抽吸毒液对减轻家兔五步蛇伤毒性反应的干预作用

梁幼雅，徐雪

（广州中医药大学中药学院1、中药学教研室2，广东广州510006）

抽吸毒液对减轻家兔五步蛇伤毒性反应的干预作用

梁幼雅1，徐雪2

（广州中医药大学中药学院1、中药学教研室2，广东广州510006）

目的观察抽吸毒液对减轻家兔五步蛇伤毒性反应的干预作用并探讨其作用机理。方法雄性新西兰兔18只随机分为正常对照组、模型组和治疗组各6只，通过家兔大腿部皮下注射致死量的五步蛇毒建立五步蛇致伤模型。治疗组在皮下注射毒素后第5分钟用毒液抽吸器(Venom extractor kit)在注射处抽吸毒液。观察各组实验家兔在注射毒素前后的呼吸频率(RR)、心率(HR)，并测定凝血酶原时间(PT)、部分活化凝血酶时间(APTT)、纤维蛋白原(FIB)，同时观察采血后家兔的生存概率。结果模型组的PT、APTT与正常对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05，P＜0.01)；与模型组比较，治疗组的APTT显著延长(P＜0.01)，而各组FIB比较差异无统计学意义(P＞0.05)。在注射毒素后30 min，模型组的RR显著低于正常对照组(P＜0.05)，模型组RR极显著低于治疗组(P＜0.01)。与正常对照组比较，模型组和治疗组在注射后即刻HR显著上升(P＜0.01)；注射后30 min模型组的HR比正常对照组显著上升(P＜0.05)。结论五步蛇毒致伤现场及时抽吸毒液使家兔PT、APTT显著延长，RR及HR等生命体征得到显著改善，并能有效提高存活的概率，其机制可能与改善凝血功能、生命体征的作用相关。

抽吸毒液；五步蛇伤；毒性反应；家兔

在野外作业、探险、旅游及毒蛇养殖中，毒蛇咬伤事件时有发生，蛇伤已是国内外临床上常见的急重症。蛇毒可对机体凝血机制、心血管系统和神经系统等多个系统产生毒性作用，甚至导致多器官功能衰竭[1]。蛇伤在处理上极为棘手，并很可能因未能得到及时有效的救治而危及生命，其中五步蛇就是常见的剧毒蛇之一，其毒素尤其对机体的凝血功能作用显著[2]。目前治疗蛇伤的药物种类很多，但是在蛇伤早期能否做及时吸出毒液是减少损害的关键。因此，本文利用五步蛇毒致伤家兔模型，以观察抽吸毒液对减轻家兔五步蛇伤毒性反应的干预作用，并探讨其作用机理。现将本次研究结果报道如下：

1 材料与方法

1.1 试剂和仪器五步蛇毒冻干粉(购自南昌俊阳实业有限公司，批号：20121010)；毒液抽吸器(Venom extractor kit，由广州市富宏医疗用品有限公司提供，产品代码：FS-166BX)；全自动凝血分析仪(广东省中医院检验科，sysmex_CA7000)；心电仪(泰盟科技，BL-420E+生物机能实验系统)。

1.2 动物及分组KM小鼠15只，体重18～22 g；新西兰兔30只，体重1.8～2.2 kg，雄性，购自广州中医药大学实验动物中心[合格证号：SCXK(粤) 2008-0020]。随机分为正常对照组、模型组、治疗组三组，每组6只。正常对照组皮下注射0.5 ml生理盐水；模型组皮下注射致死量五步蛇毒0.5 ml；治疗组皮下注射致死量五步蛇毒0.5 ml+抽吸毒液。

1.3 造模根据皮下注射五步蛇毒小鼠致死剂量为100 mg/kg，推算家兔皮下注射五步蛇毒致死剂量约为36 mg/kg。在家兔大腿处注射0.5 ml致死剂量的五步蛇毒模拟五步蛇伤。

