壮药红鱼眼三萜类成分镇痛和抗炎活性实验研究＊

黄彬彬 ，马健雄

(1.广西壮族自治区桂林市第二人民医院药剂科，广西 桂林 541001;2.广西医科大学，广西 南宁 530021;3.广西金海堂药业有限责任公司新药研发中心，广西 南宁 530313)

红鱼眼又名龙眼睛、烂头钵，为大戟科植物无毛龙眼睛 Phyllanthus reticulatus Poir.var.glaberMueU.Arg.的茎、叶，为广西特色药材，收载于广西中药材标准[1]，具有祛风活血、散瘀消肿等功效，壮族医药中常用于治疗急慢性肝炎及类风湿性关节炎等[2]。笔者的前期实验研究发现，红鱼眼含有三萜等成分[3－5]。目前尚未见有关该药材活性成分抗炎作用的报道。为此，现对红鱼眼三萜类成分的镇痛和抗炎作用进行研究，为该药材的深度开发提供参考。

1 仪器与材料

旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂);TV－1810型紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司);电热恒温水浴锅(北京医疗设备厂有限责任公司);EL204型电子分析天平(梅特勒－托利多仪器上海有限公司)。二甲苯(北京长海化工厂，批号为20080530);醋酸(天津市泰兴化工有限公司，批号为20091203);延胡索乙素(中国药品生物制品检定所，批号为110726－200409);地塞米松(长春长红制药厂，批号为20100419);伊文思蓝(国药集团化学试剂有限公司，批号为20090913);其他试剂均为分析纯。红鱼眼采自广西南宁市郊，并经广西中医药研究院刘步鸣教授鉴定。昆明种小鼠，由广西医科大学实验动物中心提供，SPF级，动物合格证号为SCXK桂2009－0002。

2 方法与结果

2.1 药物制备

取红鱼眼药材粗粉，用适量90%乙醇浸泡过夜，加90%乙醇至10倍量，在70℃回流温度下提取2次，第1次1.5h，第2次1h，合并提取液，减压浓缩至无醇味，所得稠膏用乙酸乙酯－水(1∶1)萃取3次，合并萃取液放置过夜，取有机层浓缩除去溶剂，用蒸馏水适当加热溶解，配制成相当于每1mL含药材2 g的药液，备用。所制得样品经系统预试验[6]，显现出三萜的性质，已对该植物进行深入化学成分研究，通过现代光谱学和波谱学知识鉴定了其中的三萜化合物[3－4]。

2.2 镇痛试验[7]

取昆明种小鼠50只，雌雄各半，称重标记，随机分为生理盐水(NS)组、延胡索乙素组和红鱼眼高、中、低剂量组，每组10只，灌胃给药，每日1次，连续给药7 d。末次给药30min后，向各鼠腹腔注射0.6% 醋酸溶液0.2mL(用前配制)。观察并记录注射醋酸溶液后20 min内出现扭体反应的次数及时间，以评价药物的镇痛作用。结果见表1。可见，延胡索乙素组和红鱼眼高、中、低剂量组与生理盐水组抑制率比较有显著性差异(P＜0.05或P＜0.01)，红鱼眼高剂量组镇痛效果与延胡索乙素组相当。

表1 红鱼眼三萜类成分镇痛试验结果(±s)

表1 红鱼眼三萜类成分镇痛试验结果(±s)

组别生理盐水延胡索乙素组红鱼眼高剂量组红鱼眼中剂量组红鱼眼低剂量组动物数10 10 10 10 10给药量20mL/kg 50mg/kg 50 g/kg 30 g/kg 10 g/kg扭体次数26.3 ± 5.9 5.6 ± 3.7 6.3 ± 2.1 7.8 ± 2.3 9.2 ± 2.0抑制率(%)78.70 76.05 70.34 65.02 P＜ 0.01＜ 0.01＜ 0.05＜ 0.05

2.3 抗炎试验[7－8]

