黄芩总黄酮溶解度和表观油水分配系数的测定

乔建卫，裴广庆，刘向东，苏瑞强，孙宗喜，赵志全 （1.鲁南制药集团股份有限公司，山东 临沂276006；2.中药制药共性技术国家重点实验室，山东 临沂276006）

黄芩为唇形科植物黄芩（Scutellaria baicalensis Georgi）的干燥根，味苦，性寒，具有清热燥湿、泻火解毒、止血、安胎的功效［1］。作为一味传统中药材，资源分布非常广泛，主产于山东、山西、陕西、甘肃等省份。黄芩化学成分复杂，其中黄酮类化合物是其主要有效组份，具有解热、抗炎、保肝、抑菌、抗氧化等作用［2］。药物的溶解度与表观油水分配系数是制剂研究重要的技术参数，前者可影响到药物的吸收和生物利用度，尤其是在固体制剂中，其大小可直接改变药物的溶出情况；后者则与药物的溶解、吸收、分布、转运密切相关［3］。基于此，本试验测定了黄芩总黄酮的溶解度和表观油水分配系数等理化性质，为指导其新剂型设计和开发提供必要的参考。

1 材料

1.1 仪器 UV－2401紫外分光光度计（日本岛津公司）；AG285型电子分析天平（瑞士梅特勒－托利多上海有限公司）；KQ－5200DB 数控超声波清洗器（昆山超声仪器有限公司）；SHA－C 水浴恒温振荡器（江苏金坛市华峰仪器有限公司）；H1650－W型离心机（长沙湘仪离心仪器有限公司）；pHS－25B 数显酸度计（上海大普仪器有限公司）；QL－901涡旋混合器（海门其林贝尔仪器制造有限公司）。

1.2 药品与试剂 黄芩苷对照品（批号110715－200514）由中国食品药品检定研究院提供；黄芩总黄酮（实验室自制，批号12032801，质量分数为83.64%）；水为超纯水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 黄芩总黄酮测定方法的建立

2.1.1 对照品溶液的配制 取黄芩苷对照品适量，精密称定，以70%乙醇溶解制成质量浓度为67.4 μg·mL－1的溶液，即得。

2.1.2 测定波长的确定 取适当质量浓度的对照品溶液和黄芩总黄酮溶液，在190～400 nm 波长范围内扫描，结果两者均在278 nm 处有最大吸收。

2.1.3 线性关系考察 精密量取对照品溶液0.2，0.4，0.8，1.0，2.0mL置10 mL量瓶中，用70%乙醇稀释至刻度，分别在278 nm 处测定吸光度。以质量浓度（Y）为纵坐标，吸光度（X）为横坐标，绘制标准曲线，计算得回归方程为：Y＝15.58 X－0.547 1，r＝0.999 0，线性范围为1.348～13.48μg·mL－1。

2.1.4 精密度试验 精密称取黄芩总黄酮（过5号筛）6.0mg，置于50 mL量瓶中，用70%乙醇溶解至刻度，再移取1 mL 置于10 mL 量瓶中，用70%乙醇稀释至刻度，作为供试品溶液。连续测定其6次吸光度，结果RSD 为0.44%。

2.1.5 稳定性试验 取“2.1.4”项下的同一供试品溶液，分别于0，2，4，6，8，10 h测定其吸光度，结果RSD 为1.57%。

2.1.6 重复性试验 精密称取黄芩总黄酮6份，用70%乙醇溶解并适当稀释后测定吸光度，结果总黄酮的平均含量为836.4 mg·g－1，RSD 为2.09%。

2.1.7 加样回收率试验 取已知含量的黄芩总黄酮6份，精密称定，分别精密加入黄芩苷对照品适量（与样品中总黄酮的量相当），用70%乙醇溶解并适当稀释后测定吸光度，计算回收率，结果平均回收率为98.28%，RSD 为1.47%。

2.2 黄芩总黄酮溶解度的测定［4－5］取黄芩总黄酮约0.1 g，精密称定，置具塞试管中，分别加入溶剂10 mL，超声至不再溶解，将试管置于水浴恒温振荡器中，温度保持（25±1）℃振荡48 h，静置后离心（14 000 r·min－1，10 min），各吸取上清饱和溶液，滤过，经适当稀释后，分别测定吸光度，计算其溶解度。试验中选择7种溶剂（水、甲醇、乙醇、正丁醇、醋酸乙酯、氯仿、石油醚）和7 种不同pH 的缓冲液（按《中国药典》方法配制pH6.8的磷酸盐缓冲液，再分别以0.1 mol·L－1磷酸或1 mol·L－1氢氧化钠调节为pH2.0，4.0，5.8，6.8，7.4，8.8，11.2的缓冲液）。

