HPLC法快速测定甜叶菊中瑞鲍迪苷A*

张友财 俞坚 董雪瑞 朱军林 娄泽楠

（杭州职业技术学院，浙江杭州310018）

HPLC法快速测定甜叶菊中瑞鲍迪苷A*

张友财**俞坚 董雪瑞 朱军林 娄泽楠

（杭州职业技术学院，浙江杭州310018）

建立以甜叶菊叶片为原料，采用超声萃取法用体积浓度70%的乙醇对瑞鲍迪苷A进行提取，使用高效液相色谱仪检测甜叶菊样品液中瑞鲍迪苷A含量的方法。采用-NH2基柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流动相为乙腈与水体积比80∶20，流速1.2 mL/min，紫外检测波长210 nm，进样量15 μL。甜叶菊中瑞鲍迪苷A分别在纯水、体积浓度70%乙醇、80%乙腈中提取得率为10.25 mg/g、11.52 mg/g、13.49 mg/g，范围内线性关系良好相关系数R2=0.999 9。采用体积浓度70%乙醇对瑞鲍迪苷A进行提取，此方法安全有效、操作简单、定量准确。

甜叶菊；瑞鲍迪苷A；超声萃取；高效液相色谱

甜菊糖是天然低热量高倍甜味剂，被誉为“世界第三糖”。甜菊糖主要含有甜菊糖苷、瑞鲍迪苷A、瑞鲍迪苷C等8种成分。其中，瑞鲍迪苷A是甜味品质最好的成分。甜菊糖甜度是蔗糖350～400倍，而热量仅为蔗糖的1/300。目前报道甜菊糖有抗糖尿病、降血压、抗菌抗病毒、抗炎等功能。因此，饮料中用瑞鲍迪苷A替代蔗糖，可使饮料低糖化。随着人们越来越崇尚保健和安全食品，甜菊糖因其具有低热量、安全、天然、保健等优点，将成为21世纪保健食品消费方向，成为未来甜味剂发展方向。

我国尚未制定食品甜菊糖苷国家标准检测方法，因此灵敏度高、特异性强、简便易行的甜菊糖苷分析方法亟待建立。目前甜菊糖苷检测方法有重量分析法、分光光度法、薄层色谱法、毛细管电泳法。本文采用超声萃取瑞鲍迪苷A，用HPLC绘制瑞鲍迪苷A标准曲线，最终检测出样品溶液中瑞鲍迪苷A含量。该方法对瑞鲍迪苷A提取安全有效、操作简单、定量准确。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

甜叶菊叶片，杭州艺福堂茶叶有限公司；瑞鲍迪苷A标准品，实验室自制；乙醇，分析纯，杭州萧山化学试剂厂；乙腈，色谱纯，美国天地有限公司；纯水，实验室自制。

1.2 仪器与设备

KQ-300E型超声波清洗器（40 Hz，300 W），昆山市超声仪器有限公司；BT124S万分之一电子天平，北京赛多利斯天平有限公司；Agilent1200高效液相色谱仪，检测器为紫外检测器，上海天普分析仪器有限公司；DHG-9140A型电热恒温鼓风干燥箱，上海益恒实验仪器有限公司。

1.3 液相色谱仪分析条件

色谱柱：-NH2基柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈与水体积比80∶20；流速：1.2mL/min；检测器：紫外检测器，波长210nm；进样量：15μL。

1.4 试验方法

1.4.1 瑞鲍迪苷A提取

将甜菊叶粉碎，过80目筛，称取3份，每份1.00 g，干燥30 min至恒重，分别置于20.0 mL的纯水、乙醇、乙腈中，超声提取20 min。计算瑞鲍迪苷A的提取率。

式中：η——瑞鲍迪苷A的提取率，%；

m1——瑞鲍迪苷A的质量，g；

m2——干甜菊苷的质量，g。

1.4.2 样品液制备

将样品分别进行抽滤，取滤液，移取10.0 mL至25 mL容量瓶中分别用纯水、乙醇和乙腈定容。再分别移取10.0 mL，置于25 mL容量瓶中分别定容。

1.4.3 标准溶液制备

将标准品瑞鲍迪苷A置于105℃干燥箱烘2 h，分别称取60 mg、45 mg、30 mg、15 mg，均用流动相溶解，稀释至25 mL。

1.4.4 标准曲线绘制

测定瑞鲍迪苷A标准液，记录标准品峰面积，计算标准液浓度，并绘制标准曲线。

2 结果与分析

2.1 线性关系考察

按照标准曲线绘制方法，重复进样3次，进样量15 μL，记录标准品峰面积，以峰面积和质量浓度建立标准曲线。回归方程Y=0.000 4X+0.020 2，R2=0.999 9。结果表明，在0.6 mg/mL～2.4 mg/mL范围内线性关系良好。

