超高效液相色谱串联质谱法测定鸡肉与鸡蛋中6种他汀类药物残留

陈吉汉等

摘 要 建立了超高效液相色谱串联质谱法（UPLCMS/MS）测定鸡肉与鸡蛋中6种他汀类药物残留量的方法。采用BEH C18色谱柱， 以甲醇0.1%甲酸5 mmol乙酸铵为流动相， 梯度洗脱分离， 在电喷雾正负离子模式下以多反应监测（MRM）方式检测， 外标法定量。6种他汀类药物检出限（LOD， S/N=3）和定量限（LOD， S/N=10）分别为0.1～0.5 μg/kg和0.3～2.0 μg/kg， 在1.0～100 μg/kg浓度范围内线性良好， 相关系数大于0.9910；鸡肉和鸡蛋样品中20 μg/kg水平的加标回收率分别为80.9%～97.2%和79.0%～87.2%， 相对标准偏差分别为1.3%～10.2%和1.5%～10.7%。本方法应用于市场实际样品检测， 尚未检出阳性样品。

关键词 液相色谱串联质谱； 他汀类药物； 药物残留； 鸡肉； 鸡蛋

1 引 言

他汀类药物泛指羟甲基戊二酰辅酶A（HMGCoA）还原酶抑制剂， 此类药物通过竞争性抑制内源性胆固醇合成限速酶（HMGCoA）还原酶， 阻断细胞内羟甲戊酸代谢途径， 使细胞内胆固醇合成减少， 从而反馈性刺激细胞膜表面（主要为肝细胞）低密度脂蛋白受体数量和活性增加， 降低血清胆固醇水平。因为他汀类药物具有降低血清、肝脏、主动脉中胆固醇功效， 近几年， 他汀类药物开始用于降低家禽肌肉和蛋中胆固醇含量， 研究表明， 喂食他汀类药物能显著降低家禽血浆和蛋中胆固醇的含量 [1～4 ]。相比较β内酰胺类、大环内酯类抗生素和氟喹诺酮类抗菌素这些经常使用并且残留检测也很成熟的兽药而言 [5，6 ]， 他汀类药物在动物生产方面的应用较少， 国内外对于他汀类药物在动物源性食品中残留的情况也鲜有报道。动物体内试验与人类临床试验表明， 服用他汀类药物后， 该类药物可以较长时间以原药形式存在于血浆之中 [7 ]， 且他汀类药物在高温、光照情况下也不易分解 [8，9 ]， 因此在食用含有他汀类药物的禽类产品后， 有可能导致他汀类药物在人体内富集， 由于他汀类药物在降脂的同时， 使用不当也可能会影响肝肾功能，也可能引发横纹肌溶解症等 [10～14 ]， 甚至会有导致肾衰竭的风险 [15 ]， 这使得建立起一套对肉蛋制品中他汀类药物的检测技术势在必行。

本研究以鸡肉与鸡蛋为基质， 建立超高效液相色谱串联质谱法（UPLCMS/MS）同时检测鸡肉和鸡蛋中辛伐他汀Simvastatin（SIM）、洛伐他汀Lovastatin（LOV）、西立伐他汀Cerivastatin（CER）、氟伐他汀Fluvastatin（FLV）、普伐他汀Pravastatin（PRA）以及阿托伐他汀Atorvastatin（ATO）6种他汀类药物残留的方法。本方法简便、快速， 可满足其它家禽肉蛋制品中他汀类药物的检测， 可为建立其它动物源性食品中他汀类药物残留检测提供参考。

2 实验部分

2.1 仪器与试剂

TQS超高效液相色谱串联四极杆质谱联用仪（美国Waters公司）；MilliQ纯水仪（美国Millipore公司）；高速冷冻离心机（美国Sigma公司）；R205旋转蒸发仪（瑞士BCHI公司）；辛伐他汀、洛伐他汀、西立伐他汀钠、氟伐他汀钠盐、普伐他汀钠、阿托伐他汀钙（德国Dr.Ehrenstorfer公司）。