1.4 实验方法耳缘静脉注射各组新西兰兔10%水合氯醛麻醉，脱去四肢膝盖处、右后肢股、颈部兔毛。除治疗组在注射后第5分钟于近心端且距伤口5 cm左右处用止血带结扎受伤肢体、每隔10 min松开止血带2～3 min同时用毒液抽吸器在受伤处反复抽吸10～15 min直至有鲜血吸出进行吸毒操作外，各组都在皮下注射前后5 min内，及皮下注射后第30分钟记录呼吸频率(RR)、测心电图并记录心率(HR)，并在皮下注射后第30分钟进行颈动脉采血置于枸椽酸钠抗凝采血管中低温保存并尽快送检，测定凝血酶原时间(PT)、部分活化凝血酶时间(APTT)、纤维蛋白原(FIB)。观察采血后家兔的生存概率。

1.5 统计学方法采用SPSS17.0统计软件单因素方差分析(ANOVA)法进行分析，实验结果用均数±标准差表示，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组PT、APTT、FIB比较模型组的PT、APTT与正常对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05，P＜0.01)。与模型组比较，治疗组的APTT显著延长(P＜0.01)。各组FIB比较差异无统计学意义(P＞0.05)，见表1。

表1 各组PT、APTT、FIB的比较(

表1 各组PT、APTT、FIB的比较(

注：与正常对照组比较，aP＜0.05，bP＜0.01；与模型组比较，cP＜0.05，dP＜0.01。

组别正常对照组模型组治疗组FIB(g/L) 2.5±0.6 2.0±0.6 2.2±0.6 PT(s) 8.3±0.9 7.5±0.2a8.2±0.3cAPTT(s) 18.5±1.8 15.4±0.2b18.6±2.5d

2.2 各组呼吸频率比较正常对照组与模型组、治疗组注射后即刻RR比较差异无统计学意义(P＞0.05)；注射后30 min，模型组的RR低于正常组(P＜0.05)，模型组RR显著低于治疗组(P＜0.01)，见表2。

2.3 各组心率比较与正常对照组比较，模型组和实验组的HR显著上升(P＜0.01)。注射后30 min模型组的HR比正常对照组显著上升(P＜0.05)，模型组的HR与治疗组HR比较差异无统计学意义(P＞0.05)，见表3。

表2 各组呼吸频率(RR)的比较(=6，次/min)

表2 各组呼吸频率(RR)的比较(=6，次/min)

注：与正常对照组比较，aP＜0.05，bP＜0.01。

正常对照组模型组治疗组75.5±8.6 60.7±6a76.8±3.9b73.2±8.2 71.5±13.3 78±13.3 76.2±6.3 77.3±10.6 81.7±9.5

表3 各组心率(HR)的比较(，n=6，次/min)

表3 各组心率(HR)的比较(，n=6，次/min)

注：与正常对照组比较，aP＜0.05，bP＜0.01。

正常对照组模型组治疗组283.3±16.9 325±12.5a316.7±27.2 282.8±22.4 305.2±10.4 309.5±31.2 283.7±21.7 338.5±18.4b339.3±40.7b

3 讨论

五步蛇毒是毒蛇的毒腺中分泌出来的一类含有多种酶类的毒性蛋白质，是毒蛇咬伤后引起中毒的毒性物质。五步蛇毒按毒理学分类可分为神经毒素、血循毒素以及各种毒素、酶等[3]。本次研究所用的五步蛇毒是血循毒，主要包括出血毒素、溶血毒素、促凝血及抗凝血因子、心脏毒素和多种酶类，能产生多方面的毒性作用，主要对血液凝固系统造成很强的毒性作用，其类凝血酶(TLE)成分进入血液后直接作用于纤维蛋白原，促使其变为纤维蛋白而加速血液凝固，造成弥漫性血管内凝血(DIC)，继而发生纤维蛋白溶解，导致广泛出血。同时五步蛇毒对心脏产生毒性，一是由于出血毒素导致多脏器出血，当血容量严重不足时即可引起或加重休克、DIC及心肌损害，二是由于各种酶类造成出血、水肿、凝血机制失调等直接或间接影响心血管系统功能，并且其心脏毒素对各型细胞的结构及功能有一定的损伤，最后引起血液循环功能、肾功能障碍而致死[4-5]。以上在临床上则表现为机体凝血机制失调，心悸、气促、胸闷等心肌受损或心衰的表现；心电图改变及心率改变等。

