苦参中活性成分研究*

厉博文，张思巨，智红英，海丽娜，秦文杰，李安平

(1.北京振东光明药物研究院有限公司，北京100120;2.中国中医科学院中药研究所，北京100700)

复方苦参注射液由苦参、白土苓组成，具有镇痛、止血、抗癌、提高免疫功能等作用［1］。苦参为复方苦参注射液的君药，豆科植物槐属苦参(Sophora flavescens Ait.)的干燥根，味苦，性寒，具有清热燥湿、杀虫利尿的功能，主治热痢、便血、黄疸尿闭、赤白带下、阴肿阴痒、湿疹、湿疮、皮肤瘙痒、疥癣麻风等［2］。苦参主要含有生物碱和黄酮两大类化合物，国内外学者从中已分离得到了34个生物碱［3］、85个黄酮类［4－5］化合物。为阐明复方苦参注射液中有效物质基础，达到国家对中药注射液的全面要求，须对君药苦参的亲水性成分做进一步研究。苦参的生物碱成分亲水性强，已成为复方苦参注射液中主要的有效物质，占总固量的±30%。本研究主要分离苦参中除生物碱以外的极性部位——黄酮苷类等化学成分，以充实复方苦参注射液的有效物质基础。

1 药品、试剂与仪器

苦参药材，由山西振东集团中药材开发公司提供，经关扎根高级农艺师鉴定为豆科槐属植物苦参Sophora flavescens Ait.的干燥根(栽培品)。薄层层析硅胶GF254，青岛海洋化工厂产品;浓硫酸(批号20101012)、香草醛(批号20101208)和乙醇(批号20101106))均为分析纯，北京化工厂产品，用以制备50 g/L硫酸香草醛溶液和100 mL/L硫酸乙醇溶液;三叶豆紫檀苷对照品，自制;降苦参酮和苦参酮对照品，由协和医学院药用植物研究所石钺老师馈赠;其他试剂均为分析纯，北京化工厂产品。Avance DRX－500核磁共振仪，瑞士Bruker公司产品;Tensor 27型傅里叶红外光谱仪，德国Bruker公司产品;BS－210S电子天平，德国Sartorius公司产品;RD－2熔点测定仪，天津市瑞莱特仪器有限公司产品;KQ－250DB超声波清洗仪，昆山市超声仪器有限公司产品。

2 方法与结果

2.1 提取与分离

苦参饮片4.63 kg，950 g/L乙醇回流提取3次，滤过，滤液浓缩得950 g/L乙醇浸膏979 g。药渣加500 g/L乙醇浸泡回流提取3次，滤过，滤液浓缩得500 g/L乙醇浸膏671 g。取500 g/L乙醇浸膏250 g，经常压硅胶柱层析分离，以乙酸乙酯－甲醇－水(10∶1∶0.1)洗脱，重结晶法分离、精制得到化合物I(98 mg)。取950 g/L乙醇浸膏196 g，经常压硅胶柱层析分离，以石油醚－乙酸乙酯(7∶3)洗脱，经ODS柱色谱和重结晶法分离得到化合物Ⅱ(10 mg)、Ⅲ(20 mg)和Ⅳ(10 mg)，以石油醚－乙酸乙酯(8∶2)洗脱，结晶法分离得到化合物Ⅴ(10 mg)、Ⅵ(10 mg)、Ⅶ(50 mg)。

2.2 结构鉴定

化合物I:白色粉末，熔点184～186℃，ESIMSm/z 194(M+)。1H-NMR(C5D5N，500 MHz):δ4.17(1H，t，J=9.3 Hz)，4.65(1H，t，J=9.3 Hz)为 l位，2 位的反式氢质子信号;δ4.75(1H，q，J=9.2，3.6 Hz)，4.77(1 H，m)为与 l，2 位反式的 3，6位质子信号;δ4.80(1H，m)，4.82(1H，m)为 4，5 位的氢质子信号;δ3.95(3H，s)为一甲氧基质子信号。以上数据与文献报道的松醇(pinitol)一致［14］，确定化合物I为松醇。

化合物II:白色结晶性粉末(丙酮)，熔点146～147 ℃，EI-MS m/z 446(M+)，UVλmax(MeOH)nm 310，285，213。1H-NMR(CD3COCD3，500MHz):δ7.38(1H，d，J=9.0Hz)，6.75(1H，dd，J=9.0 Hz，2.4 Hz)和 6.56(1H，d，J=2.4 Hz)信号为苯环上的3个氢信号，组成了1个 ABX系统，提示分子结构中有三取代的苯环存在。而 δ6.92(1H，s)和 6.40(1H，s)为苯环上对位的氢信号，提示分子结构中有四取代的苯环存在，δ5.94(1H，s)，5.90(1H，s)推测苯环上有一个连氧 CH2取代。δ4.96(1H，d，J=8.4Hz)为糖端基信号，由偶合常数知苷健构型为β构型，δ3.30～4.00之间的 6个氢信号为糖上质子信号。以上数据与文献报道的三叶豆紫檀苷［4］一致。薄层色谱与三叶豆紫檀苷对照品以3个不同展开剂系统共展开，均为单一斑点，Rf值一致;HPLC检查纯度和保留时间，与三叶豆紫檀苷保留时间一致，鉴定化合物2为三叶豆紫檀苷。

化合物Ⅲ:白色粉末，熔点166～168℃，EI-MS m/z 424(M+)，UVλmax(MeOH)nm 290。与降苦参酮对照品共薄层对照，3个不同展开剂系统均为单一斑点，并与降苦参酮对照品Rf值一致，鉴定化合物Ⅲ为降苦参酮。

化合物Ⅳ:黄色粉末，熔点121～123℃，ESI-MS m/z 438(M+)，UVλmax(MeOH)nm 286。与苦参酮对照品共薄层展开，3个不同展开剂系统均为单一斑点，并且与苦参酮对照品Rf值一致，鉴定化合物Ⅳ为苦参酮。

化合物Ⅴ:白色粉末，熔点136～138℃，ESI-MS m/z 414(M+)，薄层对照Rf值一致，确认为β－谷甾醇，分子式为C29H50O。

化合物Ⅵ:白色粉末，熔点168～170℃，ESI-MS m/z 412(M+)，薄层对照Rf值一致，确认为豆甾醇。

化合物Ⅶ:白色粉末，熔点78～80℃，ESI-MS m/z 340(M+)，溶液的pH值=7，碘—碘化铋钾反应阴性。与山嵛酸图谱对照一致，与山嵛酸对照品共薄层层析，Rf值一致，确认为山嵛酸。

3 讨论

本研究采用硅胶柱、ODS柱色谱和重结晶法从苦参500 g/L的乙醇浸膏中分离得到了具有镇咳杀菌活性的松醇［6］，为首次从槐属植物中分离得到，在复方苦参注射液中含量为总固量的±2%;从950 g/L的乙醇提取物中又分离得到3个活性成分，分别是:具有抗肿瘤、抗炎、抗菌、抑菌药效作用［7］的三叶豆紫檀苷，具有抗肿瘤、抗炎抗菌及抑酶作用［8－12］的苦参酮和对革兰氏阳性菌具有较强抑制作用［13］的降苦参酮。

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