过敏性紫癜肾炎患儿IgA1异常糖基化的研究

刘 云，徐汉云

（江西省儿童医院儿内科，南昌 330006）

过敏性紫癜（HSP）是儿童时期最常见的血管炎之一，以非血小板减少性紫癜、关节炎或关节痛、腹痛、胃肠道出血及肾炎为主要表现，肾脏是否受累是HSP患儿预后的关键因素。目前HSP发病机制不清楚，主要与体液免疫异常、凝血机制异常、遗传免疫因素异常等有关［1］。有研究［2］表明，HSP 患者血中IgA1明显增高，而皮肤、肾脏及消化道黏膜中均以IgA1沉积为主，推测黏膜免疫系统对进入人体内的抗原产生免疫反应而使IgA1增多是HSP的发病机制。本研究主要探讨IgA1的异常糖基化是否与过敏性紫癜性肾炎（HSPN）发病有关。

1 对象与方法

1.1 研究对象

选择2011年2月至2012年3月在江西省儿童医院住院治疗的过敏性紫癜肾炎患儿20例 （过敏性紫癜肾炎组），男 15例，女 5例，年龄（8.39±2.99）岁，病程（10±3.60）d。 临床表现:双下肢对称压之不褪色红色皮疹，镜下检查有血尿和（或）蛋白尿，经肾活检确诊为过敏性紫癜肾炎。另选择在本院体检的健康儿童20例（对照组），男13例，女7例，年龄（7.6±3.1）岁。近期无呼吸道、胃肠道等黏膜感染史，无血尿及蛋白尿、肝肾及系统性疾病史。

1.2 IgA1低糖基化水平检测方法

1.2.1 标本采集

清晨空腹抽取静脉血3 mL置干燥管，以3500 r·min-1离心10 min分离血清，分装后置-70℃冰箱保存待测,不反复冻融。

1.2.2 血清IgA1低糖基化水平测定

蚕豆凝集素（VVL）亲和 ELIsA测定。VVL与血清IgA1的结合力，间接反映血清IgA1糖基化程度，结合力增高说明IgA1呈低糖基化，说明存在异常糖基化IgA1。具体步骤:将VVL（美国Vector公司）稀释至0.5 mg·L-1，包被酶标板，4℃冰箱过夜洗涤，以10 g·L-1牛血清清蛋白在37℃封闭1 h洗涤。每孔稀释待测血清50 μL，空白对照为10 g·L-1牛血清清蛋白，室温下孵育1 h洗涤。加入鼠抗人IgA1单克隆抗体，每孔加入稀释后的酶标抗体50 μL，室温下孵育1 h洗涤，最后加入酶作用底物溶液，置室温暗处显色30 min，每孔再加入硫酸中止酶促反应。用酶标仪在450 nm波长处测定吸光度（A），用单位U表示。

1.3 统计学方法

2 结果

过敏性紫癜性肾炎组异常糖基化的IgA1为（0.35±0.06）U，对照组异常糖基化的 IgA1 为（0.12±0.07）U，过敏性紫癜性肾炎组异常糖基化的IgA1明显高于正常组（t=3.658，P＜0.05）。

3 讨论

正常IgA1分子O-连接糖基最基本的结构是N-乙酞半乳糖胺（GalNAc），以O-连接方式与肤骨架上的丝氨酸和苏氨酸残基相连。在此基础上N-乙酞半乳糖胺可通过β1，3半乳糖转移酶在其末端加上半乳糖基，该糖链可通过α2,3唾液酸转移酶或α2,6唾液酸转移酶进一步连接上1个或2个带有负电荷的唾液酸。IgA1分子铰链区β1，3半乳糖转移酶活性降低可能引起IgA1分子O-糖基化异常［3］。 有研究［4］表明，异常糖基化的 IgA1 分子与去唾液酸糖蛋白受体（ASGPR）结合减少，不能被肝细胞识别、摄取和清除，使得大量异常糖基化的IgA1沉积；异常糖基化的IgA1有自身聚集或与IgG形成的抗原抗体复合物的倾向，直接与铰链区肽结合，免疫复合物沉积在相应的脏器，造成脏器损伤。异常糖基化的IgA1在体外实验中对细胞外基质成分亲和力增加,如纤连素、Ⅳ胶原等增加了系膜捕获和肾小球沉积，提示IgA1异常糖基化可能与肾脏损伤有关［5］。有研究［6］表明，IgA 肾病的患者，IgA1 分子存在糖基化的异常。本研究通过测定IgA1与VVL的结合力，间接反映IgA1的半乳糖水平，结合力越高说明IgA1半乳糖水平越低，说明存在异常糖基化IgA1。正常儿童体内血清IgA1也可与VVL结合，因为IgA1结构正常，所以与VVL的结合力是不高的。本研究中，过敏性紫癜肾炎组患儿血清IgA1与VVL的结合力高，说明过敏性紫癜肾炎患儿血清IgA1分子上的N-乙酰半乳糖胺暴露多，IgA1半乳糖水平低。Lau等［7］研究提示，异常糖基化IgA1与HSPN发病有关。

HSP患儿预后的关键因素是肾脏是否有损害，可是目前仍没有很好的方法早期提示HSP患儿肾脏是否会损害，异常糖基化IgA1与HSPN发病有关，但是异常糖基化IgA1的检测能否起到一个预测肾脏损害的早期预测因子呢，这仍需要更加系统、详细、大样本的研究。

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