二甲苯致小鼠耳肿胀试验:取昆明种小鼠50只，雌雄各半，每组10只，随机分为5组，即空白对照组(A组)，地塞米松组(B组)，红鱼眼高、中、低剂量组(C1，C2，C3组)。每只小鼠灌胃给药，每日1次，连续给药7 d。于末次给药时，分别将每只小鼠左耳外侧均匀涂抹二甲苯0.05mL，右耳不涂二甲苯，4 h后脱颈处死，用直径8mm的打孔器在同一部位取下耳片，称取质量，用左右耳片质量差值来表示肿胀程度。结果见表2。可见，与A组相比，C1组对小鼠耳廓肿胀程度有显著抑制作用(P＜0.05)，且与B组相当(P＞0.05)，C3组也有一定的抑制作用。这表明在较高剂量时，红鱼眼三萜类成分与地塞米松抗炎作用相当。

表2 红鱼眼三萜类成分抗炎试验结果(± s，n=10)

表2 红鱼眼三萜类成分抗炎试验结果(± s，n=10)

二甲苯致小鼠耳廓肿胀试验 醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性影响试验组别 药物 给药量A组B组C1组C2组C3组生理盐水地塞米松红鱼眼三萜红鱼眼三萜红鱼眼三萜20mL/kg 20mg/kg 50 g/kg 30 g/kg 10 g/kg肿胀度(mg/g)18.32 ± 2.7 9.73 ± 5.62 10.25 ± 1.18 12.26 ± 1.13 15.14 ± 2.22抑制率(%)46.89 44.05 33.08 17.36 P＜ 0.05＜ 0.05 A值0.402 ± 0.028 0.298 ± 0.012 0.304 ± 0.036 0.329 ± 0.046 0.350 ± 0.052抑制率(%)25.87 24.38 18.16 12.94 P＜ 0.05＜ 0.05

醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性影响试验:取昆明种小鼠50只，动物分组方法同二甲苯致小鼠耳肿胀试验项。每只小鼠灌胃给药，每日1次，连续给药7 d，于末次给药后1 h，按10mL/kg尾静脉注射0.5%伊文思蓝生理盐水溶液，同时腹腔注射0.6%醋酸溶液10mL/kg，20min后处死，用5mL生理盐水冲洗腹腔，冲洗液以2 000 r/min离心15min，取适量上清液，在590 nm波长处测定吸光度。抗炎作用以伊文思蓝染料渗出量来表示，染料渗出量越多，其吸光度(A)值越大，表明其血管通透性增加，抗炎作用越低。结果见表2。与A组相比，C1组伊文思蓝渗出量显著下降(P＜0.05)，且与B组相当(P＞0.05)，说明红鱼眼三萜类成分能显著抑制醋酸致小鼠毛细血管通透性增加。这提示，红鱼眼三萜类成分能通过抑制毛细血管通透性增加而达到抗炎作用。

3 讨论

红鱼眼临床应用能明显缓解类风湿关节炎的红、肿、热等症状。本研究结果表明，红鱼眼三萜类成分具有一定的镇痛和抗炎作用，说明其传统功效与现代药理学研究结果一致。因此推断，红鱼眼三萜类成分可能是该药材镇痛、抗炎作用的活性成分。类风湿性关节炎是临床常见病，将红鱼眼开发成为有效的抗类风湿关节炎药物或功能性食品，具有很大的市场潜力。下一步，将开展其抗炎活性单体成分的筛选工作。

[1]广西卫生厅.广西中药材标准[M].南宁:广西科学技术出版社，1990:52.

[2]广西壮族自治区革命委员会卫生局.广西本草选编(下册)[M].南宁:广西人民出版社，1974:1 588.

[3]Ma JX，Lan MS，Qu SJ，etal.Arylnaphthalene lignan glycosides and other constituents from Phyllanthus reticulates[J].JAsian Nat Prod Res，2012，14(11):1 073－1 077.

[4]Lan MS，Ma JX，Tan CH，etal.Chemical Constituents of Phyllanthus reticulates[J].Helv Chim Acta，2010，93(11):2 276 － 2 280.

[5]蓝鸣生，马健雄，谭昌恒，等.红鱼眼化学成分研究[J].中草药，2011，42(9):1 712 －1 714.

[6]中国科学院上海药物研究所.中草药有效成分提取与分离[M].上海:上海科学技术出版社，l983:14－15.

[7]陈 奇 .中药药理实验方法[M].北京:人民卫生出版社，1991:107－108.

[8]申德堰，陈永顺.草豆蔻挥发油的抗炎作用研究[J].中国药业，2012，21(17):20 －21.