HPLC法测定菜花中的辛硫磷残留的研究

孙金旭，朱会霞，张彩凤，刘美竹，孙欣，李晓萌，刘佳

（衡水学院生命科学学院，河北衡水 053000）

HPLC法测定菜花中的辛硫磷残留的研究

孙金旭，朱会霞，张彩凤，刘美竹，孙欣，李晓萌，刘佳

（衡水学院生命科学学院，河北衡水 053000）

摘 要：建立了HPLC法测定菜花中农药残留辛硫磷含量的方法，研究表明：此方法测定农药残留辛硫磷含量重复性试验最大标准偏差为0.79%，峰面积与辛硫磷标品线性关系良好，标准曲线方程为y=46.768 2x-0.716 7（R=0.999 8），加标回收率在98.12%～102.28%之间，经超声处理样品测定效果明显好于未经超声处理样品，此方法用于菜花中辛硫磷含量准确、可行；经测定菜花中的辛硫磷农药残留为含量25.62 μg/kg，符合国家标准（蔬菜中辛硫磷含量≤0.05 mg/kg）要求。

关键词：HPLC；辛硫磷；农残；菜花

辛硫磷杀虫谱广，击倒力强，以触杀和胃毒作用为主，无内吸作用，对磷翅目幼虫很有效。适合于防治地下害虫。对危害花生、小麦、水稻、棉花、玉米、果树、蔬菜、桑、茶等作物的多种鳞翅目害虫的幼虫有良好的作用效果，对虫卵也有一定的杀伤作用。也适于防治仓库和卫生害虫，因此，辛硫磷在水果蔬菜中的应用较广[1-2]。菜花是蔬菜的一种，属于甘蓝的变种，菜花为十字花科植物，菜花呈肉质块状，整体很像一个大花朵，色白美观。花椰菜肉质细嫩，味甘鲜美，食用后很容易消化吸收，因此做为蔬菜备受人们的青睐，菜花生长过程中,为避免受多种病虫害的影响，要喷洒多种农药，其中以辛硫磷喷洒最多。本研究建立了高效液相色谱法测定菜花中辛硫磷农残的方法，以期快速、准确的对其进行测定。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

辛硫磷标准品：购于国家标准物质网（浓度为100 μg/mL）；甲醇、乙腈（色谱级）、无水硫酸钠：购于潍坊中汇化工有限公司。

1.2 仪器

Agilent1100高效液相色谱：美国；EV311旋蒸仪：莱伯泰科有限公司；电子天平：上海田宫称重制造有限公司；CTG-1超声波提取仪：济宁恒盛超声机械有限公司。

1.3 样品等处理方法

1.3.1 辛硫磷标准液处理

准确的移取辛硫磷标准品5 mL，放于容积为25 mL的棕色容量瓶中，甲醇稀释至刻度，即配制成浓度为20 μg/mL的标准溶液，4℃冷藏备用。

1.3.2 菜花样品处理方法

称取一定量的菜花样品，超声处理2次，每次处理2 min，将处理后的菜花用组织捣碎机捣碎混匀，称取5 g（精确至0.01 g）样品于100 mL高型烧杯中，每次加入15 mL乙腈，高速匀浆3 min，提取2次，提取液经装有无水硫酸钠滤纸过滤，残渣用15 mL乙腈洗涤，合并滤液于梨形瓶中。用旋转蒸发器在35℃水浴减压蒸馏至近干，氮气吹干，定量加入1 mL流动相溶解残渣，漩涡混匀，0.45 μm的微孔滤膜过滤供液相色谱分析。

1.4 HPLC测定条件[3-4]

HPLC法测定菜花中辛硫磷含量条件为：色谱柱ZORBAX SB-C18不锈钢柱（150 mm×3.0 mm，5 μm）；流动相：甲醇-水溶液（体积比为7∶3）；流速0.3 mL/min；进样量10 μL外标法定量；柱温30℃；检测波长待定。

2 结果与讨论

2.1 测定波长的确定

为确定测定菜花中辛硫磷农药残留高效液相色谱测定波长，以辛硫磷标准品为测定样品，紫外分光光度法进行其在200 nm～500 nm下的全波长扫描，扫描结果如图1所示。

图1 辛硫磷紫外全波长扫描结果Fig.1 The full wavelengh scanner result for phoxim

如图1所示，辛硫磷标准品在200 nm～500nm下紫外扫描后，在285 nm处有唯一最大吸收峰，表明辛硫磷紫外测定的最适波长为285 nm。

2.2 标准品液相色谱图

辛硫磷标准品HPLC测定条件为：色谱柱ZORBAX SB-C18不锈钢柱（150 mm×3.0 mm i.d.，5 μm）；流动相：甲醇-水溶液（体积比为7∶3）；流速0.3 mL/min；进样量10μL外标法定量；柱温30℃；检测波长285nm。此条件下，辛硫磷标准品的测定结果如图2所示。

图2 辛硫磷标品HPLC色谱图Fig.2 The HPLC spectra for Phoxim standard

由图2可知，辛硫磷标准品在设定的测定条件下，在10.352 min处有单一峰，表明该测定条件适宜于辛硫磷的测定。

2.3 标准曲线制备及线性范围考察

准确称取一定量的辛硫磷标准品，25 mL的棕色容量瓶中，甲醇稀释至刻度，分别配置成浓度分别为0.2、0.4、0.6、2.0、4.0、8.0、10.0 μg/mL 的标准溶液，此 7份标准液在上述色谱条件下进样测定，以峰面积为纵坐标，以辛硫磷浓度为横坐标进行回归，得到线性回归方程为 y=46.768 2x-0.716 7（R=0.999 8），该回归方程在 1 μg～100 μg的范围内，线性关系良好。