结果表明，黄芩总黄酮在水中的溶解度最高（6.361 g·L－1），且随着溶剂极性的减弱而依次降低（表1）。在不同的pH 条件下，黄芩总黄酮的溶解性有一定的差异，而在碱性条件下，其溶解度相对较高，见图1。

表1 黄芩总黄酮在不同溶剂中的溶解度Tab 1 Solubility of total flavonoids fromS.baicalensis in different solvent

图1 黄芩总黄酮在不同pH 缓冲液中的溶解度Fig 1 Solubility of total flavonoids fromS.baicalensis in different pH buffer solution

2.3 黄芩总黄酮表观油水分配系数（P）的测定［6］取水和不同pH 的磷酸盐缓冲液于锥形瓶中，各加入一定量的正辛醇，置磁力搅拌器上搅拌后静置，配制成水／缓冲液和正辛醇相互饱和的两相体系。取黄芩总黄酮8份，分别加入到被正辛醇饱和的水／缓冲溶液中，使成饱和状态，静置后离心（14 000 r·min，10 min），精密吸取上清液5 mL 置具塞试管中，再分别加入被水／缓冲溶液饱和的正辛醇5 mL，经涡旋混合器混合10 min，静置1 h，反复操作3次，使黄芩总黄酮在两相中充分分配平衡，静置后取下层水相溶液，及取混合前的下层水相溶液，滤过，经适当稀释后，分别测定吸光度，计算黄芩总黄酮的质量浓度。表观油水分配系数（P）的计算公式如下：

式中，C0、C1分别为混合前后下层水相中的黄芩总黄酮的质量浓度。

结果表明，在不同pH 条件下，黄芩总黄酮的表观油水分配系数有很大差别。在pH2.0的缓冲液中，其表观油水分配系数为15.874，远高于其他pH条件。结果见表2。

表2 黄芩总黄酮在不同pH 缓冲液中的表观油水分配系数Tab 2 Apparent oil／water partition coefficients of total flavonoids from S.baicalensis in different pH buffer solution

3 讨论

人体胃肠道不同部位的pH 不同［6］。在本试验中，所选择的不同pH 条件尽可能反映人体胃肠道不同部位的pH，可较为准确地体现黄芩总黄酮在人体胃肠道不同部位的溶解和渗透情况。

黄芩总黄酮的溶解度随着溶剂极性的减弱而迅速降低，其亲水性要强于亲脂性，而且在碱性条件下的溶解度较高，这可能与其所含化学成分的酸性基团碱化成盐有关。鉴于黄芩总黄酮的溶解性比较差，提示其普通固体制剂的溶出速率较慢，将影响到在人体内的吸收过程。因此，在设计其新剂型时，可考虑采用固体分散技术等方法改善其药物性能，提高溶出速率，进而提高生物利用度。

表观油水分配系数（P 值）是药物传递系统中重要的参数。当P 值低时（lgP＜－2），过量的热力学屏障将阻止药物透过脂质膜；当P 值高时（lgP＞3），较强的亲脂性会导致药物难以从膜两侧的不动水层进行扩散。因此，在进行药物设计时，应考虑其是否在最佳的P 值内（－1＜lgP＜2）［7］。从表2可知，黄芩总黄酮的P 值为0.107～15.874（－0.971＜lgP＜1.201），表明其在人体胃肠道内的吸收情况良好。表观油水分配系数虽不能完全真实反映药物在体内的渗透性，但对预测其在体内的分配情况有一定的指导性。

［1］ 中国药典.一部［S］.2010：282－283.

［2］ 宋旦哥，孟庆刚.黄芩药理作用研究述评［J］.中华中医药学刊，2009，27（8）：1619－1622.

［3］ 潘卫三.新药制剂技术［M］.北京：化学工业出版社，2004：6－40.

［4］ 刑建国，谢敏，王新春，等.天山雪莲提取物平衡溶解度和表观油水分配系数的测定［J］.中国医院药学杂志，2013，33（1）：26－28.

［5］ 王玉，李祥，陈建伟.番荔枝总内酯平衡溶解度和油水分配系数的测定［J］.中国医院药学杂志，2013，33（5）：342－345.

［6］ 何琳，龙晓英，丁沐淦，等.水飞蓟素平衡溶解度及表观油水分配系数的测定［J］.广东药学院学报，2011，27（5）：445－449.

［7］ Abraham DJ.Burger’s medicinal chemistry and drug discovery［M］.New Zealand：John Wiley ＆Sons Inc，2003：259－293.