0.3%氯化钠溶液在血性胸水抗酸杆菌检测中的应用

卢立荣，卢立青，肖小敏

(1、吉安市第三人民医院检验科,江西 吉安343000；2、新干县沂江乡卫生院，江西 新干；3、吉安市樟山乡卫生院，江西 吉安)

正常人胸膜腔内每天约有500～1000ml的液体形成和吸收，通常情况下，胸膜腔内有少量液体，在呼吸运动时起润滑作用，当发生某种病理情况影响到胸膜，无论是壁层胸膜产生胸水或是脏层胸膜吸收胸水的速率有变化，都可形成胸水，如胸膜炎症、肿瘤、门静脉肝硬化，结核是形成胸水的主要病因[1]。

为了诊断胸水的性质，明确病因，临床上常要求对胸水做抗酸染色查找抗酸杆菌，目前临床上应用广泛的是直接离心沉淀涂片法，但多数送检的胸水中含有大量的红细胞，即所谓血性胸水，其导致抗酸染色不易着色，抗酸杆菌检出率低，笔者在临床工作中发现使用0.3%的氯化钠溶液预处理血性胸水可以使抗酸染色更易着色，提高抗酸杆菌检出率，现介绍如下。

1 材料与方法

1.1 材料来源 本院临床送检经过乙二胺四乙酸二钾抗凝处理的血性胸水标本73份。

1.2 仪器 常州平凡仪器仪表有限公司 TDZ4-WS型离心机。

1.3 试剂 石碳酸复红染液，亚甲蓝染液，2%的盐酸乙醇，0.3%氯化钠溶液。

1.4 方法 把每份胸水分成两管，其中一管经3000 r/min离心30min取试管底部沉淀物0.01 ml涂于载玻片上10×10mm范围烘干。另一管按1∶10的比例放入0.3%氯化钠溶液，视红细胞的多少可适当增减氯化钠溶液的量，放置5min，溶血后显微镜下观察没有红细胞和碎片，再以3000r/min离心30 min，弃去上清液，按照第一管的方法取试管底部沉淀物0.01ml涂于载玻片上10mm×10mm范围，然后两管均按以下方法染色：(1)滴加石碳酸复红染色液布满胸水液膜，小心加热，出现蒸汽后脱离火焰，保持染色5min；(2)让细流水自玻片左侧的1/3处轻轻冲洗，洗去染色液，沥干剩余水分；(3)自液膜上端外缘滴加2%的盐酸乙醇脱色液，布满液膜，脱色至液膜无红色为止；(4)洗去脱色液，沥干剩余水分，滴加亚甲蓝复染液复染30s；(5)流水洗去复染液，沥干剩余水分，待涂片自然干燥后镜检[2]。

1.5 结果判断 (-)：连续观察300个不同视野，未发现抗酸杆菌；(±)：1～2条/300视野；(1+):3～9条/100视野；(2+):1～9条/10视野；(3+):1～9条/每视野；(4+)≥10 条/每视野。

1.6 统计学方法 采用χ2检验,P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

以找到1～2条抗酸杆菌/300个油镜视野作为阳性。73份血性胸水经直接沉淀涂片法查出抗酸杆菌阳性标本2例，阳性率为2.68%，而加入0.3%氯化钠溶液处理后的涂片查出抗酸杆菌阳性标本6例，阳性率为8.21%。采用χ2检验，P<0.05两者差异有统计学意义。

3 讨论

结核杆菌是引起结核病的病原菌，可侵犯全身各器官，但以肺结核为最多见，并且可扩散至胸腔引起胸膜炎而造成胸腔积液。结核杆菌细长略弯曲，端极钝园，呈单个或分枝状排列，有荚膜、无鞭毛、无芽胞。在陈旧的病灶和培养物中，形态常不典型，可呈颗粒状，串球状，短棒状，长丝形等，临床上检测结核杆菌有分离培养法，多聚酶链反应法(PCR)，涂片抗酸染色法等[4]，但细菌培养法耗时较长，需孵育2～6周方可见到菌落，不利于病人的早期诊断和治疗，PCR有一定条件限制，不适合基层医院，而涂片抗酸染色查找结核杆菌快速、简便、成本低，阳性可作为结核诊断的重要依据。

创伤、恶性肿瘤、结核性积液均可引起血性胸水，血性胸水涂片抗酸染色常作为基层医院的常规检验。在血性胸水中用抗酸染色查找抗酸杆菌时血性胸水中红细胞可盖在抗酸杆菌上面，影响抗酸染色的效果和染色后镜检视野的清晰度，造成漏检。用0.3%氯化钠溶液处理血性胸水，可以使血液中的红细胞在低渗环境中充分裂解。清除血性胸水中的红细胞后，抗酸杆菌与染料结核能力结合增强，利于诊断，提高了抗酸染色阳性的检出率，且该法具有操作简便、快速、价廉，是基层医院的一种有效方法。

[1]王兆宇.多项指标检测在胸腔积液鉴别中的应用[J].实验与检验医学,2008,26(6):629-630.

[2]叶应妩,王毓三,申子瑜.全国临床检验操作规程[M].第3版.南京:东南大学出版社,2006:981－983.

[3]熊立凡,刘成玉.临床检验基础[M].第4版．北京:人民卫生出版社2008:225-232.

[4]李宁,伍严安,胡辛兰,等.结核分枝杆菌的实验室检测方法学评价及耐药情况分析[J].实验与检验医学,2013,31(3):214-216.