高效液相色谱法测定多效胃镜乳中主要成分含量

张 勇，黄爱文，宋洪涛

(中国人民解放军南京军区福州总医院药学科，福建 福州 350025)

多效胃镜乳是我院研制的一种一次性给药即可同时达到局部麻醉、解痉、消泡、润滑和减少分泌效果的胃镜乳，是由盐酸达克罗宁、消旋山莨菪碱、二甲基硅油、西黄蓍胶等在80 ℃条件下乳化制成的复方制剂。盐酸达克罗宁化学名称为对-丁氧-β-哌啶苯基乙基酮，是一种起效快、作用时间长、不良反应小、安全性高的局部麻醉药[1-2]。原标准中盐酸达克罗宁的含量测定方法为紫外-可见分光光度法(UV 法)的一阶导数法，实际应用中发现其测定结果较实际含量高，且原标准中没有收录消旋山莨菪碱的含量测定方法[3-4]。为了保证该制剂的临床疗效和控制其质量，本试验中建立了测定制剂中盐酸达克罗宁和消旋山莨菪碱含量的高效液相色谱(HPLC)法，现报道如下。

1 仪器与试药

Agilent 1200 型高效液相色谱仪(美国安捷伦公司)。多效胃镜乳(南京军区福州总医院制剂室，批号为130922，130923，130924);盐酸达克罗宁对照品(中国食品药品检定研究院，批号为100423-201102);消旋山莨菪碱对照品(中国食品药品检定研究院，批号为100249 -200902);甲醇为色谱纯，水为纯化水，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 盐酸达克罗宁含量测定

2.1.1 色谱条件

色谱柱:Ecilent XDB-CN 柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm，美国安捷伦公司);流动相:0.01 mol/L 磷酸二氢钾溶液(含0.15% 三乙胺溶液，用磷酸调pH 至6.5)-甲醇(20 ∶80);检测波长:282 nm;流速:1.0 mL/min;进样量:10 μL;柱温:30 ℃。

2.1.2 溶液制备

振摇供试品2 min，取约2.5 g，精密称定，置50 mL 容量瓶中，加0.05 mol/L 盐酸10 mL，加乙腈稀释至刻度，摇匀，作为供试品贮备液;精密量取5 mL 贮备液，置100 mL 容量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，制成每1 mL 中约含25 μg 的溶液，用0.22 μm 微孔滤膜滤过，作为供试品溶液。取盐酸达克罗宁对照品约50 mg，精密称定，置50 mL 容量瓶中，加0.05 mol/L 盐酸10 mL，加乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液;精密量取2.5 mL 贮备液，置10 mL 容量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，用0.22 μm微孔滤膜滤过，作为对照品溶液。按处方量除不加盐酸达克罗宁外其他成分制备阴性样品，并按供试品溶液的制备方法制备阴性对照品溶液。

2.1.3 方法学考察

专属性试验:取2.1.2 项下3 种溶液，按拟订色谱条件进样测定，色谱图见图1。结果表明，方中其他成分及辅料对盐酸达克罗宁的测定无干扰，方法专属性好，盐酸达克罗宁的保留时间约为5.2 min，分离度为8.38，理论板数为11 875。

图1 盐酸达克罗宁高效液相色谱图

线性关系考察:精密量取盐酸达克罗宁对照品贮备液0.75，1.50，2.50，5.00，7.50 mL，分别置100 mL 容量瓶中，加乙腈稀释至刻度，分别进样10 μL，记录色谱图。以盐酸达克罗宁质量浓度(μg/mL)为横坐标(X)、相应峰面积为纵坐标(Y)进行线性回归，得线性回归方程Y=29.18 X+12.114，r=0.999 9(n=5)。结果表明，盐酸达克罗宁质量浓度在7.5 ～75.0 μg/mL 范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验:精密吸取同一对照品溶液，重复进样6 次，按盐酸达克罗宁色谱条件测定其含量。结果的RSD 为0.098%(n=6)，表明仪器精密度良好。