2.2 标准工作配制

将各标准品用甲醇配制成质量浓度为1 mg/L的标准储备液， 并根据需要用甲醇稀释成适当质量浓度的混合标准工作溶液， 于棕色储存瓶中保存。

2.3 样品前处理

称取切碎匀浆过的鸡肉样品或者是100 ℃水煮5 min固态鸡蛋碎末2.000 g 于50 mL 离心管中， 加入10 mL 5%氨化甲醇。涡旋振荡5 min至充分混匀， 超声提取10 min， 10000 r/min离心10 min。吸取5 mL上清液， 35 ℃下旋蒸至干。用1 mL乙腈5 mmol乙酸铵（1 ∶ 9， V/V）溶液溶解并稀释， 用聚四氟乙烯过滤器进行过滤， 供UPLCMS/MS测定。

2.3 色谱条件

Waters ACQUITY UPLC BEH C18液相色谱柱（100 mm×2.1 mm， 1.7 μm）；柱温：35 ℃；流动相：A为甲醇， B为5 mmol乙酸铵0.1%甲酸； 梯度洗脱：0～14 min， 90%～5%B；14～17 min， 5%B；17～18 min， 5%～90%B；18～20 min， 90%B。流速0.3 mL/min；进样体积10 μL。

摘 要 建立了超高效液相色谱串联质谱法（UPLCMS/MS）测定鸡肉与鸡蛋中6种他汀类药物残留量的方法。采用BEH C18色谱柱， 以甲醇0.1%甲酸5 mmol乙酸铵为流动相， 梯度洗脱分离， 在电喷雾正负离子模式下以多反应监测（MRM）方式检测， 外标法定量。6种他汀类药物检出限（LOD， S/N=3）和定量限（LOD， S/N=10）分别为0.1～0.5 μg/kg和0.3～2.0 μg/kg， 在1.0～100 μg/kg浓度范围内线性良好， 相关系数大于0.9910；鸡肉和鸡蛋样品中20 μg/kg水平的加标回收率分别为80.9%～97.2%和79.0%～87.2%， 相对标准偏差分别为1.3%～10.2%和1.5%～10.7%。本方法应用于市场实际样品检测， 尚未检出阳性样品。

关键词 液相色谱串联质谱； 他汀类药物； 药物残留； 鸡肉； 鸡蛋

1 引 言

他汀类药物泛指羟甲基戊二酰辅酶A（HMGCoA）还原酶抑制剂， 此类药物通过竞争性抑制内源性胆固醇合成限速酶（HMGCoA）还原酶， 阻断细胞内羟甲戊酸代谢途径， 使细胞内胆固醇合成减少， 从而反馈性刺激细胞膜表面（主要为肝细胞）低密度脂蛋白受体数量和活性增加， 降低血清胆固醇水平。因为他汀类药物具有降低血清、肝脏、主动脉中胆固醇功效， 近几年， 他汀类药物开始用于降低家禽肌肉和蛋中胆固醇含量， 研究表明， 喂食他汀类药物能显著降低家禽血浆和蛋中胆固醇的含量 [1～4 ]。相比较β内酰胺类、大环内酯类抗生素和氟喹诺酮类抗菌素这些经常使用并且残留检测也很成熟的兽药而言 [5，6 ]， 他汀类药物在动物生产方面的应用较少， 国内外对于他汀类药物在动物源性食品中残留的情况也鲜有报道。动物体内试验与人类临床试验表明， 服用他汀类药物后， 该类药物可以较长时间以原药形式存在于血浆之中 [7 ]， 且他汀类药物在高温、光照情况下也不易分解 [8，9 ]， 因此在食用含有他汀类药物的禽类产品后， 有可能导致他汀类药物在人体内富集， 由于他汀类药物在降脂的同时， 使用不当也可能会影响肝肾功能，也可能引发横纹肌溶解症等 [10～14 ]， 甚至会有导致肾衰竭的风险 [15 ]， 这使得建立起一套对肉蛋制品中他汀类药物的检测技术势在必行。

