DC-CIK治疗血液肿瘤的研究进展

张慧敏 高习华 刘清池

由于环境污染、电离辐射及食品农药残留等因素，血液肿瘤发病率逐年上升。随着现代生物技术如分子生物学、免疫学等基础学科的发展以及人们对血液肿瘤发病机制认识的不断深入，生物治疗孕育而生，并有望成为继化疗、造血干细胞移植后治疗血液肿瘤的又一有力武器。其中以DC-CIK为基础的细胞免疫治疗，成为国内外研究的热点，已广泛用于多系统肿瘤的治疗，本文就DC-CIK治疗血液肿瘤的研究现状做一综述。

1 细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine induced killer cells，CIK)

CIK细胞最早是Schmidt-wolf等［1］于1991年发现在外周血淋巴细胞中加入 IFN-γ、IL-2、CD3McAb，可培养出大量CD3和CD56双阳性的细胞毒T淋巴细胞。CIK细胞具有增殖能力强、杀瘤活性高、杀瘤谱广及非主要组织相容性复合体(MHC)限制性杀瘤等特点，能广泛杀伤自体、异体以及耐药肿瘤细胞的作用［2，3］。其效应细胞CD3+CD56+细胞在正常人外周血中仅占1%～5%，在体外经多因子培养后可迅速增至1 000倍以上。

2 树突状细胞(dendritic cells，DC)

DC细胞是体内最重要的、功能最强的抗原提呈细胞，肿瘤患者因免疫功能缺陷不能有效提呈肿瘤抗原，DC可以有效的诱导静止T细胞的增殖和应答，促进细胞毒性T淋巴细胞和辅助性T淋巴细胞的生成，是机体免疫应答的启动者和参与者［4］。成熟的DC可通过MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ类分子及表面标志白细胞分化抗原CD1分子途径提呈肿瘤抗原，有效抵制肿瘤细胞的免疫逃逸机制［5］。

3 DC-CIK细胞的协同抗肿瘤作用

实验表明，DC-CIK共培养的抗肿瘤效应明显高于单纯CIK细胞或DC细胞［6］。DC-CIK细胞的抗肿瘤机制:(1)CIK细胞在体内受某些淋巴因子作用后，可以释放大量具有细胞毒性的胞质颗粒，直接破坏肿瘤细胞。(2)DC-CIK细胞可以分泌多种细胞因子(IFN-γ、TNF-α和IL-2等)，不仅对肿瘤细胞有直接抑制作用，还可以通过调节免疫系统间接杀伤肿瘤细胞。(3)CIK细胞有抗凋亡基因表达的作用，CIK细胞表达FasL，通过与肿瘤细胞膜表达的Fas结合，诱导肿瘤细胞凋亡［7］，并且能对肿瘤细胞持久地发挥作用。

4 DC-CIK治疗血液肿瘤的基础和临床研究

DC-CIK作为一种新的过继免疫细胞疗法可以修复宿主受损的免疫系统、提高患者自身抗肿瘤细胞能力，从而有效地清除微小残留病(MRD)［8］，预防血液肿瘤复发。

4.1 DC-CIK在急性白血病(AL)中的研究 白血病干细胞(LSC)对传统的放、化疗均不敏感且存在多药耐药，成为白血病复发的主要根源。张阳等［9］实验研究表明:DC-CIK可诱导急性髓细胞白血病细胞株KG-1a细胞凋亡，并对其中LSC(CD34+CD38－CD123+)有杀伤作用，与CIK组、DC-CIK组比较，尤以抗原负载的DC-CIK组(Ag-DC-CIK)LSC比例降低显著。在国外一个Ⅰ/Ⅱ期临床试验中，5例化疗后获得完全缓解(CR)的急性髓系白血病(AML)患者接受抗原负载DC细胞输注治疗后4例观察到明显的抗白血病T细胞反应。2例患者已维持CR超过12个月［10］。国内学者观察中药配合DC-CIK治疗20例CR期急性白血病患者，标志基因转阴、达分子生物学缓解4例，微小残留白血病转阴性者3例;治疗后3年持续CR率为75%，中位CR期25个月［11］。输注后除5例出现一过性发热外无其他严重不良反应。邓琦等［12］临床观察34例CR的AL患者接受DC、CIK治疗，治疗结束后均处于血液学和遗传学缓解状态，T细胞亚群、IL-2、IL-12、TNF-α、IFN-γ 等细胞因子水平、微小残留病灶检测取得满意结果，且DC、CIK治疗同时可促进化疗后骨髓造血功能的恢复。周东风等［13］观察了47例CR的AL患儿接受DC-CIK治疗61例次，44例患儿持续完全缓解(CCR)，CCR率达93.62%，治疗前MRD阳性的9例，8例治疗后转阴。23例次出现发热，10例次出现皮疹，无其他不良反应。刘清池等［14］将48例形态学达完全缓解、未达分子生物学完全缓解的AL患者分成单独化疗组及化疗联合DC-CIK组，研究结果显示:联合组微小残留白血病清除率及3年以上CCR率明显提高，CD4+/CD8+比值显著上升，未见严重不良反应。