2.2 精密度试验

精密吸取1.2 mg/mL瑞鲍迪苷A15 μL，按相同色谱条件进行HPLC分析，重复进样3次，测得结果瑞鲍迪苷A峰面积RSD为1.93%，表明仪器精密度良好。

2.3 乙醇体积浓度对瑞鲍迪苷A提取率的影响

分别称取4份1.00 g样品粉末，分别用20.0 mL体积浓度60%、70%、80%、90%的乙醇溶解，超声提取30 min，抽虑，进行色谱分析，计算瑞鲍迪苷A提取率，分别为7.40 mg/g、10.56 mg/g、10.14 mg/g、5.53 mg/g。

2.4 不同溶剂对瑞鲍迪苷A提取结果

选取不同的溶剂，水、体积浓度70%乙醇、体积浓度80%乙腈对甜菊叶进行提取，结果显示不同溶剂提取对瑞鲍迪苷A含量影响很大，体积浓度70%乙醇和体积浓度80%乙腈作溶剂得到瑞鲍迪苷A含量高。由于水提时杂质多，而乙腈成本较高且极易挥发，具有毒性，因此我们选取体积浓度70%乙醇作提取溶剂。体积浓度70%乙醇提取瑞鲍迪苷A的色谱图见图1。

图1 体积浓度70%乙醇作提取剂所得提取液的液相色谱图

3 结论

研究结果表明，采用超声萃取法可以增加甜菊糖苷的提取率、缩短浸提时间。试验分析表明，用体积浓度70%乙醇做提取剂安全可靠，且本法操作简单、定量准确，为检测瑞鲍迪苷A提供良好的方法。

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表1 平行样品的测定

2.3 样品加标回收率

取一批已经测出含量的样品，加入标准溶液，其中一份加入标准溶液后使它的含量接近线性范围的上限，一份加入标准溶液后使它的含量接近检测下限，另一份加入标准溶液适量，然后测定样品中磷含量，并计算样品加标回收率。回收率测定结果见表2。

表2 加标回收试验

2.4 与标准方法的比较

对同一种样品，处理方法相同，测定方法不同。5种样品用本改进法和国标法分别进行测定，结果见表3。从表3可以看出，本法与国标法测定结果基本吻合。

表3 2种方法测定5种食品中磷的含量的结果比较

3 小结

通过改进法测定食品中磷的含量，大大缩短了样品前处理的时间，用抗坏血酸代替国标方法中的对苯二酚避免了有毒试剂对化验员的危害及环境的污染。本方法灵敏度高，检出限、精密度、回收率都比较好，可以适于食品中磷元素含量的测定。

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Identification of rebandiodside A in stevia by HPLC*

ZHANG You-cai*YU Jian DONG Xue-rui ZHU Jun-lin LOU Ze-nan
（Hangzhou vocational and technical college，Zhejiang Hangzhou 030006，China）

With Stevia as the raw material,the extraction of rebandiodside A(RA)by ultrasonic extraction with70% ethanol was researched;A HPLC method for determination of rebandiodside A(RA)in stevia was developed.NH2column(250 mm×4.6 mm，5 μm)was used.The mobile phase was composed of acetonitrile and water（80∶20,v/v），at a flow rate of 1.2 mL/min；The detection wavelength was 210 nm.injection volume was 15 μL.The extraction rates were 10.25 mg/g，11.52 mg/g，13.49 mg/g in pure water,70%ethanol,and 80% acetonitrile separately.The calibration curves had good linearity.Correlative coefficient R2=0.999 9.The method which was characterized by simplicity, higher accuracy,provided a good method for the determination of rebandiodside A in stevia.

stevia；rebandiodside A；ultrasonic extraction；HPLC

TS207.3

A

1673-6044（2014）04-0060-03

10.3969/j.issn.1673-6044.2014.04.017

浙江省新苗人才计划项目（2013R450006）。

**张友财，男，1993年出生，杭州职业技术学院分析检测专业在读专科。

2014-10-24