2.4 重复性试验

精密称取同一份经处理后辛硫磷标准品，均匀的分为5份，经HPLC测定其中辛硫磷含量，计算平均值及RSD值，结果如表1所示。

表1 重复性试验Table 1 Result of repetitive test

同一份辛硫磷标准品分5次进样后，其RSD值为0.79%，表明该方法的重复性均达到分析的要求。

2.5 回收率试验

取经处理的菜花后，平均分成3份，经处理后，分别测定辛硫磷含量，分别取辛硫磷标准品配置成不同浓度，添加入处理液中，经过滤膜过滤后分别测定辛硫磷含量，计算回收率，结果如表2所示。

由表2可知，经加标后，辛硫磷的回收率在98.12%～102.28%之间，表明回收良好此方法适宜于菜花中辛硫磷含量的测定。

表2 回收率试验Table 2 Recovery rates

2.6 菜花中辛硫磷含量测定

因菜花中的化学成分较为复杂，其有机溶剂提取液中的化学成分较多，影响农药残留测定较大，有关文献报道，在样品处理时经微波或超声波处理会很大程度的避免其它物质对农药残留测定的影响[5]，菜花样品经超声波处理前后液相色谱图如图3、图4所示。

图3 未经超声菜花处理物液相色谱图Fig.3 The HPLC spectra for the no ultrasonic processing group

图4 经超声处理后菜花处理物液相色谱图Fig.4 The HPLC spectra for the ultrasonic processing group

由图3、图4的样品经超声波处理前后液相色谱图可以看出，未经超声处理的菜花处理物，物质含量及种类较多，各物质之间峰之间不能很好的分开，各物质峰之间有较大的影响，经超声处理后的菜花处理物，物质较少，物质之间分开效果较好，各物质均能独立成峰，且由出峰时间判断含有欲测定的农药残留辛硫磷，表明经超声处理有利于菜花中辛硫磷农药残留的测定。

精确称取菜花样品5.00 g，超声处理后甲醇定容为1 mL，进样测定辛硫磷含量，结果利用该方法测定得出辛硫磷含量为25.62 μg/kg，符合国家标准（蔬菜中辛硫磷含量≤0.05 mg/kg）要求。

3 结论

利用HPLC法测定菜花中辛硫磷农药残留，测定条件：色谱柱ZORBAX SB-C18不锈钢柱（150 mm×3.0 mm，5 μm）；流动相：甲醇-水溶液（体积比为 7∶3）；流速0.0.3 mL/min；进样量10 μL外标法定量；柱温 30℃；检测波285nm。研究表明：此方法测定农药残留辛硫磷含量重复性试验最大标准偏差为0.79%，峰面积与辛硫磷标品线性关系良好，标准曲线方程为y=46.768 2x-0.716 7（R=0.999 8），加标回收率在 98.12%～102.28%之间，经超声处理样品测定效果明显好于未经超声处理样品，此方法用于菜花中辛硫磷含量准确、可行；经测定菜花中的辛硫磷农药残留为含量25.62 μg/kg，符合国家标准（蔬菜中辛硫磷含量≤0.05 mg/kg）要求。

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[1]贺敏,戴荣彩,余平中,等.玉米中辛硫磷残留的高效液相色谱方法研究[J].农药科学与管理,2007,24(10):46-48

[2]侯毅,靳然,郝赤,等.高效氯氰菊酯与辛硫磷混配对菜青虫的增效作用测定[J].山东农业大学学报,2007,28(4):72-75

[3]刘茹,陈建锋,何俊,等.辛硫磷对大鼠卵巢抗氧化系统功能的影响[J].山东农业大学学报,2004,31(2):78-81

[4]于建垒,宋国春,李瑞娟,等.辛硫磷、甲基异柳磷在花生中的残留及安全使用评价[J].农药,2010,33(9):18-22

[5]周宏琛,王勇,闫秋成,等.高效液相色谱法测定大蒜中辛硫磷残留[J].食品科学,2006,27(6):192-195

Determination of Phoxim in Cauliflower by HPLC

SUN Jin-xu，ZHU Hui-xia，ZHANG Cai-feng，LIU Mei-zhu，SUN Xin，LI Xiao-meng，LIU Jia
（Department of Biology Heng shui College ，Heng shui 053000，He bei，China）

Abstract：HPLC determination method for the determination of Phoxim in Cauliflower was established.The result showed that the maximum standard deviation of cholesterol content is 0.79%under this this method for determination and cholesterol content displayed an excellent linear relationship，the standard curve equation was y=46.768 2x-0.716 7（R=0.999 8）.The spike recoveries for cholesterol were between 98.12%and 102.28%.The results show that the ultrasonic processing group felt much better than the group，the method was feasibility and accurate for using to determine phoxim content in Cauliflower，the average contents of phoxim content in Cauliflower is 25.62 μg/kg by HPLC determination.The result is accord with national level（phoxim in vegetable content≤ 0.05 mg/kg）.

Key words：HPLC；phoxim；pesticides residuein；Cauliflower

DOI：10.3969/j.issn.1005-6521.2013.13.028

衡水学院大学生创新课题重点项目（2013038）

孙金旭（1975—），男（汉），副教授，博士，主要从事食品科学、发酵工程、微生物等方面的研究。

2013-01-22