噬血细胞综合征患儿细胞因子的变化与临床分析

任一帆，贾国存，邹旭凤，赵 瑞，吕艳琦

(郑州市儿童医院血液科 河南郑州 450003)

噬血细胞综合征(HPS)，又称噬血细胞性淋巴组织细胞增多症(HLH)，由 Farquhar等［1］于1952年首次报道，可见多脏器受损，病情进展迅猛，延误诊治病死率高的临床特点。该病是由多种致病因素引起的淋巴细胞和组织细胞过度增殖、活化，产生大量炎症因子，从而引起的一种可危及生命的过度炎症反应［2］。本研究对收治的HLH患儿血清细胞因子IL-18、IL-10、IL-12、TNF-α、NF-Kβ 及新碟呤进行检测，观察其变化，并探讨其在HLH发病机制中的作用和临床意义，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 以2011年1月至2012年5月在郑州市儿童医院血液肿瘤科收治的16例HLH患儿为研究对象，其中男9例，女7例，年龄3.2个月～5.6岁。病例诊断均符合HLH-2004诊断标准［3］，确诊前无糖皮质激素应用史。10例健康对照组为郑州市儿童医院同期门诊体检健康儿童，男6例，女4例;年龄5个月～8岁，无心、肝、肾脏疾病及遗传代谢性疾病，健康对照组家长均知情同意。各组资料具有可比性。

1.2 试剂和仪器 ELISA试剂盒购自美国RB公司，酶标仪购自上海热电仪器有限公司，高精度加样器及枪头购自德国BRAVD公司，恒温水箱购自北京市医疗设备厂，离心机购自安徽中科中佳科学仪器有限公司。

1.3 细胞因子测定 抽取患儿及健康对照组儿童空腹静脉血2 ml，3 000 r/min离心10 min后分离血清，按一次用量分装，冻存于－20°冰箱备用。检测之前室温下溶解标本，并提前20 min取出试剂盒，平衡至室温。严格按照ELISA试剂盒说明书步骤检测IL-18、IL-10、IL-12、TNF-α、NF-Kβ 及新碟呤水平。

1.4 统计学处理 应用SPSS17.0软件，数据±s表示，HLH组与健康儿童组之间采用t检验比较，检验水准α=0.05。HLH组各细胞因子间相关性分析采用Spearman rank相关性分析。

2 结果

HLH组IL-18、IL-10、IL-12、NF-Kβ、TNF-α及新碟呤水平均升高，与健康对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05)。其中IL-10、新碟呤水平明显升高，与健康对照组比较差异均有显著统计学意义(P＜0.01)。TNF-α升高不明显，与健康组比较差异无统计学意义(P＞0.05)，这与报道相符［3］。见表1。

表1 HLH患儿与健康对照组儿童细胞因子水平比较(±s)

表1 HLH患儿与健康对照组儿童细胞因子水平比较(±s)

新碟呤HLH组 10 420.9±31.0 223.2±123.0 298.2±237.9 17.0±组别 n IL-18 IL-10 IL-12 NF-Kβ TNF-α 4.5 3.1±1.2 57.8±28.3健康组 16 168.7±14.9 2.3±0.6 74.1±15.9 5.8±1.6 2.8±1.1 7.7±3.2 t 23.89 4.90 2.95 7.46 0.804 5.53 P＜0.05＜0.01＜0.05＜0.05 ＞0.05＜0.01

IL-10与NF-Kβ 及新碟呤均呈正相关(r=0.747P＜0.05，r=0.567P＜0.05)，IL-18与IL-12、TNF-α也呈明显正相关(r=0.542P＜0.05，r=0.686P＜0.05)。见表2。

表2 HLH患儿细胞因子水平相关性分析

3 讨论

本研究的16例HLH患儿均符合HLH-2004诊断标准，该标准认为只要符合HLH的分子诊断和8条临床诊断中的5条，即能确诊HLH。但是由于技术水平限制，目前国内尚不能完成所有与HLH相关的染色体基因缺陷的检测。而且，临床观察发现，很多HLH患儿病程初期很难同时满足5条诊断标准，随着病程进展，各种症状逐一出现，最终确诊为HLH。但是HLH病情进展十分迅速，延误诊断和治疗可导致患儿病情无法控制而死亡，因此，HLH的早期诊断十分必要，而HLH-2004方案仍需进一步完善。