加样回收试验:按处方量比例称取处方中除盐酸达克罗宁外所有组分(约相当于多效胃镜乳0.125 g )共9 份，置25 mL 容量瓶中，3 份为一组，各组分别精密加入盐酸达克罗宁对照品贮备液(976.044 μg/mL)0.75，0.625，0.500 mL，加乙腈稀释至刻度，摇匀，制得所需溶液，按盐酸达克罗宁色谱条件测定其含量，计算回收率。结果见表1。

表1 加样回收试验结果(n=9)

重复性试验:取同一批样品6 份，依法制备供试品溶液，按盐酸达克罗宁色谱条件测定含量。结果的RSD 为0.43%(n=6)，表明该方法重复性良好。

稳定性试验:取同一供试品溶液，室温下放置，分别于0，2，4，6，8，10，12，24 h 时测定盐酸达克罗宁的峰面积。结果的RSD为0.33%(n=8)，表明供试品溶液在24 h 内基本稳定。

2.1.4 样品含量测定

精密称取样品适量，按供试品溶液制备方法进行处理，取10 μL 注入液相色谱仪，记录色谱图;另取盐酸达克罗宁对照品适量，制成每1 mL 中约含盐酸达克罗宁25 μg 溶液，同法测定。按外标法以峰面积计算。3 批样品中盐酸达克罗宁含量测定结果见表2。可见，3 批样品中盐酸达克罗宁含量均为标示含量的90.0% ～110.0%，符合规定。

另配制3 批多效胃镜乳及不含盐酸达克罗宁的阴性对照品，分别以新建立的HPLC 法和原标准中UV 法进行含量测定，结果见表2。原UV 法为，振摇供试品2 min，精密量取供试品1 mL，置100 mL 容量瓶中，加入0.05 mol/L 硫酸溶液至刻度，振摇使溶解;精密量取10 mL，置50 mL 容量瓶中，用0.05 mol/L 硫酸溶液至刻度，摇匀，用0.45 μm 水性微孔滤膜滤过;滤液按标准曲线项下方法测定吸光度值，代入标准曲线计算含量。结果表明，3 批样品中，2 种方法对比，UV 法测得值均比HPLC 法高约4%。

2.2 消旋山莨菪碱含量测定

2.2.1 色谱条件

色谱柱:Ecilent XDB-CN 柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm，美国安捷伦公司);流动相:0.01 mol/L 磷酸二氢钾溶液(含0.15%三乙胺溶液，用磷酸调pH 至6.5)-甲醇(75 ∶25);检测波长:220 nm;流速:1.0 mL/min;进样量:10 μL;柱温:30 ℃。

表2 样品含量测定结果(标示量的%)

2.2.2 溶液制备

振摇供试品2 min，取约2.5 g，精密称定，置50 mL 容量瓶中，加0.05 mol/L 盐酸10 mL，加乙腈稀释至刻度，摇匀，制成每1 mL 中约含50 μg 的溶液，用0.22 μm 微孔滤膜滤过，作为供试品溶液。取消旋山莨菪碱对照品约10 mg，精密称定，置200 mL 容量瓶中，加0.05 mol/L 盐酸20 mL，加乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，用0.22 μm 微孔滤膜滤过，作为对照品溶液。按处方量除不加消旋山莨菪碱外的其他组分制备阴性样品，并按供试品溶液的制备方法制备阴性对照品溶液。

2.2.3 方法学考察

专属性试验:取2.2.2 项下3 种溶液，按拟订色谱条件进样测定，色谱图见图2。结果表明，其他成分及辅料对测定无干扰，方法专属性好，消旋山莨菪碱顺、反式异构体的保留时间分别约为9.1 min 和10.2 min，分离度分别为11.88 和2.24，理论板数分别为9 090 和8 858。

