马的有效成分时，孢子浓度越高，杀虫速度越快，杀虫数量越多。但本实验数据综合表明，防治分生孢子浓度选择在108个/mL 最好。因此，球孢白僵菌MZ050724 菌株很有可能将成为防治榕母管蓟马的一种重要的生物防治手段。

References)

Ding DG，Fan MZ，Meng YQ，Li ZZ，Xia CR，2007.Molecular evaluation on the efficacy of sustainable control of Monochamus alternatus by nonwoven fabric fungal bands impregnated with Beauveria bassiana.Chinese Journal of Applied Ecology，18(3):564－568.［丁德贵，樊美珍，孟艳琼，李增智，夏成润，2007.应用球孢白僵菌菌条持续控制松褐天牛效果的分子评价.应用生态学报，18(3):564－568］

Ke YL，Tian WJ，Zhuang TY，Wang CX，Liang MF，2011.Advances in biological control and biogenic pesticides control of forest termites.Journal of Environmental Entomology，33(3):396－404.［柯云玲，田伟金，庄天勇，王春晓，梁梅芳，2011.林木白蚁的生物防治和生物源农药防治研究进展.环境昆虫学报，33(3):396－404］

Liang GH，Zhang HR，Li ZM，Liu T，2007.Studies on the species of flower thrips and its occurence in Dounan Chenggong county of Yunnan.Southwest China Journal of Agricultural Sciences，20(6):1291－1295.［梁贵红，张宏瑞，李自命，刘滔，2007.斗南花卉蓟马种类及发生研究.西南农业学报，20(6):1291－1295］

Lin HF，Wang PL，Zhang L，Yang XJ，Li SG，Zhou YW，2006.Growth of Beauveria brongniartii and two varieties of Metarhizium anisopliae and their virulence against white grubs.Chinese Journal of Biological Control，22(2):123－127.［林华峰，王萍莉，张磊，杨新军，李世广，周义文，2006.布氏白僵菌和金龟子绿僵菌两变种的生长性状及其对蛴螬的毒力测定.中国生物防治，22(2):123－127］

Luo C，Ying SH，Feng MG，2011.Selection and formulation of a Beauveria bassiana Strain with high virulence towards Spodoptera litura(Lepidoptera:Noctuidae).Chinese Journal of Biological Control，27(2):188－196.［罗成，应盛华，冯明光，2011.球孢白僵菌对斜纹夜蛾高毒菌株筛选与制剂的研发.中国生物防治学报，27(2):188－196］

Pan ZP，Li DS，Huang SH，2006.Susceptibility of Bactrocera dorsalis(Hendal) to the Hyphomycete Fungus Beauveria bassiana Vuillemin.Journal of Huazhong Agricultural University，25(5):518－519.［潘志萍，李敦松，黄少华，2006.球孢白僵菌对桔小实蝇致病力的测定.华中农业大学学报，25(5):518－519］

Pan ZP，Li DS，Zeng L，2008.Effects of environmental factors on the pathogenicity of Beauveria bassiana to Bactrocera dorsalis(Hendel).Journal of Environmental Entomology，30(1):13－17.［潘志萍，李敦松，曾玲，2008.环境因子对球孢白僵菌侵染桔小实蝇致病力的影响.环境昆虫学报，30(1):13－17］

Wang ST，Zhang H，Gao X，Lu LP，Wang LC，L iu XW，Wu GX，2009.Isolation，culture in vitro and virulence of Beauveria bassiana from naturally died Boettchrisca peregrine.Journal of Environmental Entomology，31(1):52－57.［王松田，张辉，高熹，录丽平，王凌超，刘小文，吴国星，2009.罹病棕尾别麻蝇体上白僵菌的分离、离体培养与毒力.环境昆虫学报，31(1):52－57］

Yang JH，Sun F，Liao KH，Wu WeJ，Pang H，Pang Y，2009.Bioassay of 4 strains of Beauveria bassiana against Solenopsis invicta.Journal of Environmental Entomology，31(1):46－51.［杨佳后，孙钒，廖坤宏，邬文静，庞虹，庞义，2009.4株球孢白僵菌对红火蚁毒力的生物测定.环境昆虫学报，31(1):46－51］

Yang X，Lian QX，Zhang XiP，Zhang FP，1994.Biological characteristics controll experiment of the thrips damaging banyans in Fujian Province.J.of Fujian Forestry Sci.and Tech.，21(2):50－55.［杨希，连巧霞，张晓萍，张芳平，1994.等福建榕树蓟马的生物学特性及防治实验.福建林业科技，21(2):50－55］

Yuan SY，Zhang HR，Kong Q，Li ZY，Luo DQ，Wang XL，Dong LL，2010.Detection of pathogenicity of Beauveria bassiana MZ060812 against Frankliniella occidentalis.Journal of Northwest A.＆ F.University(Nat.Sci.Ed.)，38(3):145－149.［袁盛勇，张宏瑞，孔琼，李正跃，骆弟乾，王学丽，董丽玲，2010.球孢白僵菌MZ060812 菌株对西花蓟马的致病性研究.西北农林科技大学学报(自然科学版)，38(3):145－149］

Yuan SY，Kong Q，Xue CL，Zhang HR，Tian XJ，Xiao C，2010.Measure of Virulence of Verticillium lecanii MZ041024 to Thrips palmi Karny.Journal of Huazhong Agricultural University，29(5):560－563.［袁盛勇，孔琼，薛春丽，张宏瑞，田学军，肖春，2010.蜡蚧轮枝菌MZ041024 菌株对棕榈蓟马的毒力测定.华中农业大学学报，29(5):560－563］

Yuan SY，Kong Q，Zhang HR，Wang P，Sun SQ，2011.Detection on the virulence northern of horticulture Verticillium lecanii MZ041024 against adult and nymph of Frankliniellao ccidentalis(pergrande).Northern Horticulture，(10):131－133.［袁盛勇，孔琼，张宏瑞，王平，孙士卿，2011.蜡蚧轮枝菌对西花蓟马成虫和若虫的毒力测定.北方园艺，(10):131－133］

Zhao GF，Chen WY，2008.Biological characteristics and control of Gynaikothrips ficorum.Guangxi Agricultural Sciences，39(4):493－496.［赵国富，陈伟洋，2008.榕母管蓟马生物学特性及防治措施.广西农业科学，39(4):493－496］

Pu ZL，1997.Pests of Biological Control.Beijing:Science Press.127－129.［蒲蛰龙，1997.害虫的生物防治.北京:科学出版社.127－129］

Zhang LJ，Shen DR，Sun YX，Li ZY，Zhang HR，2012.Analysis of genetic differentiation among geographic populations of Gynaikothrips ficorum(Marchal)(Thysanoptera:Phlaeothripidae)inYunnan southwestern China，based on mtDNA COI gene sequences.Acta Entomologica Sinica，55(2):199－207.［张利娟，沈登荣，孙跃先，李正跃，张宏瑞，2012.基于mtDNA COI 基因序列的云南榕母管蓟马不同地理种群的遗传分化分析.昆虫学报，55(2):199－207］

Zhang ZD，Li GZ，Wang J，Feng BL，2010.Application of integrated bio－control methods for Asian corn borer.Chinese Bulletin of Entomology，47(6):1208－1211.［张振铎，李国忠，王江，凤佰良，2010.玉米螟生物防治措施的复合应用研究.昆虫知识，47(6):1208－1211］