HLH分为原发性或遗传性HLH和继发性HLH两类，其中原发性HLH又分为家族性HLH和免疫缺陷病两类。原发性HLH患者多有噬血家族史或被证明有明确的基因突变，多于1岁之前发病，偶见青少年和成年患者［4］。继发性HLH分为感染相关性 HLH(IAHS)，肿瘤相关性HLH(MAHS)、自身免疫相关性HLH(MAS)、药物相关性 HLH、移植后 HLH 等［2］。该病具体发病机制不明，但多数认为免疫系统参与了该病的发病过程。该观点认为，基因缺陷、感染及肿瘤等病因引起机体免疫系统紊乱，使T细胞持续增殖，产生大量的IFN-，导致巨噬细胞大量活化，活化的巨噬细胞又分泌大量的细胞因子，如:IL-12、IL-10、IL-18、TNF-α及其他白介素类，其中IL-12能诱导分泌Th1细胞因子的细胞发展并促进这些细胞和NK细胞产生IFN-，形成恶性循环［5］，这就是所谓的“细胞因子风暴”学说。

在本研究中，HLH患儿确诊时 IL-18、IL-10、IL-12、NF-Kβ及新碟呤水平与健康对照组相比均升高，尤其IL-10、新碟呤水平明显升高，再一次证实了细胞因子确实参与了HLH的病理生理作用。与健康组相比，HLH患儿确诊时血清TNF-α升高不明显。TNF-α是造血干细胞增殖的抑制性因子，能使骨髓粒系、红系及巨核细胞进行性减少，HLH患儿确诊时血清TNF-α升高不明显，但是却有明显的外周血两系以上减少，考虑与骨髓中的噬血细胞对血细胞的破坏有关。

NF-Kβ几乎存在于机体的各种细胞中，它是具有基因转录调节作用的核因子，是急性炎症反应的中枢环节，在调节免疫应答、炎症反应和细胞增殖分化以及凋亡方面均起关键作用，能在氧化期上调有关炎症因子基因的转录。本研究证实，IL-10与NF-Kβ呈明显正相关，可能与NF-Kβ上调了IL-10的基因转录有关。IL-10主要有单核/巨噬细胞、T细胞、B细胞分泌，能促进B细胞增殖、分化及抗体产生。新碟呤主要由活化的巨噬细胞及树突状细胞产生，是参与机体炎症反应的一个重要因子，本研究提示，IL-10与新碟呤呈明显正相关，但具体作用机制仍待进一步研究。

IL-18是IL家族中的重要成员之一，主要由Th1细胞产生。IL-18在caspase-1的催化下成为有活性的细胞因子，可被单核吞噬细胞连续表达。IL-18与IL-12共同维持Th1的免疫活性，可促进T淋巴细胞和NK细胞产生IFN-和TNF-α以及在淋巴细胞中诱发Fas配基的表达，本研究显示IL-18与IL-12、TNF-α呈明显正相关，与上述理论吻合，提示以上病理机制可能参与了HLH病理生理过程。

［1］Farquhar J W，Claireaux A E.Familial haemophagocytic reticulosis［J］.Arch Dis Child，1952，27(136):519-525.

［2］Janka G E.Familial and acquired hemophagocytie lymphohistiocytosis［J］.Eur J Pediatr，2007，166:95-109.

［3］Henter J I，Home A C，Arico M，et al.HLH-2004:Diagnostic and therapeutic guideli-nes for hemophagocytic lymphohistiocytesis［J］.Pediatr Blood Cancer，2007，48:124-131.

［4］Xiaojun X，Yongmin T，Hua S.Diagnostic Accuracy of a Specific Cytokine Pattern in Hemophagocytic Lymphohistiocytosis in Children［J］.Pediatr，2012，160(6):984-990.

［5］Nagafuji K，Nonami A，Kumano T，et al.Perforin genemutations in adult-onset hemophagocytic lymphohistiocytosis［J］.Haematologica，2007，92(7):978-981.

［6］Tang Y，Xu X，Song H，et al.Early diagnostic and prognostic significance of a specific Th1/Th2 cytokine pattern in children with haemophagocytic syndrome［J］.Br Haematol，2008，143(1):84-91.