图2 消旋山莨菪碱高效液相色谱图

线性关系考察:精密量取消旋山莨菪碱对照品贮备液0.5，1.5，2.5，4.0，5.0 mL，分别置10 mL 容量瓶中，加乙腈稀释至刻度，分别进样10 μL，记录色谱图。以消旋山莨菪碱质量浓度(μg/mL)为横坐标(X)、消旋山莨菪碱顺及反式异构体的峰面积和为纵坐标(Y)进行线性回归，得线性回归方程Y=6.190 1 X+5.413 9，r = 0.999 9(n = 5)。结果表明，消旋山莨菪碱质量浓度在10 ～100 μg/mL 范围内与峰面积和线性关系良好。

精密度试验:精密吸取同一对照品溶液，重复进样6 次，按消旋山莨菪碱色谱条件测定其含量。结果的RSD=0.37%(n=6)，表明仪器精密度良好。

加样回收试验:按处方量比例称取处方中除消旋山莨菪碱外所有组分(约相当于多效胃镜乳1.25 g )共9 份，置25 mL 容量瓶中，3 份为一组，各组分别精密加入消旋山莨菪碱对照品贮备液(204 μg/mL)7.50，6.25，5.00 mL，加乙腈稀释至刻度，摇匀，制得所需溶液，按消旋山莨菪碱色谱条件测定其含量，计算回收率。结果见表1。

重复性试验:取同一批样品6 份，依法制备供试品溶液，按消旋山莨菪碱色谱条件测定其含量。结果的RSD 为0.98%(n=6)，表明该方法重复性良好。

稳定性试验:取同一供试品溶液，置室温下放置，分别于0，2，4，6，8，10，12，24 h 时测定消旋山莨菪碱的峰面积。结果的RSD为1.03%(n=8)，表明供试品溶液在24 h 内基本稳定。

2.2.4 样品含量测定

精密称取样品适量，按供试品溶液制备方法进行处理，取10 μL注入液相色谱仪，记录色谱图;另取消旋山莨菪碱对照品适量，制成每1 mL 中约含消旋山莨菪碱50 μg 溶液，同法测定。按外标法以峰面积计算。3 批样品消旋山莨菪碱含量测定结果见表2。结果表明，3 批样品中消旋山莨菪碱含量均为标示含量的90.0% ～110.0%，符合规定。

3 讨论

盐酸达克罗宁和消旋山莨菪碱均有较强的水溶性，水溶液均在酸性条件下稳定。盐酸达克罗宁在282 nm 波长处有最大吸收;消旋山莨菪碱在220 nm 波长处有最大吸收，且在282 nm 波长处基本无吸收。经试验，确定了文中的色谱条件，结果两成分色谱峰均峰形对称，分离度良好，柱效较高。

分别以HPLC 法和原标准中的UV 法对3 批样品及不含盐酸达克罗宁的阴性对照品进行盐酸达克罗宁的含量测定，结果表明，UV 法测得值均比HPLC 法高约4%。UV 法的二阶导数法不能排除阴性溶液的干扰，专属性差。HPLC 法专属性好、分离度较好、简便、准确，可作为多效胃镜乳的质量控制方法。

多效胃镜乳为我院自制非标制剂，原标准收录的含量测定项下只有盐酸达克罗宁的UV 法的二阶导数法，本试验将原有盐酸达克罗宁含量测定方法改进为HPLC 法，并增加了测定消旋山莨菪碱含量的HPLC 法。HPLC 法对以上两成分具有良好的专属性及稳定性，拟收录到非标制剂标准中的含量测定项下，以进一步完善标准，更好地控制制剂质量，确保临床用药安全、有效。

[1] 刘锡钧. 实用药物指南[M]. 北京:人民军医出版社，2000:127.

[2] 陈新谦，金有豫. 新编药物学[M]. 第14 版. 北京:人民卫生出版社，2000:222.

[3] 王 珏，吴秀华，徐汉琴.HPLC 法同时测定复方达克罗宁含漱液中主要成分的含量[J]. 药物分析杂志，2012，32(6):1 010 -1 012.

[4] 凌 宵，徐志洲. HPLC 法测定盐酸消旋山莨菪碱注射液的含量及有关物质[J]. 药物分析杂志，2011，31(10):1 947 -1 949.