4.2 DC-CIK在慢性粒细胞白血病(CML)中的研究王鸿鹄等［15］将CML患者外周血单个核细胞来源的DC在体外用CML细胞冻融抗原(CLA)致敏，再与CML患者的 CIK细胞共同培养，应用乳酸脱氢酶(LDH)释放法观察其对自身CML细胞、K562细胞和人淋巴瘤Raji细胞的杀伤活性(CIK+CLA-DC组)，与未致敏的DC+CIK(CIK+DC组)，CIK组及CIK+CLA组进行比较。结果表明:CIK+CLA-DC组杀伤活性最强。CIK+CLA-DC组对自身CML细胞的杀伤活性明显高于对K562细胞和Raji细胞的杀伤活性。CLA抗原致敏DC介导的细胞毒作用具有较强的特异性。

4.3 DC-CIK在造血干细胞移植(HSCT)后的研究Introna等［16］对接受异基因 HSCT后的患者(4例AML、3例霍奇金淋巴瘤、2 例 MDS、1 例 CML、1例ALL)输注不同量的供者来源的CIK细胞，6例疾病进展，3例完全缓解，1例部分缓解，1例病情稳定，可见，异体CIK细胞应用于临床具有可行性。苏毅等［17］观察初治AML CR1期、接受自体HSCT联合负载自体白血病抗原的DC-CIK细胞治疗的患者32名，对照组:同期未采用DC-CIK细胞治疗的AML CR1期移植患者21例，实验组患者CD3+CD8+和CD3+CD56+细胞比例较对照组均有所上调，分泌IFN-γ的水平较对照组明显升高，除一过性发热、寒颤外，无其他不良反应。自体HSCT后经DC-CIK细胞输注，3年的总生存率为75.0%(24/32)，较同期未使用负载白血病抗原DCCIK细胞的自体HSCT患者的生存率47.6%明显提高。龚奕等［18］采用自体外周血移植联合自身白血病细胞冻融抗原负载的DC-CIK输注治疗50例AML，与既往只接受自体外周血移植但未输注DC-CIK的52例患者进行比较分析，除4例在输注过程中出现一过性畏寒发热反应外其余均未出现不适反应。随访6～24个月，输注DC-CIK组患者总体生存率、无病生存率均高于同期未输注DC-CIK组。薛重重等［19］应用DCCIK细胞免疫治疗自体HSCT后完全缓解血液肿瘤患者12例，7例仍完全缓解(CR)，中位CR期18(5～32)个月，2例为非常好的部分缓解(VGPR)或疾病稳定(SD)，3例复发或疾病进展，其中1例复发死亡。证明DC-CIK细胞治疗有助于清除移植后微小残留病和提高患者生存率。

4.4 DC-CIK在多发性骨髓瘤(MM)中的研究 Mar-ten等［20］观察负载了肿瘤特异性抗原的DC-CIK细胞对多发性骨髓瘤细胞的杀伤能力大大增强。罗云等［21］用LDH释放法检测:异基因CIK细胞及骨髓瘤细胞裂解物致敏的健康供者DC-CIK细胞均对骨髓瘤U266细胞有杀伤活性，且在相同效靶比时后者比前者杀伤活性更强。Lin等［22］给予1例71岁伴有肺癌的MM患者CIK过继治疗，治疗后患者免疫功能改善，生命质量提高，MM和肺癌病灶长期稳定，体现了良好的疗效。

4.5 DC-CIK在淋巴瘤中的研究 艾丽梅等［23］在DC-CIK抗淋巴瘤细胞免疫效应研究中，分为DC、DCT、CIK和DC-CIK四组，DC-CIK组细胞因子IL-12、IL-17 和 IFN-γ 分泌量、CD8+、CD3+/CD56+细胞及对人淋巴瘤细胞株Raji杀伤活性均较其他三组强，得出结论:DC-CIK细胞抗淋巴瘤免疫效应与分泌大量的细胞因子和产生细胞毒性细胞有关。在临床应用中，Leemhuis等［24］对9例接受自体HSCT后复发的非霍奇金淋巴瘤及霍奇金淋巴瘤患者进行自体CIK细胞治疗，结果显示，2例病情稳定，2例获得部分缓解，也进一步证实CIK细胞体外扩增的可行性及输注安全性。孙薏等［25］用负载自身肿瘤裂解物的DC-CIK治疗9例复发难治性非霍奇金淋巴瘤患者，5例影像学复查显示肿瘤较治疗前明显缩小，除一过性发热、畏寒外未见其他不良反应。9例患者随访时间6～18个月，中位随访时间11个月。

DC与CIK共培养后，提高了细胞的增殖速度、杀伤活性及特异性，DC-CIK在恶性血液病治疗中具有广泛的应用前景，除发热外无其它明显毒副作用，但作为一种新的免疫治疗手段，仍存在很多问题需要更加深入的研究，如DC-CIK的最佳培养技术、应用剂量、回输途径、免疫监测指标、临床疗效评价指标及联合应用最佳组合等尚待进一步探讨、规范和统一。

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