本研究以鸡肉与鸡蛋为基质， 建立超高效液相色谱串联质谱法（UPLCMS/MS）同时检测鸡肉和鸡蛋中辛伐他汀Simvastatin（SIM）、洛伐他汀Lovastatin（LOV）、西立伐他汀Cerivastatin（CER）、氟伐他汀Fluvastatin（FLV）、普伐他汀Pravastatin（PRA）以及阿托伐他汀Atorvastatin（ATO）6种他汀类药物残留的方法。本方法简便、快速， 可满足其它家禽肉蛋制品中他汀类药物的检测， 可为建立其它动物源性食品中他汀类药物残留检测提供参考。

2 实验部分

2.1 仪器与试剂

TQS超高效液相色谱串联四极杆质谱联用仪（美国Waters公司）；MilliQ纯水仪（美国Millipore公司）；高速冷冻离心机（美国Sigma公司）；R205旋转蒸发仪（瑞士BCHI公司）；辛伐他汀、洛伐他汀、西立伐他汀钠、氟伐他汀钠盐、普伐他汀钠、阿托伐他汀钙（德国Dr.Ehrenstorfer公司）。

2.2 标准工作配制

将各标准品用甲醇配制成质量浓度为1 mg/L的标准储备液， 并根据需要用甲醇稀释成适当质量浓度的混合标准工作溶液， 于棕色储存瓶中保存。

2.3 样品前处理

称取切碎匀浆过的鸡肉样品或者是100 ℃水煮5 min固态鸡蛋碎末2.000 g 于50 mL 离心管中， 加入10 mL 5%氨化甲醇。涡旋振荡5 min至充分混匀， 超声提取10 min， 10000 r/min离心10 min。吸取5 mL上清液， 35 ℃下旋蒸至干。用1 mL乙腈5 mmol乙酸铵（1 ∶ 9， V/V）溶液溶解并稀释， 用聚四氟乙烯过滤器进行过滤， 供UPLCMS/MS测定。

2.3 色谱条件

Waters ACQUITY UPLC BEH C18液相色谱柱（100 mm×2.1 mm， 1.7 μm）；柱温：35 ℃；流动相：A为甲醇， B为5 mmol乙酸铵0.1%甲酸； 梯度洗脱：0～14 min， 90%～5%B；14～17 min， 5%B；17～18 min， 5%～90%B；18～20 min， 90%B。流速0.3 mL/min；进样体积10 μL。

摘 要 建立了超高效液相色谱串联质谱法（UPLCMS/MS）测定鸡肉与鸡蛋中6种他汀类药物残留量的方法。采用BEH C18色谱柱， 以甲醇0.1%甲酸5 mmol乙酸铵为流动相， 梯度洗脱分离， 在电喷雾正负离子模式下以多反应监测（MRM）方式检测， 外标法定量。6种他汀类药物检出限（LOD， S/N=3）和定量限（LOD， S/N=10）分别为0.1～0.5 μg/kg和0.3～2.0 μg/kg， 在1.0～100 μg/kg浓度范围内线性良好， 相关系数大于0.9910；鸡肉和鸡蛋样品中20 μg/kg水平的加标回收率分别为80.9%～97.2%和79.0%～87.2%， 相对标准偏差分别为1.3%～10.2%和1.5%～10.7%。本方法应用于市场实际样品检测， 尚未检出阳性样品。

