HPLC法测定清脑止痛胶囊中阿魏酸含量的研究

孙亚玲 贾敬全 曾 艳 孙申国 吴 丹

（吉林敖东洮南药业股份有限公司，吉林 敖东 137000）

HPLC法测定清脑止痛胶囊中阿魏酸含量的研究

孙亚玲 贾敬全 曾 艳 孙申国 吴 丹

（吉林敖东洮南药业股份有限公司，吉林 敖东 137000）

目的 建立清脑止痛胶囊中阿魏酸的含量测定方法。方法 以Agilent Explise C18柱为色谱柱，乙腈、1%醋酸水为流动相梯度洗脱，检测波长320nm，HPLC法测定。结果 本法测定清脑止痛胶囊中阿魏酸线性范围为（0.2106～8.424）μg/mL，精密度、18h内稳定性、方法重现性良好，十批样品的测试平均含量2.83μg/粒。结论 本方法适用于清脑止痛胶囊中阿魏酸含量控制。

高效液相；含量测定；阿魏酸；清脑止痛胶囊

清脑止痛胶囊是2008年批准上市的中药6类新药，以川芎、藁本为主药，故笔者选择其有效成分阿魏酸作为含量控制指标，并进行了含量测定和相关方法学研究。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Agilent 1200型高效液相色谱仪（美国Agilent公司）；MS105型十万分之一电子天平（德国 METTLE公司）；HU10260B型超声仪（天津恒奥科技有限公司）。

1.2 药品及试剂

阿魏酸对照品（批号110773-200611，购自中国药品生物制品检定所）；Oasis HLB 200mg 6cc固相萃取柱（批号061A35324A，美国Waters公司）；清脑止痛胶囊（吉林敖东洮南药业股份有限公司）。乙腈、甲醇为色谱纯，水为纯水，其他试剂均为分析纯。

2 实验方法

2.1 色谱条件

色谱柱：Agilent Explise C18柱（5.0μm，250×4.6mm），流动相：乙腈为流动相A，1%醋酸水为流动相B，梯度洗脱：0～28 min，A∶B=13～87∶87～13；29～38 min，A∶B=87～100∶13～0；39～50 min，A∶B=100～13∶0～87。检测波长：320nm，柱温：30℃，流速：1.0mL/min。

2.2 对照品溶液的制备

取阿魏酸对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含2μg的溶液，即得。

2.3 供试品溶液的制备

取内容物适量，研细，精密称定2g，加入盐酸-水（1∶100）溶液25mL，置水浴中加热回流40分钟，滤过，精密量取续滤液2mL，转移至经活化过的固相萃取柱上（Waters Oasis HLB 200mg 6cc），用水及20%甲醇的盐酸-水（1∶100）溶液分别洗脱除杂，再用10mL80%甲醇的盐酸-水（1∶100）溶液洗脱，收集洗脱液，60℃水浴蒸干，残渣加80%甲醇的盐酸-水（1∶100）溶液溶解，转移至2mL量瓶中，加80%甲醇的盐酸-水（1∶100）溶液稀释，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

3 结 果

3.1 样品处理方法

依据《中国药典》2010年版一部中“川芎”、“藁本”、含量测定项下及参考文献[1,2]中阿魏酸含量测定方法，对样品前处理方法进行考察。结果阿魏酸含量较低，一步提取的前处理方法杂质较多，不能达到基线分离，调节酸碱萃取除杂的方法虽能除去部分杂质，但反复的酸碱调节有可能破坏阿魏酸结构，而且操作繁琐，容易造成损失影响回收率，故依据参考文献[3,4]，采用固相萃取的前处理方法对样品进行除杂和富集。

结果表明，固相萃取的前处理方法杂质干扰少，达到基线分离，且方法简单易操作，故确定为本研究的前处理方法。

3.2 系统适用性实验

在所选HPLC条件下，分离效果好，保留时间22.529min，理论塔板数按阿魏酸峰计算为15934，与相邻峰的分离度为2.06。

3.3 专属性试验

分别取对照品溶液、供试品溶液各10µL进样，结果表明两者相同保留时间有对应的色谱峰，峰形良好。结果见图1、2。

图1 阿魏酸对照品色谱图

图2 清脑止痛胶囊（批号20110801）样品色谱图

3.4 线性关系考察

将对照品贮备液用甲醇稀释为0.2106、0.421μg/mL、0.8424、2.106、4.212、8.424μg/mL，分别精密吸取10μL进样，以峰面积对质量进行回归，回归方程为：Y＝5482.3X-0.1797（r=0.9999），表明阿魏酸在0.2106～8.424μg/mL范围内线性关系良好。

3.5 稳定性试验

取本品（批号20110801）装量差异下的内容物适量，按前法处理。分别于0、2、4、6、8、10、12、14、16、18小时取供试品溶液10μL进样，峰面积40.0～42.3，均值40.8，RSD1.80%，表明供试品溶液在18h内基本稳定。

3.6 精密度试验

取本品（批号20110801）装量差异下的内容物适量，按前法处理。取供试品溶液10μL，连续测定6次，结果峰面积40.0～41.1，均值40.38，RSD为1.04%，表明进样精密度良好。

3.7 重复性试验

取本品（批号20110801）装量差异下的内容物适量，按前法处理。将供试品溶液、对照品溶液10μL进样，计算含量。结果均值4.18μg/粒（n=6），RSD1.49%，表明重复性良好。

3.8 回收率试验

取本品内容物适量，研细，取约1g，精密称定，平行6份，同时分别精密加入浓度为10.53μg/mL的阿魏酸对照品溶液，吸取供试品溶液、对照品溶液10μL进样，计算含量。结果表明，平均回收率为96.14%，RSD为0.62%。

3.9 样品测定

取本品十批，按照2的方法处理测定，阿魏酸平均含量为2.83μg/粒。见表1。

4 结 论

清脑止痛胶囊现有质量标准对仅对打粉药味的成分进行了含量控制，为此，选择非打粉药味开展含量测定方法的研究。方中非打粉药味涉及川芎、藁本、牛膝、熟地黄、蒺藜、枸杞子、香附、细辛等8味药材，其川芎和藁本占处方总量的21.4%，为处方中主药，考虑到《中国药典》2010年版一部“川芎”、“藁本”含量测定项下均以阿魏酸为指标成分，故试选择阿魏酸作为清脑止痛胶囊含量控制指标，对其进行了含量测定和相关方法学研究。

表1 清脑止痛胶囊中阿魏酸含量测定结果

试验结果表明，以Agilent Explise C18柱为色谱柱，以乙腈、1%醋酸水为流动相建立梯度洗脱的含量测定方法，该法专属性强、耐受性和重现性好，适用于清脑止痛胶囊中阿魏酸含量控制。

[1] 章泽恒,谭朝阳.HPLC法测定妇科十味胶囊中阿魏酸的含量[J].中国中医药信息杂志,2006,13(2):40.

[2] 许江,张庆,俞小陶.HPLC法测定活血止痛胶囊中阿魏酸的含量[J].广东药学院学报,2000,16(4):309.

[3] 孔亮,于志远,邹汉法,等.高效液相色谱与质谱联用分析测定川芎中有效成分阿魏酸与藁本内酯[J].分析化学,2004,32(11):1501.

[4] 陈雯,陈富超,李鹏,等.固相萃取-高效液相色谱法测定补虚颗粒阿魏酸含量[J].医药导报,2010,29(2):247.

R917

B

1671-8194（2013）26-0069-02