本实验结果显示，五步蛇毒导致出现短暂的高凝血期，使PT显著缩短、APTT极显著缩短，FIB变化不显著，经过及时的吸毒操作使PT、APTT显著延长；五步蛇毒使呼吸逐渐抑制甚至停止，在注射后短时间内呼吸变化不显著，但是在注射后30 min模型组的RR显著慢于正常对照组，而治疗组的RR极显著快于模型组；同时五步蛇毒可使HR加快，在注射后即刻HR加快，在注射后30 min模型组的HR显著快于正常对照组，而治疗组比模型组的HR稍慢但差异无统计学意义。在实验结束2 h内模型组有4只兔子死亡，同时观察到治疗组动物伤口的瘀青、红肿等体征明显轻于模型组。结果表明治疗组家兔及时有效地吸出五步蛇毒对其凝血功能、生命体征及生存概率都有显著的改善。

五步蛇毒成分复杂，毒性剧烈。临床上，毒蛇致伤不仅对机体凝血机制产生破坏而导致机体广泛出血，而且毒液一般经6～8 h可扩散到头部、颈部、四肢和腰背部，出现颤栗，体温升高，心动加快，呼吸困难，抽搐等症状。如果咬伤后4 h内得不到有效治疗，则最后因心力衰竭或休克死亡[1]。可见五步蛇毒进入人体后对机体产生严重损害且来势急、发展快，因此被此类毒蛇咬伤后，及时的救治至关重要。已有报道蛇伤后及时地拔罐抽吸毒液可有效降低毒素在体内的浓度，贯通血管，为血液和毒素排出体外创造条件[6]，是一个有效的现场急救方法。本动物实验也表明，毒蛇致伤机体后及时有效地吸出蛇毒能有效地干预蛇毒对机体凝血机制、生命体征的破坏，达到改善动物机体凝血功能、生命体征的作用，同时提高动物的生存概率。

[1]刘德明.五步蛇毒及其生化效应[J].生物学教学,2011,36(6):65-67.

[2]胡建国.尖吻蝮五步蛇毒研究进展[J].蛇志,2012,24(1):56-57.

[3]应雪红,王永安,王汉斌.毒蛇咬伤的诊断和治疗进展[J].中国医刊,2007,42(7):24-28.

[4]贾艳,胡延春,张乃生,等.五步蛇毒的毒性成分及其应用研究[J].蛇志,2004,16(2):23-32.

[5]李清平,周文忠,刘治昆,等.五步蛇咬伤临床研究进展[J].蛇志, 2012,24(1):58-61.

[6]卜沈莲.蝮蛇伤拔罐疗法23例体会[J].中华实用医药杂志,2005, 8(15):23-24.

Effect of extracting venom in lightening the toxicity of Agkistrodon acutus injury in rabbits.

LIANG You-ya1,XU Xue2.School of Chinese Herbal Medicine1,Department of Chinese Herbal Medicine2,Guangzhou University of Chinese Medicine,Guangzhou 510006,Guangdong,CHINA

ObjectiveTo observe the intervention effect of extracting venom in lightening the toxicity of Agkistrodon acutus injury in rabbits,and to study the mechanism.MethodsEighteen male New Zealand rabbits were divided into three groups:normal control group,model group,treatment group.Rabbits were injected with snake venom to simulate the Agkistrodon acutus injury.Treatment group applied Venom extractor kit to aspirate repeatedly in the injection region 5 minutes after injection.And then RR,HR,PT,APTT,FIB and survival conditions were observed. ResultsThe PT,APTT of the model group were significantly different from the normal control group(P＜0.05,P＜0.01),and the APTT of the treatment group was significantly longer than that of the model group(P＜0.01).Differences in FIB between the three groups were not significant(P＞0.05).Thirty minutes after injection,the RR of the model group was significantly lower than that of normal control group(P＜0.05),and that of normal model group was significantly lower than the treatment group(P＜0.01).Compared with the normal control group,the HR increased significantly in the model group and treatment group immediately after injection(P＜0.01).HR of the model group were significantly higher than that of the normal control group 30 minutes after injection(P＜0.05).ConclusionTimely extracting venom at the scene of the injury can significantly lengthen the PT,APTT,improve RR and HR,and increase the chances of survival. The mechanism may be related to the improvements in the function of blood coagulation and the action of vital signs.

Extracting venom;Agkistrodon acutus injury;Toxicity;Rabbits

R-332

A

1003—6350(2013)19—2813—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2013.19.1177

2013-03-28)

梁幼雅。E-mail：grace_liang2003@yahoo.com.cn