三高调和丸质量标准研究

刘文龙 黄余燕

三高调和丸由丹参、三七、天花粉、泽泻、甘草等组成，其功效为活血消瘀、消食化积、清热生津、扶正驱邪。适用于高血压、高血脂、糖尿病、及脉管炎等症。此次试验的目的是完善三高调和丸质量标准，薄层色谱法(TCL)对处方中的丹参、三七这两种主要药材进行定性鉴别，并采用用高效液相色谱法(HPLC)测定丹参含量。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Agilent1100高效液相色谱仪。

1.2 试药 硅胶G由青岛海洋化工有限公司提供批号：080222丹参酮ⅡA对照品(批号：110766-200518，中国药品生物制品检验所)。甲醇为色谱纯，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。三高调和丸的制备：三高调和丸为嘉应学院医学院制剂室生产(生产批号：20081118；20081125；20081129)

2 方法与结果

2.1 薄层鉴别

2.1.1 丹参的鉴别

2.1.1.1 供试品溶液的制备 取本品研细，称取细粉10 g，加乙醚30 ml，超声处理10 min，振摇，放置1 h，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯1 ml使溶解，作为供试品溶液。

2.1.1.2 对照品溶液的制备 另取丹参对照药材1 g，同法制成对照药材溶液。再取丹参酮ⅡA对照品，加乙酸乙酯制成2 mg/ml的溶液，作为对照品溶液。

2.1.1.3 阴性对照溶液的制备：取相当于样品量10 g的缺丹参阴性对照样品，按上述供试品溶液制备方法制备丹参阴性对照溶液。

2.1.1.4 薄层色谱分析 照薄层色谱法(《中国药典》(2010年版一部附录VI B)试验［1］，吸取上述三种溶液各10 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯-乙酸乙酯(19：1)为展开剂，展开，取出，晾干。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，在与对照品色谱相应的位置上显相同的暗红色斑点，并且丹参阴性对照未出现斑点。结果见图1。

图1

2.1.2 三七的鉴别

2.1.2.1 供试品溶液的制备 取本品研细，称取细粉10 g，加水10 ml使其润湿，搅匀，再加水饱和的正丁醇30 ml，超声处理30 min，滤过，滤液用正丁醇饱和的水洗涤3次，每次10 ml，弃去水层，取正丁醇提取液，蒸干，残渣加甲醇1 ml使溶解，作为供试品溶液

2.1.2.2 对照品溶液的制备 另取三七对照药材0.5 g，同法制成对照药材溶液。再取三七皂苷R1对照品及人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg1对照品，加甲醇制成每1 ml各含1 mg的混合溶液，作为对照品溶液。

2.1.2.3 阴性对照溶液的制备 取相当于样品量10 g的缺三七阴性对照样品，按上述供试品溶液制备方法制备三七阴性对照溶液。

2.1.2.4 薄层色谱分析 照薄层色谱法(《中国药典》(2010年版一部附录VI B)试验［1］，吸取上述三种溶液各2 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯－甲醇－水(15∶40∶22∶10)10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以硫酸乙醇液(1→10)，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，并且三七阴性对照未出现斑点。结果见图2。

图2

2.2 含量测定

2.2.1 色谱条件与系统适应性试验 色谱柱：Agilent ZORBAX C18 柱(250 mm ×4.6 mm，5μm)；流动相：甲醇-水(73∶27)；检测波长：270nm；柱温：30℃；理论板数按丹参酮ⅡA峰计算应不低于2000，进样量10 μl。该条件丹参酮ⅡA分离度好，丹参阴性对照无干扰［2］。色谱图见图3。

2.2.2 对照品溶液的制备 取丹参酮ⅡA对照品约10 mg，精密称定，置50 ml棕色容量瓶中，加甲醇制成每1 ml含40 μg的溶液，即得［3］。

2.2.3 供试品溶液的制备 取本品适量研细，取约1 g，精密称定，置具塞棕色瓶中，精密加入甲醇25 ml，密塞，称定重量，超声处理(功率205W，频率33kHz)15 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，置棕色瓶中，即得［4-6］。

2.2.4 阴性对照溶液的制备 取相当于供试品量1 g的缺丹参阴性对照样品，同法制成丹参阴性对照溶液。

2.2.5 标准曲线的制备 精密吸取对照品溶液1、2、5、10、15、20 μl，依次进样测定。以质量Y为纵坐标，峰面积X为横坐标，绘制标准曲线，并进行线性回归。其回归方程和相关系数为：Y=227.22X+1.3829，r=0.9999，丹参酮ⅡA在0.04032～0.8064 μg范围内与峰面积线性关系良好。

2.2.5 精密度试验 精密吸取同一份对照品溶液10 μl，重复测定6次，丹参酮ⅡA的峰面积RSD为0.55%。

2.2.6 重复性试验 取同一批样品(20081129)6份，分别按“2.2.3”项下方法制备，精密吸取10 μl进样，测得样品中丹参酮ⅡA平均含量0.52，RSD为0.74%。

2.2.7 稳定性试验 精密吸取同一份样品溶液10 μl，分别0、2、4、6、8、10 h 测定，RSD 为 0.59%，说明被测溶液在 10 h内基本稳定。

2.2.8 加样回收试验 取已知含量三高调和丸的样品粉末约0.5 g，精密称取共6份，置棕色瓶中，分别精密加入丹参酮ⅡA对照品溶液25 ml，按2.2.3项下方法制备，分别测定，计算回收率，结果见表1。

2.2.9 样品测定 取三高调和丸样品3批，按2.2.3项下方法制备供试品溶液，按上述色谱条件测定。结果见表2。

图3 HPLC色谱图

表1 加样回收率试验结果

表2 样品测定结果

4 讨论

4.1 丹参和三七的薄层色谱鉴别操作简单，结果斑点对应性好，阴性对照均无干扰，具有专属性。在不同温度10℃、20℃、30℃及不同湿度，不用同厂家硅胶G薄层板实验结果均一致。

4.2 定量测定参照《中国药典》2010年版一部复方丹参片的方法，简便准确。实验中考察了超声提取时间5、10、15、30 min的提取效果，结果3个超声提取时间含量测定结果基本一致，为保证提取完全同时节省实验时间，最后选择超声时间为15 min。

［1］ 国家药典委员会．中国药典(一部)．北京：中国医药科技出版社，2010：附录ⅥB．

［2］ 张英锋，王燕革，马子川，等．丹参活性化学成分的研究．化学世界，2009，50(10)

［3］ 邱丽丽，容蓉，蒋海强，等．高效液相色谱法同时测定丹参提取物中4种成分的含量．分析试验室，2009，28(21)．

［4］ 蓝天凤．丹参中丹参酮类成分及其含量测定方法研究．山东中医药大学，2011．

［5］ 杨东风．丹参药材HPLC指纹图谱及其质量评价研究．西北农林科技大学，2007．

［6］ 曹冬．中药丹参及其制剂的质量控制方法研究．河北医科大学，2006．