关键词 液相色谱串联质谱； 他汀类药物； 药物残留； 鸡肉； 鸡蛋

1 引 言

他汀类药物泛指羟甲基戊二酰辅酶A（HMGCoA）还原酶抑制剂， 此类药物通过竞争性抑制内源性胆固醇合成限速酶（HMGCoA）还原酶， 阻断细胞内羟甲戊酸代谢途径， 使细胞内胆固醇合成减少， 从而反馈性刺激细胞膜表面（主要为肝细胞）低密度脂蛋白受体数量和活性增加， 降低血清胆固醇水平。因为他汀类药物具有降低血清、肝脏、主动脉中胆固醇功效， 近几年， 他汀类药物开始用于降低家禽肌肉和蛋中胆固醇含量， 研究表明， 喂食他汀类药物能显著降低家禽血浆和蛋中胆固醇的含量 [1～4 ]。相比较β内酰胺类、大环内酯类抗生素和氟喹诺酮类抗菌素这些经常使用并且残留检测也很成熟的兽药而言 [5，6 ]， 他汀类药物在动物生产方面的应用较少， 国内外对于他汀类药物在动物源性食品中残留的情况也鲜有报道。动物体内试验与人类临床试验表明， 服用他汀类药物后， 该类药物可以较长时间以原药形式存在于血浆之中 [7 ]， 且他汀类药物在高温、光照情况下也不易分解 [8，9 ]， 因此在食用含有他汀类药物的禽类产品后， 有可能导致他汀类药物在人体内富集， 由于他汀类药物在降脂的同时， 使用不当也可能会影响肝肾功能，也可能引发横纹肌溶解症等 [10～14 ]， 甚至会有导致肾衰竭的风险 [15 ]， 这使得建立起一套对肉蛋制品中他汀类药物的检测技术势在必行。

本研究以鸡肉与鸡蛋为基质， 建立超高效液相色谱串联质谱法（UPLCMS/MS）同时检测鸡肉和鸡蛋中辛伐他汀Simvastatin（SIM）、洛伐他汀Lovastatin（LOV）、西立伐他汀Cerivastatin（CER）、氟伐他汀Fluvastatin（FLV）、普伐他汀Pravastatin（PRA）以及阿托伐他汀Atorvastatin（ATO）6种他汀类药物残留的方法。本方法简便、快速， 可满足其它家禽肉蛋制品中他汀类药物的检测， 可为建立其它动物源性食品中他汀类药物残留检测提供参考。

2 实验部分

2.1 仪器与试剂

TQS超高效液相色谱串联四极杆质谱联用仪（美国Waters公司）；MilliQ纯水仪（美国Millipore公司）；高速冷冻离心机（美国Sigma公司）；R205旋转蒸发仪（瑞士BCHI公司）；辛伐他汀、洛伐他汀、西立伐他汀钠、氟伐他汀钠盐、普伐他汀钠、阿托伐他汀钙（德国Dr.Ehrenstorfer公司）。

2.2 标准工作配制

将各标准品用甲醇配制成质量浓度为1 mg/L的标准储备液， 并根据需要用甲醇稀释成适当质量浓度的混合标准工作溶液， 于棕色储存瓶中保存。

2.3 样品前处理

称取切碎匀浆过的鸡肉样品或者是100 ℃水煮5 min固态鸡蛋碎末2.000 g 于50 mL 离心管中， 加入10 mL 5%氨化甲醇。涡旋振荡5 min至充分混匀， 超声提取10 min， 10000 r/min离心10 min。吸取5 mL上清液， 35 ℃下旋蒸至干。用1 mL乙腈5 mmol乙酸铵（1 ∶ 9， V/V）溶液溶解并稀释， 用聚四氟乙烯过滤器进行过滤， 供UPLCMS/MS测定。

2.3 色谱条件

Waters ACQUITY UPLC BEH C18液相色谱柱（100 mm×2.1 mm， 1.7 μm）；柱温：35 ℃；流动相：A为甲醇， B为5 mmol乙酸铵0.1%甲酸； 梯度洗脱：0～14 min， 90%～5%B；14～17 min， 5%B；17～18 min， 5%～90%B；18～20 min， 90%B。流速0.3 mL/min；进样体积10 μL。